表皮生长因子受体基因突变检测方法改进及初步临床验证

目的:改进现有的检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的荧光PCR法并开发出新的试剂盒,将其与直接测序法和ARMS法进行对比,验证该试剂盒用于临床诊断的敏感性、特异性和准确性。方法:收集2013年6月至2015年8月手术确诊的141例非小细胞肺癌(NSCLC)的石蜡包埋组织标本。采用盲法分别使用直接测序法、ARMS法和新试剂盒检测EGFR突变,比较新试剂盒与其他两种检测方法的差异,结果不一致时采用三种方法分别重复检验一次。结果:三种方法检测成功率均为100%,新试剂盒与直接测序法测得结果完全一致的比率达75.9%(107/141),在直接测序法测得的96例突变阳性中,92例在新试剂盒检测中得到验证(95.8%)。而直接测序法显示突变阴性的45例中,新试剂盒检测发现了23例突变阳性,两种检测方法的结果存在统计学差异(x2=40.745,P0.05)。与直接测序法进行比较,新试剂盒检测EGFR突变的敏感性、特异性分别为95.8%、48.9%,阳性预测值、阴性预测值分别为80.0%、84.6%,检测准确度为80.9%。以ARMS检测法为金标准,新试剂盒测得结果完全一致的比率达84.4%(119/141),两者的一致性比较好(K=0.749,P0.05),敏感性、特异性分别为94.1%、86.4%。结论:改进后EGFR基因突变检测的试剂盒在技术上较好地控制了检测结果的假阳性和假阴性,该检测方法较直接测序法具有更好的敏感性和准确性,与现有的ARMS法一致性较高。     

果蝇越夏与饲料

果蝇是一种小型的昆虫。由于生活周期短,繁殖快,数量大,突变性状多,唾腺染色体大,是遗传学实验的好材料。据有关报道,果蝇最适于20°—25℃生长。在炎热的夏天繁殖困难。为了适应教学需要,我们在这方面进行了试验。发现野生型、白眼突变型,能在32—36℃下生长,尚能繁殖后代。 1.材料实验用果蝇品种:18号:Qre-R-CH野生型;19号:Sw-bWild,野生型;22号:W,白眼突变型。 2.培养果蝇所用饲料本实验采用各种水果(梨、苹果、挑、大红枣),甜酒糟,蕃茄等,都可以作果蝇饲料。其中效果最佳是苹果+甜酒糟,大红枣+甜酒糟,甜酒糟(注意:挤出多余的糟汁液)。 3.饲养方法先用70%酒精,将培养瓶内壁和水果表皮进行擦拭,使之消毒,灭菌。然后,将水果切成小块,放入培养