机敏漏斗蛛染色体初步研究

本文对机敏漏斗蛛Agelena difficlis Fox,1936的染色体进行了初步研究,发现其染色体数目为2n=44.19对染色体为近中部着丝粒染色体和中部着丝粒染色体,2对为端部着丝粒染色体,1对为性染色体,雄性为XY,雌性为XX。     

基因前定点敲入FLAG标签表达的FLAG-SND1蛋白参与胞内应激颗粒的形成

CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease) 基因编辑技术是近年来新兴的一种可以实现基因特异性敲除和敲入的技术。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑系统,将3×FLAG标签定点敲入HeLa细胞SND1基因前方,使细胞内源性表达的SND1蛋白带有3×FLAG标签,并观察SND1与应激颗粒及加工体的定位情况。设计针对SND1基因起始密码子ATG附近的sgRNA,以px459为表达载体,构建出重组真核表达质粒。设计含有3×FLAG及待插入位置上下游150 bp同源臂的序列,经公司合成获得重组质粒。将2个质粒共同转染HeLa细胞,使用嘌呤霉素筛选阳性细胞,挑取单克隆后培养。Western 印迹表明,细胞表达3×FLAG-SND1融合蛋白质。提取细胞基因组DNA进行测序。测序无误获得稳定株后,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,发现与WT细胞相比无显著性差异。同时,使用0.5 mmol/L亚砷酸钠处理,细胞发生氧化应激,eIF2α蛋白磷酸化增加,胞浆中出现应激颗粒,SND1与应激颗粒标志蛋白TIAR存在共定位现象,但不存在与加工体蛋白DCP1α的共定位。     

人源CT55蛋白原核表达及单克隆抗体的制备

为制备Cancer testis 55(CT55)单克隆抗体,需构建带有人源CT55片段的原核表达质粒,把该质粒转化Rosetta感受态进行原核表达并得到目的蛋白,蛋白质被纯化后免疫6周雌性BALB/c小鼠。按传统的单克隆抗体的制备方法,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合,经ELISA方法筛选及两次连续亚克隆,共获得多株能稳定分泌抗CT55蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,如3D8B7B12、4C8E1C9、3D8C10G9等。ELISA及Western blot(WB)分析结果表明,筛选的细胞株均能产生单克隆抗体,且该抗体均分别能与原核表达及真核表达的CT55蛋白发生特异性结合。单克隆抗体可用于免疫荧光试验,且与P53发生互作的荧光主要位于细胞核边缘。结果表明,成功制备了针对人源CT55蛋白的单克隆抗体。CT55蛋白单克隆抗体的制备为今后肝癌、胃癌、结肠癌等癌症的快速的病原学诊断以及CT55蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。     

10种菊科植物的抗旱性与抗盐性评价

为筛选能够应用于干旱地区及盐性土壤的花海植物,以10种具有代表性的菊科植物为材料,利用PEG-6000溶液和盆栽控水法分别在种子萌发期和幼苗期进行干旱胁迫,利用NaCl溶液分别在这两个时期进行盐胁迫,测定供试植物种子的发芽指标、幼苗的质膜相对透性以及抗氧化酶活性等生理指标,通过隶属函数法全面评价10种菊科植物的抗旱性和抗盐性。结果表明:干旱或盐胁迫下,10种测试植物的生理指标变化显著;其中,相对电导率、丙二醛(MDA)含量均增加,但抗性强的品种增幅较小;过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性因物种不同存在差异;抗旱性强弱次序为波斯菊万寿菊小丽花硫华菊五色菊向日葵麦秆菊矢车菊勋章菊异果菊;抗盐性强弱次序为波斯菊硫华菊小丽花万寿菊五色菊矢车菊向日葵麦秆菊勋章菊异果菊。     

