贵州省果树蹄蝠的分类记述

2008年10月在贵州省荔波县进行翼手目动物多样性调查中,于该县永康乡采集到2号蹄蝠标本,经与国内外记载过的蹄蝠科bicolor族群的标本进行比较,这2号标本的体型较小,前臂长分别为44.26mm、42.48mm,耳大而圆,耳长22.02mm、22.58mm;鼻叶简单,前鼻叶外侧没有小附叶,中鼻叶不发达;后鼻叶稍宽于前鼻叶和中鼻叶,被3纵隔分为4个部分,P2弱小,但未消失,位于齿列线外侧,这些特征与中国和泰国记载的果树蹄蝠Hipposideros pomona一致。另对贵州早期文献中记载的双色蹄蝠H.bicolor标本进行了查阅,认为其应归为果树蹄蝠。     

采用酵母双杂交技术研究OsRUS1与OsRUS2．1之间的相互作用

为了研究OsRUSl（ROOTUV-BSENSITIVE1）与OsRUS2．1（ROOTUv-BSENSITWE2．1）之间是否具有相互作用以及通过何种结构域相互作用,采用酵母双杂交技术开展了如下工作。根据对OsRUSI与OsRUS2．J的DUF647结构域分布的分析,分别采用分子克隆技术将OsRUSl的4个不同片段[OsRUSI（1-1782）、OsRUSI（1-504）、OsRUSl（510-1282）和OsRUSI（1188～1782）]克隆到诱饵载体pGBKT7上,并将OsRUS2．J的4个不同片段[OsRUS2．J（1-1317）、OsRUS2．J（1-138）、OsRUS2．Jf139—879）和OsRUS2．J（880～1317）]克隆到猎物载体pGADT7上,酶切和测序结果表明诱饵和猎物载体构建成功,读码框正确。将所构建的4个伪R己岱J诱饵载体和4个OsRUS2．J猎物载体质粒依次转化酵母AHl09,研究转化AHl09菌落在营养缺陷型培养液SD-Trp—DO或SD-Leu-DO上的生长情况,以及对报告基因4DE、HIS、MELl和LacZ的激活情况,表明它们均没有对酵母菌株AH109产生毒性和自激活活性。再将4个OsRUSl诱饵载体和4个OsRUS2．肠者物载体的16种组合分别共转化酵母AH109,共转化菌株能在二缺营养缺陷板SD-Trp-Leu-DO上生长良好,但不能在四缺营养缺陷板SD—Trp-Leu—Ade-His-D0上生长,也不能激活MEL1和LacZ报告基因。这些结果表明OsRUSI与OsRUS2．1之间没有直接的相互作用。     

血清25-羟维生素D水平与脓毒症患儿凝血功能、炎性因子及预后的关系*

目的:探讨血清25-羟维生素D(25-OH-VitD)水平与脓毒症患儿凝血功能、炎性因子及预后的相关性。方法:选取2016年5月-2017年12月期间山东省立医院收治的脓毒症患儿68例为研究组,根据研究组患儿血清25-OH-VitD水平将其分为三组:缺乏组(20 ng/mL)6例、不足组(20-29.9 ng/mL)19例、充足组(≥30 ng/mL)43例,再根据研究组患儿28d后转归情况分为好转组56例与恶化组12例。另选取同时期在山东省立医院进行体检的健康儿童46例为对照组,检测并比较各组实验室指标,并分析血清25-OH-VitD与C反应蛋白(CRP)、白介素-2R(IL-2R)、白介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的相关性,对脓毒症患儿预后的独立影响因素进行Logistic回归分析。结果:缺乏组、不足组、充足组患儿CRP、IL-2R、IL-6、PCT、PT、APTT水平均明显高于对照组(P0.05),其中CRP、IL-2R、IL-6、PCT随着25-OH-VitD水平的降低而升高(P0.05)。与恶化组对比,好转组患儿血清25-OH-VitD水平明显升高,CRP、IL-2R、IL-6、PCT水平明显降低(P0.05)。经Pearson相关性分析显示,脓毒症患儿血清25-OH-VitD均与CRP、IL-2R、IL-6、PCT呈负相关(P0.05),与PT、APTT无关(P0.05)。经Logistic回归分析显示,血清25-OH-VitD是脓毒症患儿预后的独立影响因素(P0.05)。结论:血清25-OH-VitD与脓毒症患儿炎性因子密切相关,与凝血功能指标无关,且血清25-OH-VitD是其预后的独立影响因素。     

