HEPES诱导增强HFRS病毒对Vero—E6细胞的致细胞病变作用

本文报道了HEPES诱导增强HFRS病毒对Vero-E_6细胞的致细胞病变作用。病毒悬浮接种E_6细胞,置37℃培养2—8天后在培养液中加适量HEPES,24小时内即见明显的细胞病变出现。细胞病变的特点是感染细胞相互融合形成多核巨细胞或网状结构,有时则出现泡沫样的空泡结构。HEPES诱导增强的细胞病变能被特异抗HFRS病毒免疫血清和单克隆抗体等中和抑制。HEPES的这一特性对建立简便的HFRS病毒实验方法等具有较大的意义。     

人生长激素基因在昆虫细胞中的表达(英文)

近年发展起来的昆虫细胞－杆状病毒基因工程系统具有良好的优越性：（１）表达产量高,（２）产物的免疫原性、功能性类似于天然产物,（３）适用于悬浮及无血清培养。本实验中,将外源基因ｈＧＨ克隆至质粒ｐＶＬ１３９３,形成转移载体ｐＶＬ１３９３／ｈＧＨ（Ｆｉｇ．１＆２）。与昆虫核多角体病毒ＡｃＮＰＶ基因组ＤＮＡ共转染秋粘虫细胞Ｓｆ９（Ｆｉｇ．３）,ｐＶＬ１３９３／ｈＧＨ与ＡｃＮＰＶ基因组ＤＮＡ发生同源重组,取代多角体蛋白基因。经空斑分析纯化得到不含多角体,单一表达的重组病毒ｒＡｃＶｈＧＨ（Ｆｉｇ．４）,感染滴度达到２．０３ｘ１０８ＰＵＦ／ｍＬ。经反复实验,１０５细胞／ｍＬ感染６～７天后收获培养上清液,可得到表达量为４０μｇ／ｍＬ的ｈＧＨ蛋白（Ｆｉｇ．５,６＆７）。     

乙型脑炎病毒减毒中间株SA14—12—1—7基因组全序列的测定

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14 12 1 7株进行全序列测定和分析 ,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制。根据已发表的SA14 14 2株及SA14 株的序列 ,设计 6对重叠引物 ,涵括整个乙脑病毒的基因组 ,通过RT PCR扩增出SA14 12 1 7株的各cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测序。结果表明SA14 12 1 7株基因组全序列长 10 976个核苷酸 ,从 96到 10 394为一个长开放读码框 ,编码 3432个氨基酸。与野毒株SA14 和疫苗株SA14 14 2的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,E区有 5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同 ,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关。此外 ,NS3、NS5和 3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关。综上所述 ,乙脑病毒减毒中间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性。全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理具有重要意义     

三种稻飞虱体内类酵母共生菌18S rDNA和 ITS 5.8S rDNA序列克隆及进化分析

为研究水稻3种主要害虫灰飞虱Laodelphax striatellus、 褐飞虱Nilaparvata lugens和白背飞虱Sogatella furcifera体内类酵母共生菌（yeast-like symbiotes, YLS）的种属地位及与寄主的进化关系, 测定了其体内YLS的18S rDNA及ITS-5.8S rDNA的全长序列。基于3种稻飞虱体内YLS的18S rDNA序列比对表明, 褐飞虱YLS和白背飞虱YLS的一致性比其与灰飞虱YLS的高（褐飞虱YLS和白背飞虱YLS为98.91%, 灰飞虱YLS和褐飞虱YLS为95.74%, 灰飞虱YLS和白背飞虱YLS为96.02%）, 而基于ITS-5.8S rDNA序列比对, 灰飞虱YLS和白背飞虱YLS的一致性比其与褐飞虱YLS的要高（白背飞虱YLS和灰飞虱YLS为99.57%, 灰飞虱YLS和褐飞虱YLS为91.91%, 白背飞虱YLS和褐飞虱YLS为90.46%）。基于真菌18S rDNA和ITS-5.8S rDNA的系统发育树均表明, 3种稻飞虱体内YLS与其他已知真菌进化关系较远。本研究证实了昆虫真菌类共生菌与寄主形成了长期的进化关系, 从而形成了不同于已知真菌的分类地位。     

脱氧核酶的研究进展

脱氧核酶是的年来利用体外分子进化技术合成的一种具有催化功能的单链DNA片段,它能催化RNA特定部位的切割反应,从mRNA水平对基因灭活,从而调控蛋白的表达,可能成为对抗RNA病毒感染、肿瘤等疾病的新型工具。     

