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961.
在甲醇酵母Pichia pastoris胞内表达有活性的辣根过氧化物酶 总被引:5,自引:0,他引:5
为了开辟在甲醇酵母 Pichia pastoris中表达 HRP的新途径 ,将编码成熟 HRP同功酶 C基因克隆到表达载体 p PIK3.5K中 .p PIK3.5KHRP转化 GS1 1 5后 ,用 PCR筛选阳性 P.pastoris重组株 ,并用甲醇进行诱导 . Western印迹杂交分析表明目标蛋白 (约为 38k D)能被天然 HRP的多克隆抗体所识别 ,因此活性辣根过氧化物酶已在 P.pastoris胞内表达 .筛选菌株中显示了明显的过氧化物酶活性 ,同时诱导过程中血红素和 Ca Cl2 的加入对过氧化物酶的活力影响不大 相似文献
962.
963.
鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88·1%、84·9%和83·8%。将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达质粒pSV-F,通过脂质体转染COS-7细胞,SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带;Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明:真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应,说明F蛋白具有很好的免疫原性。采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡,剂量为50μg/只,3周后加强免疫1次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定。结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价,攻毒后检测效价为3·0log2±1·40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价,第5周最高,HI效价分别为8·3log2±1·30和7·2log2±1·23,攻毒1周后HI效价分别达9·8log2±1·55和8·9log2±1·77,极显著高于对照组(P<0·01)。免疫组未分离到新城疫病毒,对照组全部分离到新城疫病毒。表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 相似文献
964.
巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因在枯草杆菌中的高表达 总被引:9,自引:2,他引:9
用PCR方法从巨大芽孢杆菌的基因组DNA中扩增到青霉素G酰化酶基因,并装载到枯草杆菌质粒pPZW103中,将其转化到枯草杆菌DB104中进行了分泌表达,重组菌株产酶无需苯乙酸诱导。在37℃培养24h,菌液酶活力可达6u/ml。10天的连续传代实验表明重组菌株的稳定性很高。 相似文献
965.
目的:研究久肝胶囊的解酒作用及其机制.方法:用白酒直接灌胃建立小鼠醉酒模型,分别进行致醉、防醉、解酒试验,观察久肝胶囊的药效;长期给酒造成酒精性肝损伤模型,测定小鼠血清中及肝脏中乙醇脱氢酶(ADH)和谷丙转氨酶(GPT)活性.结果:小鼠最适致醉量为0.16 ml/10g;久肝胶囊对醉酒能起到预防作用,且使醉酒小鼠翻正反射恢复时间缩短;对酒精性肝损伤小鼠,久肝胶囊能使血清ADH、GPT活性及肝中ADH活性恢复正常.结论:久肝胶囊具有较好的预防醉酒和解酒作用,对酒精性肝损伤亦有较好的保护作用,其机制可能与恢复ADH和GPT活性有关. 相似文献
966.
967.
968.
969.
痘苗病毒载体研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
制备高活性的真核蛋白,必须使用哺乳动物细胞,痘苗病毒为这一工作提供了简便、实用的工具.痘菌病毒宿主范围广,无致癌性,插入长达20多kb的外源基因后仍有感染性,能够高效表达外源蛋白,有效地加工表达产物.而且,痘菌病毒的表达产物可刺激机体免疫系统产生良好的体液免疫和细胞免疫.利用这些特点构建成的哺乳动物细胞高效表达系统将是基因工程药物和基因工程疫苗的有效工具. 相似文献
970.