宁夏中部半干旱区苜蓿水分利用效率研究

为比较不同苜蓿品种的水分利用效率(WUE)并筛选出节水品种,在宁夏中部半干旱地区选择试验地,采用灌溉和品种2因素裂区试验,主裂区为灌溉量,副裂区为苜蓿品种。对3种灌溉量下10个苜蓿品种(包括5个国外引进品种和5个国内育成品种)的产量、水分利用效率以及农艺性状进行研究。结果表明,水分处理、刈割茬次、品种对苜蓿产量、水分利用效率、株高、茎叶比有显著影响。2012年第1茬各苜蓿品种产量最高,其次为2012年第2茬,2012年第3茬最低;2011年产量略高于2012年第3茬产量。在控水条件下,固原紫花和宁苜1号水分利用效率较高,而CW400和柏拉图在充分灌水条件下水分利用效率较高。在3种灌溉量下,中苜1号和宁苜1号的耗水量较低,属于节水品种,三得利和宁苜2号耗水量较高,属于耗水品种。因此,中苜1号和宁苜1号可以作为节水抗旱品种,用于宁夏中部干旱带苜蓿人工草地的建植。     

IL-6单克隆抗体对自身免疫性心肌炎的保护作用及其机制

目的：观察白介素-6（interleukin,IL-6）单克隆抗体（IL-6 mAb）治疗Lewis大鼠自身免疫心肌炎（EAM）的疗效。探讨IL-6与辅助性T细胞17（Th17）、调节性T细胞（Treg）在EAM发病中的机制。方法：将34只8-10周龄Lewis大鼠随机分为正常对照组（n=6）,EAM组（n=12）,IL-6mAb干预组（n=16）。对EAM组和干预组注射心肌肌凝蛋白,干预组于免疫注射后第1、7至第20天腹腔注射IL-6 mAb1nlg,分别于急性峰值期（第21天）、慢性持续期（第84天）取材,观察心肌炎症浸润、纤维化、细胞凋亡以判断IL-6mAb疗效。检测脾脏TH17、Treg细胞数量和功能,比较各组血清中IL-6、IL-10、IL-17和转化生长因子．β（TGF-β）的浓度,实时定量PCR测定外周血STAT3、RORγt、Foxp3mRNA水平,对EAM源性脾细胞进行体外IL-6mAb刺激,并用ELISA法测定IL-10、IL-17和TGF-β的浓度。结果：炎症积分、纤维化积分、凋亡指数IL-6mAb干预组较EAM组明显下降（P〈0．01）。急性峰值期（21d组）EAM组TH17和Treg细胞数量上调,干预组则受明显抑制（P〈0．01）;21d干预组血清IL-6、IL-10、IL-17和TGF-β的浓度较EAM组明显下降（P〈0．01）;21d干预组外周血STAT3、RORγt、Foxp3mRNA水平下降（P〈0．01）;体外IL-6mAb刺激EAM源性脾细胞,IL-10、IL-17和TGF-β表达明显增加。结论：IL6mAb对EAM有明显的保护作用,IL6mAb通过抑制Th17、Treg细胞的数量和功能,实现对EAM的保护作用。     

海洋侧孢短芽孢杆菌的分离鉴定及其抗菌活性物质初步研究

采用滤纸片和牛津杯法对分离自大连海参养殖圈海水及海底污泥的506株细菌进行了抗菌活性筛选,获得了1株抗菌活性较强的菌株HS—A465。经形态观察及生理生化实验,结合16SrDNA序列分析,确定为海洋侧孢短芽孢杆菌（Brevribacillus laterosporus）。采用薄层层析和茚三酮显色检测,在其发酵上清液中存在2种具有较强抗菌活性的代谢物质,对每一种成分进行了分离纯化和抑菌实验。结果发现,成分2和3具有显著的抑菌作用。进一步分析表明,成分2和3还具有很强的热稳定性和pH稳定性,对有机溶剂耐受性较好。根据茚三酮显色结果,可以初步推断该活性物质结构上含有游离的氨基酸,初步推断它们是直链的肽类物质。这一研究成果将为海洋抗菌活性物质的进一步开发利用提供理论参考。     

