姜黄素对大鼠肝星状细胞表达受体型蛋白酪氨酸磷酸酶的影响的实验研究

目的:本研究通过观察受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRJ)在大鼠肝星状细胞中的表达及姜黄素对其的影响,探讨以PTPRJ为靶点,姜黄素对抗肝纤维化的分子机制.方法:四氯化碳(CCL4)皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,并采用Percoll梯度离心法分离培养原代大鼠肝星状细胞,采用western-blot、RT-PCR法分别测定PTPRJ、其mRNA在肝组织及肝星状细胞的表达变化及姜黄素对其表达的影响.结果:western-blot、RT-PCR检测结果显示:肝组织和肝星状细胞中PTPRJ表达呈阳性,并随着肝纤维化进展,其表达逐渐降低;姜黄素作用后,肝组织和肝星状细胞PTPRJ表达明显增多.结论:姜黄素可显著增强肝星状细胞PTPRJ的表达,从而改善或逆转肝纤维化进展.     

诱发心肌细胞肥大过程中p53和c－myc基因表达的原位杂交研究

利用血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）诱发下培养的ＳＤ乳鼠心肌细胞（ＭＣ）肥大的模型,采用地高辛配体（ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记探针的原位分子杂交方法,研究了ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ基因在血管紧张素Ⅱ促培养乳鼠心肌细胞肥大中的表达变化。实验分成二组：根据ＡｎｇⅡ持续作用心肌细胞时间,实验组分别于第一天,第三天和第七天终止培养;对照组是相同时期不加血管紧张素培养的心肌细胞。杂交信号用图象分析仪（ＭＩＡＳ３００）进行分析处理,统计结果显示：实验组ｐ５３ｍＲＮＡ的表达水平明显低于对照组,且表达水平与用药时间呈负相关。而ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ在加药促肥大早期（第１天）,表达增高,然后逐渐衰减。结果提示：野生型ｐ５３及ｃ－ｍｙｃ基因均可能参与心肌肥大的病理过程,而ｃ－ｍｙｃ基因在心肌肥大过程中可能是一个始动因素。     

外周血Th1/Th2比值、IL-23/Th17轴与中重度斑块状银屑病患者颈动脉粥样硬化和临床疗效的关系

摘要 目的：探讨外周血辅助T细胞（Th）1/Th2比值、白介素（IL）-23/Th17轴与中重度斑块状银屑病（PP）患者颈动脉粥样硬化和临床疗效的关系。方法：选取2021年1月～2022年1月徐州医科大学附属医院收治的97例中重度PP患者为中重度PP组,根据颈动脉内中膜厚度（CIMT）分为增厚组39例和正常组58例,根据甲氨蝶呤（MTX）治疗是否应答有效分为无应答组和应答组,另选取同期50例体检健康志愿者为对照组。采用流式细胞术检测外周血Th1、Th2百分比和Th1/Th2比值,酶联免疫吸附法检测外周血IL-23、IL-17A水平。采用Pearson相关性分析中重度PP患者外周血Th1、Th2、Th1/Th2比值和IL-23/Th17轴相关因子与CIMT的相关性,多因素Logistic回归分析中重度PP患者MTX治疗无应答的影响因素。结果：与对照组比较,中重度PP组外周血Th1、Th1/Th2比值、IL-23和IL-17A水平升高,Th2比例降低（P均＜0.001）。97例中重度PP患者颈动脉粥样硬化发生率为40.21%（39/97）。与正常组比较,增厚组外周血Th1、Th1/Th2比值、IL-23和IL-17A水平升高,Th2比例降低（P均＜0.001）。Pearson相关性分析显示,中重度PP患者外周血Th1、Th1/Th2比值、IL-23、IL-17A与CIMT呈正相关,Th2与CIMT呈负相关（r=0.695、0.706、0.688、0.650、-0.639,P均＜0.001）。97例中重度PP患者MTX治疗无应答率为21.65%（21/97）。多因素Logistic回归分析显示,重度PP和Th1、Th1/Th2比值、IL-23、IL-17A升高为中重度PP患者MTX治疗无应答的独立危险因素,Th2升高为独立保护因素（P均＜0.05）。结论：中重度PP患者外周血Th1/Th2比值和IL-23/Th17轴相关因子升高,与颈动脉粥样硬化和MTX治疗无应答有关,可能成为中重度PP患者颈动脉粥样硬化和临床疗效评估指标。     

