基因表达分析方法及其研究进展

近几年来,随着功能基因组学研究的兴起,基因表达研究的分析方法也在不断发展,主要有：差减杂交、差异显示、表达序列标签、基因表达的序列分析、微阵列杂交等。简要评述这五种方法的原理、优缺点等。     

牦牛SND1基因特征序列分析及其蛋白在乳腺的表达

Staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1（ SND1,Tudor-SN）是一种参与基因调控的转录共激活因子蛋白,本研究意在克隆牦牛泌乳相关基因SND1,分析其生物特性,研究其蛋白在乳腺的表达。采集牦牛泌乳期乳腺组织,胰蛋白酶消化法得到原代乳腺上皮细胞,纯化到3代, 采用RT-PCR扩增克隆SND1基因,测序并拼接,并用相关生物信息软件分析牦牛SND1基因特性;用免疫组织化学和免疫荧光技术对牦牛SND1基因编码蛋白进行定位分析。获得如下结果：牦牛SND1基因全序列为3294 bp,含有2733 bp的ORF,共包含20种氨基酸。SND1基因编码蛋白为非分泌蛋白,非跨膜蛋白;同源性分析显示,牦牛SND1基因与野牛、家牛、藏羚羊、山羊、猪、野骆驼、马、黑猩猩、人、褐家鼠的同源性分别为99%、98%、96%、94%、91%、90%、90%、89%、89%、85%;系统进化树表明与野牛和家牛的进化水平较近,与人和鼠的进化水平较远。免疫组织化学染色结果显示,SND1蛋白在分泌上皮细胞（乳腺上皮细胞）和导管上皮细胞呈阳性高表达,在肌上皮细胞呈弱表达。免疫荧光显示,SND1蛋白在乳腺上皮细胞胞核高表达,胞质弱表达。上述研究结果为进一步探究SND1对牦牛泌乳机能的调节提供了相关依据,也为高寒哺乳动物的研究提供了参考资料。     

近亲裸腹溞对海水盐度的适应性

为了解淡水枝角类对海水盐度的适应性,在实验室内采用种群实验生态学方法研究25 ℃±0.5 ℃恒温条件下不同盐度（0、1、2、3、4、5）对近亲裸腹溞(Moina affinis)生存、生长和生殖的影响.结果表明,在各盐度梯度范围内,近亲裸腹溞的平均寿命随盐度升高而缩短,盐度4和5组内禀增长率与其它各组差异显著;盐度4和5组平均每窝产幼量与对照及其他组差异显著.一生产幼量除盐度1组和对照组较高外,其他各组均显著下降.对照组体长增长幅度与日增长率均低于各处理组.日增长率随着盐度的升高而增大.个体平均每胎产幼量以盐度1、2组最高.盐度5为近亲裸腹溞的生存和生殖盐限,但经过短期的海水驯化,其生殖耐盐上限有所提升,可达6.5.     

线粒体渗透性转变孔结构和功能的研究进展

非正常生理浓度的Ca^2 和氧化应激等刺激线粒体渗透性转变孔(mitochondria permeability transition pore,MPTP)开放,使线粒体形态功能发生改变,被释放的细胞色素c和凋亡诱导因子(apoptosisinducing factor,AIF)等参与到caspase信号通路中,诱导细胞发生凋亡。本文在MPTP的主要组成成分、两种不同的结构功能模型、抑制剂对MPTP的抑制机制和缺血,再灌注及缺血预适应对MPTP开放的影响等方面的研究进展作一综述。     

中国红豆杉羟化酶基因TcCYP725A22的克隆与功能研究

基于中国红豆杉（Taxus wallichiana var.chinensis（Pilger） Florin）转录组序列,从中扩增到1个新的P450羟化酶基因TcCYP725A22,并对其进行了克隆、表达及功能分析。生物信息学分析结果显示：该基因编码区长1500 bp,共编码499个氨基酸;编码蛋白无信号肽,包含1个跨膜区,具有催化活性中心结构域。进一步将该基因在酿酒酵母WAT11中进行异源表达功能研究,蛋白质免疫印迹（Western blot）实验结果表明,目的蛋白TcCYP725A22可在WAT11中成功表达;液相色谱-质谱联用（LC-MS）分析结果显示,羟化酶TcCYP725A22对底物紫杉素表现出催化活性。依据质谱结果及反应底物紫杉素的分子结构,判断其催化产物可能为添加了2个羟基的紫杉烷新衍生物。     

胎盘膜胰岛素受体结合活性与巯基和二硫键的关系

部分纯化的人胎盘膜经DTT还原,NEM,DTNB修饰蛋白巯基后,改变了胰岛素受体的结合活性。Scatchard分析表明,当DTT浓度较低时,亲和常数基本不变;高亲和位点数略微升高,较高浓度的DTT处理时,结合位点数和亲和常数均有所下降。DTT还原膜蛋白二硫键后再用NEM,DTNB修饰巯基,胰岛素结合活性进一步下降。NEM或DTNB单独处理结合活性下降较少。胰岛素与受体结合后,用DTT洗后剩余的结合胰岛素比缓冲液洗低,表明有一部分胰岛素以二硫键与受体共价结合。在0—5mmol/L浓度范围内,随着DTT处理浓度的升高,这种以二硫键共价结合胰岛素增加。     

