针对NSP4基因的shRNA抑制牛轮状病毒的体外增殖

本研究根据牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)的NSP4基因序列,设计并构建了shRNA重组慢病毒载体RNAi-H1-89,利用脂质体介导法,将RNAi-H1-89与辅助质粒共转染293细胞,包装shRNA重组慢病毒;重组慢病毒感染MA104细胞24h后继续接种BRV,以针对LacZ基因的shRNA重组慢病毒为对照,48h后与LacZshR-NA对照比较,RNAi-H1-89明显抑制MA104细胞病变;RT-PCR检测结果表明,针对NSP4基因的shRNA可特异性抑制牛轮状病毒NSP4基因表达;病毒滴度测定表明,在转染50%、75%、95%RNAi-H1-89质粒的细胞培养上清液中,病毒滴度分别是对照组的50%、20%和10%。上述实验结果表明,针对NSP4基因的shRNA能高效地沉默NSP4基因,并且能阻断牛轮状病毒增殖。     

老虎感染猫传染性鼻-结膜炎病毒的研究

用猫肾传代细胞从发病虎的病料中分到了一株杯状病毒粒子样病毒.该病毒大小为35～39nm、无囊膜、在胞浆中病毒前体呈晶格状排列,抗乙醚、不能被 5-IUDR所抑制,能被来源于标准疫苗的猫传染性鼻-结膜炎病毒(或杯状病毒Feline calicivirus, FCV)抗血清所中和,人工感染猫出现典型的FCV感染症状.RT-PCR能扩增出与设计值相符的电泳带,PC R产物直接测序结果与Genebank发表的FCV序列比较,具有较高的同源性.系统鉴定证明所分离的这株病毒为FCV强毒株,从老虎中分到FCV在世界上尚属首次报道.     

凝胶过滤与镍柱亲和纯化金葡菌α-溶血素重组蛋白的生物学特性比较

以在宿主菌株BL21(DE3)中成功表达的重组金黄色葡萄球菌α-溶血素蛋白为研究对象,分析比较通过凝胶过滤层析(Gel filtration chromatography)和镍柱亲和层析纯化试剂盒(Ni-NTA spin columns)纯化所得到的重组蛋白的蛋白含量和生物特性方面的差异.SDS-PAGE分析检测纯化产物,Bradford法测定蛋白含量,兔红细胞测定半数溶血效价,结果显示这2种方法得到的纯化产物在53 kD处均呈现单一清晰带,达电泳级纯度.与此同时,凝胶过滤对目的蛋白的纯化率为14.04%,蛋白含量为0.337 mg/mL,溶血活性为1519 HU/mg;镍柱亲和层析的纯化率为17.5%,蛋白含量为0.35 mg/mL.溶血活性为1463 HU/mg.由此可见,凝胶过滤得到的纯化产物在蛋白含量和蛋白活性方面丝毫不亚于镍柱亲和层析纯化试剂盒.     

大熊猫犬瘟热病毒融合蛋白基因3′端的序列测定

从死亡大熊猫的肝脏中直接提取细胞总ＲＮＡ,经反转录后,用犬瘟热病毒的两对引物,分两段扩增出融合蛋白基因３′端的片段。经序列分析表明：此片段的长度为６９３ｂｐ;此毒株在核苷酸和氨基酸水平与某疫苗弱毒株、Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株、海豹瘟热病毒２型毒株和海豹瘟热病毒１型的同源性分别为９７．５％和９６．２％、８８．６％和９４．５％、９２．９％和９５．６％、６３．２％和７６．５％;大熊猫毒株与其它毒株融合蛋白３′端疏水性和二级结构均有一定差异;其非编码区比国外报道的Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株多９个碱基,在非编码区最后５８个碱基,两毒株仅有１７个相同。至于这种差异的生物学意义尚待进一步的研究     

犬瘟热疫苗弱毒融合蛋白基因5′端的序列特点

犬瘟热是我国养犬业、毛皮动物饲养业及野生动物保护业的头号大敌.鉴于本病目前尚无特效的治疗药物和方法,疫苗接种是唯一有效可行的防治措施.但是疫苗毒株是否适用于所有动物?如何解释实际生产中出现的免疫失败现象?我国现用疫苗毒株本身的背景怎样?