CMV抑制PVYN CP基因沉默及其介导的抗病性

以前曾报道用RNA介导的抗病毒策略,获得了高度抗病的表达马铃薯Y病毒坏死株系外壳蛋白基因(PVY^N CP)的转基因烟草,并对T1、T2代转基因植株进行了遗传和抗病性分析。此次以T,代转基因植株为试验材料,在筛选高度抗病植株并证明其抗病性是基于转基因沉默的基础上,采用Northern杂交的方法,证明CMV侵染抑制了转基因植株中PVY^N CP基因的沉默,而且CMV对PVY^N CP基因沉默的抑制部位是发生在接种后的新生叶上,接种叶及其下部叶片中PVY^N CP基因沉默则未受到影响。采用ELISA方法对CMV PVY^N复合接种的转基因植株进行PVY^N检测,结果表明,接种叶及下部叶没有检测到PVY^N,植株叶片对PVY^N表现为抗病。而在CMV接种后植株新生叶中则检测出了高滴度的PVY^N,植株叶片对PVY^N表现为感病。该文报道了在表达PVY^N CP基因的RNA介导抗性转基因植株中,异源病毒侵染抑制了转基因的沉默,并导致转基因植株的抗病性丧失。     

新疆野生啮齿动物嗜肝病毒的感染

[目的]为调查新疆野生啮齿动物的血清中嗜肝病毒的存在状态。[方法]应用乙肝表面抗原诊断试剂盒和乙肝表面抗体诊断试剂盒,对野生啮齿动物进行了血清学调查。[结果]灰旱獭(Marmotabaibaci-na)的阳性率为17.8%(24/135)、长尾黄鼠(Citellusundulatus)阳性率为17.4%(12/69)和赤颊黄鼠(Citelluserythrogenys)阳性为(8/15)。作者认为赤颊黄鼠可以作为乙型肝炎病毒潜在的动物模型。     

hCGβ-CTP37多聚体在巴斯德毕赤酵母中的表达及其表达产物的结构预测

hCGβ-CTP37(简称CTP)肽段是hCG分子的特有部分,存在hCG的特异表位。为了解CTP利用毕赤酵母进行表达的情况及探索其作为研制调节生育和抗肿瘤疫苗的可行性,本研究中我们将2、3、4个CTP以头尾串联的方式重组成多聚体基因,然后克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9K-Cα-(CTP)n(n=2,3,4),电转染入酵母细胞进行表达。在培养基上清中我们检测到了目的基因表达产物,Western blot结果显示它们的分子量分别约为：20KDa、30KDa、40KDa,且能与抗hCG多克隆抗体结合。另外,我们还利用ANTHEPROT 4．3蛋白序列分析软件包对表达产物CTP四聚体的结构进行了预测分析,结果表明CTP四聚体的抗原性明显强于hCGβ-CTP37单聚体,CTP四聚体与hCGβ二级结构较为相似,但CTP四聚体的抗原专一性要优于hCGβ。CTP多聚体在毕赤酵母系统中的成功表达及对表达产物抗原性的初步分析为今后利用CTP研制调节生育和抗肿瘤疫苗奠定了基础。     

苦皮藤素V对东方粘虫中肠V-ATP酶AB亚基复合物水解ATP活性的抑制作用

苦皮藤素V是一种对昆虫具有毒杀活性的化合物,从植物苦皮藤（Celastrus angulatus Max）中分离出来。目前,已发现苦皮藤素V可与粘虫中肠液泡型ATP酶（V-ATPase）的H、B和a亚基结合,但是其具体作用机理还尚不清楚。本研究将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达得到的东方粘虫中肠V-ATPase A亚基突变体TSCA和V-ATPase B亚基包涵体洗涤、溶解后进行复性,获得可溶性AB亚基复合物后采用亲和层析纯化。将纯化好的AB亚基复合物测定H+K+-ATPase活性,证明其有ATP水解活性。随后,测定苦皮藤素V对复合物ATPase的抑制活性,发现加入苦皮藤素后,复合物ATPase活性降低。因此,其可能是通过抑制了AB亚基复合物的ATPase活性,从而产生了杀虫效果,证明AB亚基复合物为苦皮藤素V的潜在靶点之一。这为了解苦皮藤素与V ATPase相互作用机制打下了基础,也为进一步开发新型杀虫药物奠定了基础。     