过表达的趋化因子CXCL12通过PI3K/Akt途径促进骨髓基质干细胞Connexins的表达

研究过表达的趋化因子CXCL12是否通过PI3K/Akt信号途径促进了骨髓基质干细胞膜上缝隙连接蛋白Connexin40、Connexin43和Connexin45的表达。采用重组DNA技术使骨髓基质干细胞过表达趋化因子CXCL12,采用Western blot法测定趋化因子CXCL12过表达后骨髓基质干细胞Connexin40、Connexin43、Connexin45、Akt、pAkt表达的变化情况,并用CXCL12受体和Akt途径阻断剂明确CXCL12和PI3K/Akt途径在这一过程中的作用。基因重组后骨髓干细胞过表达了趋化因子CXCL12,CXCL12过表达使骨髓基质干细胞膜上Connexin40、Connexin43和Connexin45表达明显增多,且CXCL12的这一作用是通过PI3K/Akt这一途径实现的。趋化因子CXCL12通过PI3K/Akt途径使骨髓基质干细胞膜上Connexin40、Connexin43和Connexin45的表达增加,可促进移植后干细胞与宿主心肌细胞形成有效的电耦合,从而有利于移植后干细胞的存活并发挥治疗作用。     

植物MATE转运蛋白研究进展

多药和有毒化合物外排转运蛋白(MATE)又称解毒外排转运蛋白(DTXs),广泛存在于真核与原核生物中。MATE是一种膜蛋白,通常具有12个呈V型排列的跨膜区。在植物中MATE/DTXs转运蛋白主要参与铁稳态调节、无机阴离子和次生代谢物转运、外源物质和重金属解毒、植物生长发育调控以及病害与逆境胁迫响应。该文对植物MATE蛋白家族的发现、系统发育、结构及功能等研究进展进行综述,以期为MATE/DTXs应用于作物或牧草抗逆遗传改良提供参考。     

大鵟肾脏组织结构及相关活性物质的表达

应用生物显微技术及免疫组织化学方法,对大鵟肾脏的组织结构进行观察,检测了AQP2、AQP3和Bax、Bcl-2蛋白在肾脏中的表达.结果 表明,大鵟肾脏红褐色,表面覆以极薄的结缔组织膜,无肾脂囊.相对体积比哺乳类大,占体重的2.1%.肾小球毛细血管分支少,结构简单.但是肾小球单位面积上的数目比哺乳类多,这对于在旺盛的新陈代谢过程中,迅速排除废物、保持水盐平衡是有利的.集合管是尿重吸收的重要部位,上皮细胞有AQP2、AQP3免疫反应阳性表达,提示AQP2和AQP3对大鵟肾脏水的平衡有重要的调节作用.近曲小管上皮细胞有Bax和Bcl-2免疫反应阳性表达,说明Bax和Bcl-2的协同表达参与正常大鵟肾脏细胞凋亡的调控.     

狂犬病毒糖蛋白cDNA在BHK细胞中的整合及表达

狂犬病毒是引起动物及人狂犬病的病原。病毒颗粒由脂质囊膜、核糖核蛋白核心和纤状突起(糖蛋白又叫G蛋白)组成。G蛋白为病毒粒子的重要成分之一,具有血凝活性,并提供毒粒吸附宿主细胞受体的位点,其成熟形式含有505个氨基酸。依毒株不同,该蛋白上有2或3个潜在糖基化位点。糖蛋白既是病毒特异性辅     