小鼠 LRRC 10腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达

目的：构建含有小鼠Lrrc10（Leucine-rich Repeat Containing protein 10）基因的重组腺病毒表达载体。方法：设计小鼠Lrrc10特异性引物,以小鼠cDNA为模板,通过PCR扩增出mLrrc10的编码区,并引入HA标签蛋白和Sal Ι酶切位点。该片段经凝胶电泳纯化后插入pMD-18 T载体。测序后,用Sal Ι和Hind III酶切,将目的片段亚克隆至pAd-track-cmv穿梭载体中。用PmeΙ线性化后,用100 ng转化细菌BJ5183,在细菌内同源重组后得到 pAd-Lrrc10质粒。pAd-Lrrc10经PacⅠ线性化后用LipofectamineTM2000转染293A细胞,包装得到含Lrrc10基因的病毒重组子。将病毒重组子在293A细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含Lrrc10的病毒液。将收集的病毒液感染心肌细胞,绿色荧光观察 GFP、免疫印迹检测Lrrc10-HA蛋白的表达。结果：用病毒液感染原代心肌细胞,24小时后在荧光显微镜下可观察被感染的细胞发出绿色荧光,提取心肌细胞总蛋白,Western可检测到Lrrc10-HA融合蛋白的表达。结论：小鼠Lrrc10腺病毒载体构建成功,并可将编码Lrrc10-HA的目的片段导入心肌细胞中表达。     

念珠菌血症与血小板减少症

念珠菌血症常常出现血小板减少,甚或呈现血小板减少症。本文就目前有关念珠菌与血小板相互作用文献作一综述。发生念珠菌血症时,血小板可通过纤连蛋白等黏附于念珠菌,激活后释放α颗粒中多种抗真菌物质,引起细胞膜破坏和崩解,封闭和或延迟真菌芽管产生和菌丝延长,有效地抑制真菌早期阶段生长。而念珠菌依靠自身结构成份和代谢产物抑制血小板聚集,促进念珠菌扩散。因此,血小板抗念珠菌免疫损耗是念珠菌血症出现血小板减少现象的内在机制,早期检测血小板活化标志物CD42a和PAC1,将有助于念珠菌血症的早期诊疗。     

火棘花挥发油化学成分的GC-MS分析及抗氧化活性研究

采用水蒸气蒸馏法提取火棘花挥发油,利用气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分。使用维生素C和BHT为阳性对照,以DPPH自由基、亚硝酸钠清除作用为指标评价挥发油的抗氧化活性。从挥发油中鉴定了77个化合物,占挥发油总量的83.77%,含有多种生物活性成分,以萜类及其含氧衍生物(50.31%)、烷烃(18.52%)、醛(5.54%)为主;挥发油对DPPH自由基、亚硝酸钠有明显的清除作用,清除率为50%时,其体积分别为43.51、79.48μL,样品量与清除率间呈量效关系;挥发油对DPPH自由基的清除效果略低于1 mg·mL-1维生素C,对亚硝酸钠的清除效果优于1 mg·mL-1的BHT。     

BK通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布*

摘要目的：研究大电导、钙离子和电压激活的钾离子通道（BK通道）在HEK293 细胞膜上的单分子定位及其总体空间分布情况。 方法：分别用mEos2、Dronpa 等荧光蛋白标记BK通道的α亚基和辅助性β2 亚基,将这些质粒在HEK293 细胞内瞬时转染以表 达通道蛋白,然后用激光共聚焦荧光显微成像、全内反射荧光显微成像、光敏定位荧光成像等技术观察BK通道的亚细胞定位及 单分子分布,并用电生理实验技术检测荧光蛋白对BK通道有影响。结果：激光共聚焦荧光显微成像和全内反射荧光显微成像技 术只能在亚细胞水平定位通道蛋白,BK 通道在细胞膜上聚集并形成不规则的蛋白簇,它的α亚基和β2 亚基在细胞膜上完全共 定位;光敏定位荧光成像技术成功定位BK通道蛋白簇里面的单分子,虽然α和β2 亚基紧紧靠在一起,它们之间依然存在空间 距离;BK通道的质膜表达和功能特性不受荧光蛋白的影响。结论：BK通道蛋白簇里面包含大量的α和β2 亚基的蛋白单分子, 它们紧密地聚集在一起,但是并没有完全共定位,在分子水平上揭示了BK通道α和β亚基功能耦合的结构基础,为以后研究大 分子蛋白质间的相互作用机制提供了很好的分子模型,光敏定位荧光成像技术作为一种全新的单分子荧光成像手段,在基因表 达、信号通路、蛋白质相互作用等许多重要生命活动的研究中发挥重要作用。