小麦与叶锈菌互作过程中细胞程序性死亡的细胞学观察

小麦(Triticum aesetivum)品种洛夫林10和叶锈菌(Puccinia recondita f.sp tritici)小种162、165分别组成不亲和组合与亲和组合。透射电镜观察表明,在小麦与叶锈菌的不亲和组合中,接种后12h,侵染点周围叶肉细胞核变形;接种后24h,核内染色质开始凝聚,并趋于细胞核边缘,同时叶绿体膨胀;接种后48h,核内染色质凝聚加剧,叶绿体开始解体;最终在接种后72h,细胞核、叶绿体完全解体,线粒体开始退化。此外,内质网和液泡共同行使溶酶体功能,吞噬各种细胞器残体及原生质降解组分。以上结果表明:在小麦与叶锈菌不亲和组合的互作过程中,寄主细胞呈现细胞程序性死亡的典型特征。而在亲和组合中,叶肉细胞间隙中可见有大量菌丝蔓延,菌丝与寄主细胞壁接触后分化产生吸器母细胞。菌丝的存在对寄主细胞的超微结构产生一定影响。从接种后24h开始,与菌接触的细胞出现质膜下陷,叶绿体稍显膨胀;在接种后48h、72h,大部分叶绿体膨胀,而其它细胞器无明显变化。     

伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及缺失转移载体的构建

根据已发表的伪狂犬病病毒 (PseudorabiesVirus,PRV)的 gI和 gE 基因序列 ,设计两对引物用PCR方法扩增出PRV SH gI和 gE 基因 ,将其克隆入 pUC18载体中 ,获得了缺失部分gI基因的转移载体质粒 ,命名为 pgEI。     

小麦与叶锈菌互作过程中细胞程序性死亡的生化证据(简报)

细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD)是一种受基冈调控的、主动的、连续的程序化反应一般发生程序性死亡的细胞具有较为典型的形态及生化特征:细胞收缩、核染色质浓缩、趋边化;DNA 在一定位点被核酸内切酶降解成以180bp 为     

小麦与叶锈菌互作过程中细胞程序性死亡的生化证据（简报）

细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD)是一种受基因调控的、主动的、连续的程序化反应。一般发生程序性死亡的细胞具有较为典型的形态及生化特征：细胞收缩、核染色质浓缩、趋边化;DNA在一定位点被核酸内切酶降解成以180bp为基数的片段,在琼脂糖凝胶电泳中呈现“梯”状条带     

中华卵索线虫的体外培养

在研究中华卵索线虫的体外培养方法的同时,对其在不同培养基中的生长发育情况进行了观察。结果表明：以培养基TC－199加20％热灭活胎牛血清的培养效果较为理想,大多数线虫可存活3个月,最大虫体长55．1mm,宽204．13um,其发育程度大致与该种索线虫在宿主粘虫体内寄生8－9天的情况相近,培养期间观察到2次蜕皮;第一次蜕皮在卵内,第二次在培养6－8天之后,口针消失,虫体内滋养物体发育明显,尾部附器已经形成,没有观察到生殖原基的发育。     

生物分子相互作用分析技术的一次突破

细胞生命活动的过程,无不涉及两个或多个生物分子之间相互作用,如信号传导、免疫反应、酶与底物作用等。因此,为了更好地研究生命过程,就迫切需要开发出一种能实时检测出生物分子间相互作用的系统,Phar－maca公司于90年代初就开发出了这样一种技术,即BM技术（BiornoecularInterationAnalssis）,该技术是基于表面等离子共振（Snd。PI。R。ce,简称SPR）的光物理现象［fi。在该现象中,所检测出的共振角与结合在传感片表面的生物分子的质量呈正比例关系。因此以时间对共振角（以共振单位表示）作图可记录相互作用的动态全过程,…