杜氏盐藻psaB基因cDNA的克隆与序列分析

根据真核生物莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Chlamydomonas moewusii、Chlorella vulgaris以及Mesostigma viride的psaB基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻（Dunaliella salina）细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到的一段长为1.8kb左右的cDNA片段。PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列进行同源性比较,表明所克隆的1815bp序列为杜氏盐藻psaB cDNA片段,GenBank收录号为AY820754。根据已经得到的psaB序列推导成氨基酸序列与一些已知物种的psaB基因相比较,同源性分别为Chlamydomonas reinhardtii 92%,Chlamydomonas moewusii 91%,Chlorella vulgaris 86% , Mesostigma viride 85%,Physcomitrella patens subsp.Patens 85%, Nephroselmis olivacea 84%。据此可推断本实验中所克隆的序列为杜氏盐藻psaBcDNA序列。     

石家庄地区肺炎支原体感染的流行病学调查

目的:了解石家庄地区肺炎支原体感染的血清流行病学情况。方法:选择2011年3月~2012年2月我院住院和门诊收治的急性呼吸道感染患者1902例为研究对象,采用间接免疫荧光法(IFA)检测其血清肺炎支原体IgM抗体,并分析其流行病学资料。结果:1902例血清标本中,284例(14.93%)肺炎支原体IgM抗体阳性,男性和女性的阳性率无显著差异。肺炎支原体抗体阳性的患者主要分布于0~15岁年龄段,阳性检出率最高的年龄组为0~6岁,占21.26%(132/621)。各个季节均有肺炎支原体感染阳性患者,感染率无显著差异性,秋(80例)、冬(96例)两季的阳性感染率高于春(56例)、夏(52例)两季。患者100%出现发热症状,95.77%出现咳嗽。结论:石家庄地区肺炎支原体感染的主要人群为未成年人,无季节性和性别差异,以发热和咳嗽为最主要的临床症状。     

悬浮培养玫瑰茄细胞的生长行为及动力学方程的建立

以培养多年的玫瑰茄（Hibiscus sabdariffaL.)白色细胞株为材料,在以3％蔗糖为碳源,植物生长调节剂为4．5μmol/L2,4-D（2,4－二氯苯氧乙酸）,2．3μmol/L Kt（Kinetin,细胞激动素）的悬浮培养条件下,研究了玫瑰茄细胞的生长及泛醌积累动态、培养液PH值的变化以及培养过程中玫瑰茄细胞对碳源、氮源、磷源的消耗动态,并以此数据建立了悬浮培养玫瑰茄细胞的生长、蔗糖消耗、泛醌形成的非结构动力学模型,经验证表明,模型与实际情况有较高的拟合度。     

基于CiteSpace中国海洋生态经济的文献计量分析

以CNKI和CSSCI数据库中1980—2017年的1779篇文献为原始数据,基于文献计量分析方法和文献可视化工具,对海洋生态经济领域的研究成果进行信息挖掘。研究发现:(1)海洋生态经济的研究始于1982年,2009年论文发表数量激增成为学术界的研究热点。(2)狄乾斌、高强、殷克东等在海洋生态经济方面做出了大量研究,中国海洋大学、国家海洋局和辽宁师范大学为主要研究机构,研究机构之间合作联系主要以部门和地域联系为主,跨区域和跨部门的合作有待增强。(3)海洋生态经济的研究热点指向"蓝色经济"、"海洋生态系统协调"、"人海可持续发展"等方向。(4)海洋生态经济研究的综合性不断增强,《海洋开发与管理》是海洋生态经济研究刊文量最多的期刊。     

重组人脑利钠肽对脓毒症相关性脑病小鼠神经细胞凋亡的治疗作用

目的:探讨重组人脑利钠肽(recombinant human brain natriuretic peptide, rhBNP)对脓毒症小鼠脑病理损伤和认知功能障碍的治疗效应,明确其脑保护作用机制。方法:采用盲肠结扎穿刺法(Cecal ligation and puncture, CLP)建立脓毒症小鼠模型。在CLP手术后6小时皮下注射rhBNP,相同容积的生理盐水被作为对照,连续14天,每日一次。通过旷场实验,评价动物基础运动状态、探索能力和焦虑情绪;采用条件相关恐惧实验,检测动物情景相关记忆能力变化。TUNEL染色检测动物海马CA1区神经细胞凋亡变化;蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测动物海马组织TNF-α、Caspase-8和Caspase-3蛋白表达水平变化。结果:在旷场实验中,与Sham+Veh组小鼠相比较,CLP+Veh组小鼠表现出平均运动速度(P0.0001)、5分钟穿格次数(P0.0001)和中央区域运动时间明显下降(P0.0001)。与CLP+Veh组小鼠相比较,CLP+rhBNP组小鼠旷场中平均运动速度(P=0.35)和5分钟穿格次数(P=0.064)无显著变化,中央区域运动时间明显增加(P=0.0005)。在条件相关恐惧测试中,与Sham+Veh组小鼠相比较,CLP+Veh组小鼠表现为僵直时间比例明显减少(P0.0001)。与CLP+Veh组小鼠相比较,CLP+rhBNP组小鼠表现为僵直时间比例显著增加(P=0.0014)。CLP诱导的脓毒症小鼠表现出海马CA1区神经细胞凋亡。rhBNP治疗可以明显的减轻脑病理变化,并且通过抑制Caspase-3上游信号通路TNF-a-Caspase-8减轻神经细胞凋亡。结论:rhBNP对SAE具有治疗作用,其机制可能与抑制神经细胞凋亡有关。     