Ca~(2+)信号调控细胞死亡的亚细胞和分子机制

Ca2+在细胞死亡过程中起至关重要的作用。胞浆和/或线粒体(MT)内Ca2+超载不但是多种原因、多种方式细胞死亡的起始因素,也可通过激活蛋白酶、核酸酶、磷脂酶等酶,直接或间接通过与Bcl-2家族蛋白等重要调节因素的相互作用,全程参与死亡生化反应。内质网(ER)释放Ca2+与MT、溶酶体(LS)、细胞核相互作用,激活多种细胞死亡信号转导通路,导致细胞凋亡、坏死和自噬性细胞死亡。本文重点介绍Ca2+信号在亚细胞和分子水平调控细胞死亡的机制研究方面的最新进展。     

重组酶聚合酶扩增结合CRISPR-Cas12a快速检测十足目虹彩病毒1方法的建立

[背景] 十足目虹彩病毒1（Decapod Iridescent Virus 1,DIV1）可感染南美白对虾、中国对虾和日本对虾等,是危害对虾养殖业的主要病毒之一。当前高效、快速、简便地检测对虾是否感染DIV1是减少其发生和危害的重要途径。[目的] 将成簇的规律间隔短回文重复序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR）及其相关蛋白12a （CRISPR Associated Protein 12a,Cas12a）,即CRISPR-Cas12a系统,与重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）技术相结合,建立快速检测DIV1的方法（RPA-Cas12a）,并探讨该方法在实际样本检验中的应用价值。[方法] 通过提取DIV1 DNA,设计其RPA引物、crRNA及报告探针,优化并建立RPA结合CRISPR-Cas12a的快速检测方法,进一步分析该方法检测DIV1的灵敏度与特异性,并比较建立的方法与qPCR法的一致性。[结果] 建立的RPA-Cas12a快速检测方法可在40 min内实现对虾样本DNA中DIV1的检测,检测限为10 copies/reaction。用该方法分别对对虾白斑综合征病毒（White Spot Syndrome Virus,WSSV）、传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV）、虾肝肠胞虫（Enterocytozoon Hepatopenaei,EHP）及DIV1进行检测,结果仅DIV1发生特异性反应,而WSSV、IHHNV和EHP的检测结果均为阴性。采用RPA-Cas12a检测61份实际样本,结果均与qPCR检测法的阳性检出率一致。[结论] 建立的RPA-Cas12a方法检测十足目虹彩病毒1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,为十足目虹彩病毒1的快速检测提供了新的工具。     

“甜味糯”新型鲜食玉米及其代表品种京科糯768的选育

本研究阐述了“甜味糯”新型鲜食糯玉米极其代表品种的培育。通过对糯质玉米的种质创新和改良提升,实现果穗上的所有籽粒都是糯质,在适采期内,糯质籽粒糖度值平均可达到12度以上,显著高于普通糯玉米,带有明显的甜味,形成“糯中有甜”的特殊口感品质。北京市农林科学院鲜食玉米创新团队从2011年开始“甜味糯”种质创新和品种培育工作,利用创新集成的“大群体、严选择、单株配合力测定”以及“优系聚合”等育种方法,并通过大量田间表型鉴选和籽粒糖度、口感品质等鉴定评价,创制选育出“甜味糯”新型玉米优良自交系ZN3。以ZN3为骨干亲本,组配育成京科糯768等“甜味糯”新型鲜食糯玉米系列新品种,鲜籽粒糖度达14度以上,具有籽粒甜度高、口感品质好、高产稳产、多抗广适、采收期长等综合优点。京科糯768被评为“全国十大优秀糯玉米品种”,于2021年通过四大生态区国审,适宜在全国鲜食玉米生态区种植。“甜味糯”玉米将是我国未来鲜食糯玉米的一个重要发展方向。     

银杏内生真菌No.1028的培养条件及其代谢产物对作物真菌病害的抑制作用

通过大量筛选从银杏茎中分离到一株内生真菌(编号为No.1028),其代谢产物对重要作物真菌病害病原菌具有明显的抑制作用。结果表明:离体条件下内生真菌发酵液对番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌、菜豆炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌均有较强的抑制作用,对上述不同病原菌的抑制率分别为:66.7%、48.3%、64.6%、36.5%、57.1%和23%。同时也研究了不同碳源、氮源、无机离子对内生真菌No.1028生物学特性和生长的影响。结果发现玉米粉、黄豆饼粉比较适合其生长和抑菌代谢产物的合成,Na+对抑菌代谢产物的合成有较明显的促进作用。