嗜热II型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A2...     

流行性出血灭活疫苗二针与三针接种效果的比较

本文研究人体接种流行性出血热灭活疫苗总量为三毫升时,比较观察分三次接种和分二次接种的反应及免疫效果。试验分三组进行,第一组根据常规方法０、７、２８天免疫三针,每针１毫升;第二组０、２８天免疫二针,每针１．５毫升;第三组０、２８天免疫二针,和一针２毫升,第二针１毫升。结果三组均未发生全身或局部的不良反应,未针１５－３０天,采血测定ＥＨＦ中和抗体,阳转率分别为８７．１％、７９．４％和７６．６％经统计处     

土壤杆菌sp．S－1231胞外多糖的流变学性能研究

从北京地区土样中分离到一株土壤杆菌Agrobacterium sp．s-1231。在适宜条件下,经4天培养,它能以糖类为底物产生24g／L胞外多糖。在相同浓度时,该多糖能产生比黄单胞菌多糖Kelzan更高的粘度。0．2％、O．5％和1．O％该多糖的粘度分别是840、5200和15000 cp(Brookfield LVF粘度计,6rpm)。除具良好的剪切稀化性能及在广范pH内呈现极好的稳定性外,它还可与高浓度盐溶液配伍并呈现与在淡水中相似的剪切稀化性能。特别是它还具有可与阳离子染料配伍而不生成沉淀的特性。与其他微生物多糖不同,在65℃前,该多糖的粘度维持恒定,但升至很窄的温度范围70—75℃间,粘度急剧下降。     

各种类型流行性出血热灭活疫苗的免疫性比较研究

本文对三种不同类型的出血热疫苗的免疫性进行了比较研究,其中沙鼠肾细胞疫苗由β—丙内酯灭活不加任何佐剂,地鼠肾细胞和鼠脑提纯疫苗由福尔马林灭活加氢氧化铝佐剂。三种疫苗经抗原量测定结果只有沙鼠肾细胞疫苗能测出较高的血凝素。家兔经三种疫苗免疫二针后只有沙鼠肾细胞疫苗能测出血抑抗体。中和抗体测定的结果亦以该疫苗的抗体反应最好,全部阳转,滴度也最高(1:20—≥320)。对家兔和长爪沙鼠免疫后用野鼠型病毒攻击结果,三种疫苗均有一定的保护作用,但仍以沙鼠肾细胞疫苗的保护力最强。     

应用免疫粘附血凝技术检测流行性出血热病毒抗原和抗体的试验研究

本文对免疫粘附血凝(IAHA)技术进行了改进并用于检测流行性出血热病毒搞原和血清效价。比较了不同毒株在Vero-E_6细胞内抗原滴度,表明A_9株的滴度最高达1:64,以IAHA法对出血热病人9份血清,3份恢复期血清和家兔免疫血清6份进行了效价测定。并同时用免疫荧光(IFA)法进行比较,结果抗体阳性率二种方法一致,但前者的抗体滴度和增长倍数较后者高2-64倍,以上结果表明IAHA法可代替IFA法用于出血热病人或感染动物的抗体检测。     

流行性乙型脑炎强毒株和SA14-14-2弱毒株对裸鼠的致病性和免疫性实验研究

本试验结果表明,免疫缺陷无胸腺裸鼠对乙型脑炎强毒株病毒神经外感染较正常鼠敏感,病毒容易入脑,在脑内的繁殖滴度高,并引起脑细胞严重病理改变。乙脑14-2弱毒株神经外感染则不引起裸鼠发病,脑组织未见病理改变;若脑内直接注射,则引起部分裸鼠发病死亡,但病理变化仍然很轻。以上说明以7.0Log TC(?) 14-2株病毒0.1～0.6ml接种时,对免疫功能不全的裸鼠也是安全的。     

流行性乙型脑炎病毒的变異III．通过地鼠腎细胞后对小白鼠及恒河猴的毒力和免疫力

1．乙型脑炎病毒SA14毒株通过地鼠腎单层细刚胞连续传递20代后,对小白鼠的脑内毒力发生显著变异,由原来的10-5—10-6下降至10-1—10-2.5／0．03ml之间,与地鼠腎细胞的釉胞致病变毒力(TCID50)此鞍,二者相差4．00—5．07log,而皮下,肤腔毒力则巳丧失。 2．变异株对恒河猴的脑腔致病力亦有明显的减弱,以大量病毒脑腔感染猴子后,虽有脑炎症状出现,但发病溉伏期和病程均有延长,而感染的4只猴子中仅有一只死亡。 3．变异株对小白鼠具有较强的免疫力作用,在豚鼠、猴手及小白鼠体内均能产生一定的特异性中和抗体。     

新型纳米银体外广谱抗菌作用及机制

目的探讨新型纳米银体外对临床感染常见细菌的广谱抗菌作用及机制。方法选择临床常见的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌为研究对象,采用平板涂布法检测新型纳米银的广谱抗菌作用,利用透射电镜观察细菌呼吸链脱氢酶活性和细菌细胞膜的渗漏性改变,探讨新型纳米银的抗菌作用机制。结果新型纳米银浓度超过0.05μg/mL对临床感染常见的5种细菌具有明显的抑制作用;浓度5μg/mL的新型纳米银体外作用临床感染常见细菌5min,可100%抑制细菌生长。电镜观察新型纳米银可吸附在金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的菌体表面,改变了细菌形态结构。新型纳米银可明显抑制金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的呼吸链脱氢酶活性;较高浓度的新型纳米银可破坏金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的细胞膜,导致细菌胞浆内容物外漏。结论新型纳米银对临床感染常见细菌具有广谱高效的抗菌作用,其作用机制可能与新型纳米银吸附在细菌表面,抑制细菌表面生物大分子功能或活性有关,研究结果为新型纳米银抗菌作用的深入研究及临床应用提供了实验依据。     

肠道菌群与抑郁症相关性的研究进展

正常人体内的肠道菌群数量可达100万亿,可参与人体的多项生理活动,包括营养物质的吸收与代谢、免疫系统的发育与成熟、抵挡外来病原体的入侵等,对人类的健康有着至关重要的作用。近年来发现肠道中的定植微生物与抑郁症、自闭症、焦虑症和帕金森病等一系列的神经精神疾病密切相关。最新研究表明,肠道菌群是通过神经、体液、代谢和免疫多种途径双向调节肠道和中枢神经系统的。目前,随着医学技术和医学理论的的提高,抑郁症与肠道菌群间的关系受到极大地重视。本文从肠道菌群对抑郁症的影响机制以及益生菌对抑郁症的改善作用两方面来综述肠道菌群与抑郁症相关性的最新进展。     

地高辛素标记的探针快速检测HBV-DNA实验研究

应用核酸分子杂交技术,检测血清中HBV-DNA已成为诊断乙型肝炎病毒感染和判断其复制状态的重要手段。用同位素(~(32)P)标记核酸探针,进行分子杂交,虽然灵敏度高,但是由于具有半衰期短、探针不稳定、价格昂贵、对人体有害等因素,使之推广应用受到限制。目前国内外已有地高辛素(Dig)标记HBV-DNA探针进行斑点杂交实验,敏感性接近同位素探针水平。我们参照BM公司试剂盒方法及有关文献,建立Dig标记HBV基因探针方法,采用随