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摘要:目的目前认为克隆效率低的主要原因是供体核的不完全重编程(reprogramming)导致在发育过程中一些重要的基因异常表达。本文主要研究表观遗传结构对Igf-2r表达的影响及其在克隆牛发育过程中的作用。方法 首先,运用DNA甲基化转移酶抑制剂5'-脱氧胞苷(5'-azacytidine,5'-AzaC)处理MDBK细胞(牛肾上皮细胞),并通过实时荧光定量PCR方法对Igf-2r基因的表达进行定量分析。在此基础上,应用亚硫酸盐甲基化测序法检测5头克隆牛及1头正常牛脑、肺、心、肝组织Igf-2r印迹调控区DMR 2(DNA differentially methylated region,DMR)及非印迹调控区3'-UTR(3'-untranslated region,UTR)的DNA甲基化水平。结果 5'-aza处理MDBK细胞后,Igf-2r基因的表达上调。正常牛各组织中Igf-2r DMR 2区的DNA甲基化程度差异较大,3'-UTR区较稳定;与正常牛相比,克隆牛DMR 2区的甲基化程度变化较大,3'-UTR区无显著性变化。结论 DNA甲基化修饰影响Igf-2r基因的表达。正常牛不同组织中Igf-2r基因DMR 2区的DNA甲基化程度不同,提示Igf-2r基因的印迹调控方式在不同组织中可能不同。克隆牛发育过程中,调控Igf-2r基因印迹的DMR 2表观结构被明显改变,而非印迹调控区3'-UTR则无明显变化,提示Igf-2r基因印迹调控区被破坏,很可能是导致克隆牛发育异常的一个重要原因。关键词:Igf-2r,表观遗传结构,克隆牛,DNA甲基化,基因印迹 相似文献
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393.
柿果实ACC合成酶cDNA的克隆及其序列分析 总被引:7,自引:0,他引:7
根据其它植物ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase,ACS)氨基酸保守区,设计1组简并引物,用RT-PCR法,从柿(Diospyros kaki Thunb.)果实扩增出3个约1kb左右的cDNA片段,将其克隆至pGEM-T载体上,对这些重组克隆进行序列测定和氨基酸序列推导,DK-ACS1由1101个碱基组成,编码364个氨基酸;DK-ACS2是1086个碱基,编码359个氨基酸;DK-ACS3为1089个碱基,编码363个氨基酸。它们均具有其它植物ACS合成酶中存在的7个保守区和11个不变氨基酸残基,且在多肽水平上有较高的同源性。与番茄LE-ACS2的同源性DK-ACS1是60.5A%,DK-ACS2是70.7%,DK-ACS3为66.9%,与甜瓜CM-ACS1的同源性依次分别是60.4%,72.1%和64.4%。 相似文献
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为测定我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列 ,了解该株分子基础 ,从提取的细胞总RNA逆转录PCR扩增 ,产物纯化后克隆T载体纯化后测序 ,结果证明 ,LR1株全基因组序列由L6 5 33、M36 16、S片段的16 92个核苷酸组成 ,依各自读码框架分别编码 2 15 1、1135、42 9个氨基酸。序列同源比较分析表明 ,LR1毒株与国外HTN型毒株高度同源 ,属同一亚型 ,尤其与HTN代表株 76 - 1183个片段同源率高达 99 3%~ 99 8% ,而与国内的HTN型病毒差异较大 ,同源率仅为 79 4%~ 84 6 %。氨基酸比较也显示了同样的结果。 相似文献
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397.
398.
芽孢杆菌M_(50)产生β甘露聚糖酶的条件研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从土壤中分离到9 株产生β甘露聚糖酶的芽孢杆菌( Bacillus sp .) 。Bacillussp . M50250m L三角瓶摇瓶培养试验,以4 % 的魔芋粉为碳源,1-0 % ( NH4)2SO4 为氮源,0-35 %Na2CO3 ,30 ~34 ℃培养60h 产酶达到高峰。酶活力为180 ~200u/m L。100L 罐发酵,在30 ~32 ℃,1∶0 .75vvm 通气量,200r/min 条件下,发酵液酶活力高达330u/m L。酶的最适反应温度和pH 分别为50 ℃和6-0 ,低于50 ℃,pH5 .0 ~7 .0 酶稳定。Fe3+ 、Al3+ 、EDTA、Hg2+ 对酶有抑制作用,而Ba2+ 、Mn2+ 对酶有激活作用。发酵粗酶液对苎麻精干麻精练,显示对精干麻的半纤维素残胶具有降解作用。 相似文献
399.
芽孢杆菌M50产生β—甘露聚糖酶的条件研究 总被引:16,自引:0,他引:16
从土壤中分离到9株产生β-甘露聚糖酶的芽孢杆菌(Bacillus sp.)。Bacillus sp.M50250mL三角瓶摇瓶培养试验,以4%的魔芋粉为碳源,1.0%(NH4)2SO4为氮源,0.35%Na2CO3,30~34℃培养60h产酶达到高峰。酶活力为180~220u/mL。100L罐发酵,在30~32℃,1:0.75vvm通气量,200r/min条件下,发酵液酶活力高达330u/mL。 相似文献
400.
利用杆状病毒表达系统表达金鱼生长激素I基因 总被引:4,自引:1,他引:4
以不含起始密码ATG的质粒Psxivvi+X3为转移载体,将编码金鱼生长激素I的Cdna插入粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)基因组中,构建了形成多角体的重组病毒株TnNPV—SX+gfGHl21a。该毒株能利用合成多角体XIV串联启动子,在重组病毒感染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)昆虫细胞及银纹夜蛾幼虫中表达金鱼生长激素I基因。感染离体细胞及虫俸后的蛋白SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明.所表达的蛋白分子量为22.5kDa,与理论计算值相符。Westem印迹证实。金鱼生长激素特异蛋白得到表达。 相似文献