DBP致雌性仔鼠卵巢的氧化应激及VC的干预作用

为探明邻苯二甲酸二丁酯(DBP)宫内暴露对雌性仔鼠卵巢脂质过氧化水平的影响及维生素C(Vit C)的抗氧化应激作用。本研究将20只Wistar孕鼠随机分为5组,分别为高(500 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量DBP染毒组以及高(500 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量DBP+Vit C(125 g/L)干预组和对照(玉米油)组,每组4只。自妊娠第1~19天,每天1次灌胃染毒DBP(10 m L/kg);采用自由饮水方式进食Vit C(约40 m L/d)。待雌性仔鼠出生21 d时,取其卵巢组织,称重,并测定MDA、GSH含量和GSH-Px、SOD、CAT活性。研究发现,与对照组相比,高、低剂量DBP染毒组MDA含量均明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活性均明显降低(p0.05)。高、低剂量DBP+Vit C干预组的仔鼠卵巢组织中MDA含量与相同剂量DBP染毒组相比显著下降,GSH-Px、SOD、CAT活性显著升高(p0.05)。综上所述,DBP宫内暴露可致雌性仔鼠卵巢组织产生脂质过氧化反应,诱导氧化应激,造成潜在生殖毒性,抗氧化剂Vit C对于DBP所致生殖系统的氧化损伤具有一定的保护作用。这为进一步开展DBP生殖发育毒性的机制研究和预防干预提供理论依据。     

连续性血液净化可缓解重症急性胰腺炎患者血清疾病症状

为探讨连续性血液净化对重症急性胰腺炎患者中血清疾病相关指标的影响,本研究选取了100例从2013年7月至2016年9月为止本院所收治的重症急性胰腺炎患者作为研究对象。采用随机数字法的方式,将研究对象分为观察组及对照组各50例进行研究。对照组采用常规方法治疗重症急性胰腺炎,观察组则采用连续性血液净化进行治疗。治疗后,采用酶联免疫吸附试验,测定两组治疗前、后IL-6、TNF-a、IL-10以及PCT水平,比较2组临床疗效及对患者血清疾病相关指标的影响。结果显示,观察组治疗后腹痛缓解、白细胞恢复正常、血淀粉酶恢复及住院时间,均短于对照组(p0.05);观察组治疗后IL-6、TNF-a、IL-10及PCT水平,均低于对照组(p0.05),经过治疗,观察组的并发症发生率显示为8.00%,与对照组14.00%相比较,远低于对照组。本研究表明,连续性血液净化对于重症急性胰腺炎患者血清疾病有相当的改善,有助于促进患者病情恢复,临床上值得推广应用。     

古田山与中国其他东部典型常绿阔叶林物种组成特征的比较

古田山国家级自然保护区保存着大面积低海拔典型常绿阔叶林,为了解不同地点常绿阔叶林物种组成的差异和驱动因素,该研究在古田山常绿阔叶林内共设置29个20 m×20 m的样地,收集其他14个典型常绿阔叶林的数据,探究古田山常绿阔叶林的物种组成特征,并将15个亚热带东部典型常绿阔叶林进行比较,分析了我国东部典型常绿阔叶林的物种组成差异及驱动因素。结果表明:(1)古田山广泛分布有我国东部典型常绿阔叶林中的栲类林、青冈类林等植被,物种组成在东部典型常绿阔叶林中具有代表性。(2)我国东部典型常绿阔叶林间物种组成差异明显,主要是受环境因素影响而非地理距离,气候因素中最冷月最低温(MTCM)的影响最显著。(3)我国东部典型常绿阔叶林叶生活型组成受最冷月最低温的影响最显著,受最热月最高温(MTWM)的影响是其次,降水量没有显著影响。综上结果发现,生境过滤是我国东部典型常绿阔叶林物种组成差异的主要驱动因素,反映了极端低温对我国亚热带常绿阔叶林物种组成具有重要影响,为常绿阔叶林的保护提供了科学依据。     

皱边喉毛花及其近缘物种的叶绿体基因组结构与进化分析

为重建喉毛花属下系统发育关系,明晰属下皱边喉毛花及其近缘种之间的物种关系。本研究利用Illumina高通量测序平台对12 个叶绿体基因组进行双末端测序,获得大量高质量的Clean reads用于后续生物信息学分析。结果表明：（1）喉毛花属下物种的基因组差异较小,均在150 kb左右,基因总数为131 个,其中编码基因81 个。IR区核苷酸多态性比SC低,编码区比非编码区更保守。（2）进化分析结果显示,几乎所有的编码基因受到纯化选择的作用。（3）密码子偏好性分析表明有35 个密码子的RSCU值均大于1,说明使用这些密码子的频率较高,各项密码子偏好性衡量指标说明喉毛花属物种的密码子偏好性较弱。（4）系统发育分析表明CDS、密码子位置与基因间隔区数据集构建的系统发育树具有高度一致的拓扑结构,大部分分支的支持率高。这些结果表明皱边喉毛花及其近缘种的叶绿体基因组无明显差异,在系统发育树上无法按物种聚类,也为后续展开喉毛花属下群体遗传学研究提供科学依据。