RNA适配体作为类抗性基因的可行性

【背景】抗性基因(ResistanceGene)在分子生物学研究中具有重要作用,但其基因片段较大,限制了载体中插入目的序列的长度。【目的】探究分子量较小的RNA适配体的类抗性基因作用,用于优化载体载量和扩展目的基因片段。【方法】基于tRNA支架在体内富集表达RNA适配体,筛选验证氨基糖苷类抗生素新霉素B的RNA适配体的抗性作用。【结果】构建tRNA支架重组RNA表达载体并进行体内筛选,得到A Site和Avirus这2个RNA适配体分子,能够耐受新霉素B浓度为19μg/mL(固体培养基)和30μg/mL(液体培养基)。【结论】RNA适配体可发挥类抗性基因的功能,本文策略有望用于抗性基因的优化,缩小质粒载体载量,为分子克隆技术提供新的手段。     

何氏生髓方联合聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子防治肺腺癌患者化疗后骨髓抑制的临床效果研究

摘要 目的：探讨何氏生髓方联合聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子（PEG-rhG-CSF）防治肺腺癌患者化疗后骨髓抑制的临床效果。方法：选取广州中医药大学东莞医院2021年3月~2022年10月期间收治的100例肺腺癌患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组（n=50,PEG-rhG-CSF治疗）和观察组（n=50,何氏生髓方联合PEG-rhG-CSF治疗）。观察两组中医证候积分、T淋巴细胞亚群指标、外周血象和中性粒细胞减少发生率变化情况。结果：治疗4个周期后,观察组神疲乏力、胃纳差、食少纳差、少气懒言、自汗盗汗、腰膝酸软症状评分低于对照组（P<0.05）。治疗4个周期后,观察组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺高于对照组;CD8⁺低于对照组（P<0.05）。治疗4个周期后,观察组白细胞计数（WBC）、血小板计数（PLT）、中性粒细胞计数（NEUT）、血红蛋白（Hb）高于对照组（P<0.05）。观察组中性粒细胞减少发生率低于对照组（P<0.05）。结论：何氏生髓方联合PEG-rhG-CSF防治肺腺癌患者化疗后骨髓抑制,可提高机体免疫力,改善临床症状和外周血象,降低中性粒细胞减少发生率。     

紫外线诱变选育碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌A4－3为出发菌株,发酵产生碱性蛋白酶,其野生型菌株产酶为2412u／ml。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株As—4,产酶2732．8u／ml。对As—4菌株进行紫外线绣变处理1min,得变异菌株AX—46,产酶为3213．8u／ml,且产酶能力稳定。     

太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达

在双壳类软体动物牡蛎体内,溶菌酶(Lysozyme)在实现宿主免疫防御,破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重要的作用.根据GenBank已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长cDNA序列(GenBank:AB179775),通过RT-PCR技术,从太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)中克隆得到溶菌酶(简称为CgLys)基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列.生物信息软件分析表明,其ORF为414 bp,编码137个氨基酸(aa),前20个aa为信号肽,成熟肽由117个aa组成,其分子量为13.2 kD.通过构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较,初步推断该CgLys属于i型溶菌酶.将该CgLys基因的成熟肽亚克隆进原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CgLys,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.该基因工程菌经IPTG诱导发酵后,成功高效地表达了重组CgLys蛋白,其分子质量约为18 kD.该重组CgLya蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中,即以可溶性蛋白形式存在.上述结果将显著简化后续的蛋白纯化过程,为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考.     

牛蛙两个新Temporins基因的克隆及其抗菌机制的研究

Temporins 是从蛙属中得到的一类羧基端酰胺化的疏水性抗菌肽,具有抗细菌、霉菌、酵母菌、原虫及病毒活性．为了研究牛蛙皮肤抗菌肽的多样性及其结构特点,根据GenBank数据库中蛙属抗菌肽基因信号肽序列设计简并引物,从牛蛙皮肤cDNA文库中克隆到两个新的temporins 家族抗菌肽,命名为 temporin-La (LLRHVVKILEKYL_amide) 和 temporin-Lb (LFRHVVKIFEKYL_amide)．合成的 temporin-La 和 temporin-Lb肽具有很强的抗菌活性,尤其是对革兰氏阳性细菌．溶血性测定结果表明,temporin-La 浓度高至250 mg/L 时对兔红细胞仍无溶血活性,而 temporin-Lb 具有较弱的溶血活性(半数致死浓度LC₅₀ ≈ 230 μmol/L)．通过透射电镜观察 temporin-La 和 temporin-Lb 处理过的金黄色葡萄球菌的细胞结构,发现它们都能直接地杀死细菌,但作用机制不一样．