两种切梢小蠹危害云南松的时空生态位

【目的】云南切梢小蠹Tomicus yunnanensis KirkendallFaccoli和横坑切梢小蠹Tomicus minor(Hartig)是中国云南地区两种危害松属Pinus L.植物的钻蛀性害虫,常在云南松Pinus yunnanensis Faranch.上共同危害,通过蛀梢和蛀干为害造成树木衰弱死亡,生态破坏,带来经济损失。【方法】通过样地调查和树木解析,对两种小蠹在"梢转干"及"干转梢"时期的时间和空间生态位进行了研究。【结果】"梢转干"时期之后,横坑切梢小蠹主要分布在主干中下部,云南切梢小蠹分布在主干中上部;侧枝上主要分布着云南切梢小蠹,而横坑切梢小蠹数量很少;5月中旬进入"干转梢"阶段,两种小蠹同时进入羽化期,云南切梢小蠹在6月1日左右到达羽化高峰期,横坑切梢小蠹则比其晚10 d左右到达羽化高峰期;两种小蠹成虫转梢危害后随机分布。两种小蠹的时间和空间生态位宽度均较大,发生期较长,在云南松上分布范围较广。两种小蠹空间生态位重叠较小,在云南松上的分布趋于分离,对空间资源的需求具有较大差异;而时间生态位重叠较大,在云南松的生长季节能同时危害,且发生期较一致,危害期长。【结论】两种小蠹在空间生态位上的种间竞争强度较小,而在时间生态位上的竞争较大。通过研究比较两种切梢小蠹时间及空间生态位的特性及差异,为遥感监测云南松林的生物灾害提供了支撑依据。     

跨膜Ca~（2＋）梯差通过调节膜脂流动性影响G_s激活腺苷酸环化酶

将牛脑皮层激活型Ｇ－蛋白（Ｇｓ）和腺苷酸环化酶（ＡＣ）重建于大豆磷脂脂质体,形成具有或不具有１０００倍跨膜Ｃａ＾２＋梯差的四种脂酶体,研究了跨膜Ｃａ＾２＋梯差对Ｇｓ功能的影响及其与膜脂物理状态的关系。结果表明,在具有与生理条件相似的正向跨膜Ｃａ＾２＋梯差的脂酶体Ａ中,ＡＣ的基础活力和Ｇｓ对ＡＣ的激活活力均最大;而跨膜Ｃａ＾２＋梯差与生理条件相反时（脂酶体Ｄ）,ＡＣ的基础活力和Ｇｓ对ＡＣ的激活作用最     

猪卵丘细胞对卵母细胞膜电位影响的研究

本文应用细胞内微电极技术,测试分析了猪卵丘细胞对卵母细胞膜电位的影响。结果表明,卵母细胞周围卵丘细胞的数量和形态特点的差异对卵母细胞膜电位有显著影响,Ａ、Ｂ、Ｃ三类卵母细胞的膜电位有极显著差异。Ａ类和部分Ｂ类母细胞的膜电位为负值,Ｃ类和另一部分Ｂ类卵母细胞的膜电位为正值。     

利用邻二氮菲光度法测定抗坏血酸

利用邻二氮菲光度法测定抗坏血酸谢晓梅,任镇章（安徽中医学院中药系．２３００３８）抗坏血酸（Ｖｃ）是人体不可缺少而又不能在人体中合成的一种维生素,它参与机体的代谢过程,可帮助酶将胆固醇转化为胆酸排泄而减慢毛细管的脆化,增强机体的抵抗能力。ＶＣ还可用来治...     

利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)作扩增标记在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因

利用谷氨酰胺合成酶基因（ＧＳ）［１］作扩增选择标记,结合ＣＭＶ－ＩＥ启动子,在ＣＨＯ细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平ＲＰＨＡ检测为１：６４,经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂ＭＳＸ的两轮基因扩增,ＨＢｓＡｇ的表达水平ＲＰＨＡ在１：２５６以上。方瓶静置培养收液,ＲＩＡ检测ＨＢｓＡｇ最高产量为９．５μｇ／毫升。表达水平较以前利用ｄｈｆｒ基因扩增选择系统所得到的高表达细胞系Ｂ４３高一倍以上。利用ＧＳ基因扩增选择系统可以在哺乳动物细胞中高水平表达外源基因。     

中国萱草属药用植物资源学研究

对中国萱草属药用植物进行了本草学分类、分布、显微组织、化学成分、含量测定等方面的研究,为正确分类鉴定及安全有效地用药提供了依据。