采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2．1之间的相互作用

为了研究OsRUSl（ROOTUV-BSENSITIVE1）与OsRUS2．1（ROOTUv-BSENSITWE2．1）之间是否具有相互作用以及通过何种结构域相互作用,采用酵母双杂交技术开展了如下工作。根据对OsRUSI与OsRUS2．J的DUF647结构域分布的分析,分别采用分子克隆技术将OsRUSl的4个不同片段[OsRUSI（1-1782）、OsRUSI（1-504）、OsRUSl（510-1282）和OsRUSI（1188～1782）]克隆到诱饵载体pGBKT7上,并将OsRUS2．J的4个不同片段[OsRUS2．J（1-1317）、OsRUS2．J（1-138）、OsRUS2．Jf139—879）和OsRUS2．J（880～1317）]克隆到猎物载体pGADT7上,酶切和测序结果表明诱饵和猎物载体构建成功,读码框正确。将所构建的4个伪R己岱J诱饵载体和4个OsRUS2．J猎物载体质粒依次转化酵母AHl09,研究转化AHl09菌落在营养缺陷型培养液SD-Trp—DO或SD-Leu-DO上的生长情况,以及对报告基因4DE、HIS、MELl和LacZ的激活情况,表明它们均没有对酵母菌株AH109产生毒性和自激活活性。再将4个OsRUSl诱饵载体和4个OsRUS2．肠者物载体的16种组合分别共转化酵母AH109,共转化菌株能在二缺营养缺陷板SD-Trp-Leu-DO上生长良好,但不能在四缺营养缺陷板SD—Trp-Leu—Ade-His-D0上生长,也不能激活MEL1和LacZ报告基因。这些结果表明OsRUSI与OsRUS2．1之间没有直接的相互作用。     

念珠菌血症与血小板减少症

念珠菌血症常常出现血小板减少,甚或呈现血小板减少症。本文就目前有关念珠菌与血小板相互作用文献作一综述。发生念珠菌血症时,血小板可通过纤连蛋白等黏附于念珠菌,激活后释放α颗粒中多种抗真菌物质,引起细胞膜破坏和崩解,封闭和或延迟真菌芽管产生和菌丝延长,有效地抑制真菌早期阶段生长。而念珠菌依靠自身结构成份和代谢产物抑制血小板聚集,促进念珠菌扩散。因此,血小板抗念珠菌免疫损耗是念珠菌血症出现血小板减少现象的内在机制,早期检测血小板活化标志物CD42a和PAC1,将有助于念珠菌血症的早期诊疗。     

BK通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布*

摘要目的：研究大电导、钙离子和电压激活的钾离子通道（BK通道）在HEK293 细胞膜上的单分子定位及其总体空间分布情况。 方法：分别用mEos2、Dronpa 等荧光蛋白标记BK通道的α亚基和辅助性β2 亚基,将这些质粒在HEK293 细胞内瞬时转染以表 达通道蛋白,然后用激光共聚焦荧光显微成像、全内反射荧光显微成像、光敏定位荧光成像等技术观察BK通道的亚细胞定位及 单分子分布,并用电生理实验技术检测荧光蛋白对BK通道有影响。结果：激光共聚焦荧光显微成像和全内反射荧光显微成像技 术只能在亚细胞水平定位通道蛋白,BK 通道在细胞膜上聚集并形成不规则的蛋白簇,它的α亚基和β2 亚基在细胞膜上完全共 定位;光敏定位荧光成像技术成功定位BK通道蛋白簇里面的单分子,虽然α和β2 亚基紧紧靠在一起,它们之间依然存在空间 距离;BK通道的质膜表达和功能特性不受荧光蛋白的影响。结论：BK通道蛋白簇里面包含大量的α和β2 亚基的蛋白单分子, 它们紧密地聚集在一起,但是并没有完全共定位,在分子水平上揭示了BK通道α和β亚基功能耦合的结构基础,为以后研究大 分子蛋白质间的相互作用机制提供了很好的分子模型,光敏定位荧光成像技术作为一种全新的单分子荧光成像手段,在基因表 达、信号通路、蛋白质相互作用等许多重要生命活动的研究中发挥重要作用。