利用逆转录病毒RNAi载体抑制心肌成纤维细胞分泌纤维连接蛋白

心脏间质纤维化是心室重塑的最重要表现之一, 心肌细胞外基质的过度积聚在其中扮演着重要角色. 纤维连接蛋白是细胞外基质的重要成分之一, 它负责胶原之间的连接、细胞的黏附和增殖等. 纤维连接蛋白主要由心肌成纤维细胞产生. 由于导致心肌细胞外基质过度分泌的因素很多, 单独阻断某一上游途径很难完全抑制由其他途径导致的过度合成. 利用RNAi技术试图在细胞外基质合成的终末途径进行阻断以期达到更为有效的结果. 通过体外合成的双链RNA, 抑制了纤维连接蛋白在血管紧张素Ⅱ刺激下的过度表达, 进而构建带有H1启动子的逆转录病毒载体, 成功地实现了用可稳定表达的shRNA抑制纤维连接蛋白的过度分泌. 该载体也可作为今后进行基因功能快速分析和基因治疗的工具.     

生物合成谷胱甘肽种间耦合ATP再生系统的构建

利用重组大肠杆菌Ⅱ 1中的谷胱甘肽合成酶系和面包酵母WSH J7中的ATP生物合成酶系 ,构建了一个以葡萄糖为能源的种间耦合ATP再生系统。经过通透性处理的酵母细胞几乎不能消耗葡萄糖。在反应体系中添加 1mmol/LAMP和 0 0 5mmol/LNADH ,即可启动酵母的酵解途径。提高耦合系统中的葡萄糖浓度 ,可促进GSH的合成。当葡萄糖浓度为 40 0mmol/L时 ,系统内GSH浓度达到 1 0 4mmol/L(3 2 g/L)。Mg2 +缺乏时 ,耦合系统和外加ATP的非耦合系统均不能合成谷胱甘肽。耦合系统中Mg2 +与ATP形成螯合物 ,可能是导致耦合系统中GSH产量较低的原因。在耦合系统中补加Mg2 +,反应 6h时GSH浓度达到 1 4 3mmol/L(4 4g/L)。     

对"探索温度对酶活性的影响"实验的一点建议

高二年级 [实验七 ]“探索影响淀粉酶活性的条件”之一——“温度对酶活性的影响”实验时 ,按照课本上的方法步骤是 :1)取 3支洁净的试管 ,编号 ,并且分别注入2 m L质量分数为 3%的可溶性淀粉液 ;2 )将 3支试管分别放在 6 0℃左右的热水、沸水、冰块中各维持 5 min;3)取出 ,分别滴入 1m L质量分数为 2 %的新鲜淀粉酶溶液 ,摇匀后 ,再在各自温度中维持 5 min;4 )在 3支试管中分别滴入 1滴碘液 ,观察现象。按照课本实验原理的推测 ,沸水和冰块中的试管应变蓝色 ,而 6 0℃左右热水中的试管不变蓝色。但是通过实验 ,我校全年级近370名学生几乎…     

压力蒸汽灭菌指示剂的筛选和效果验证

利用结晶物质在一定温度下熔融的特性,通过对几种灭菌指示剂内容物进行熔点测定,选出苯甲酸化学试剂和升华硫化学试剂作为高压灭菌指示剂和灭菌参考指示剂。试验表明,这两种指示剂终点明确,简便快速,价格便宜,能满足121℃高压灭菌的温度要求,可以对高压灭菌的日常监测提供依据。     

核受体辅活化子PNRC与孤儿核受体SF1的相互作用有赖于SF1的AF-2功能结构域

核受体辅活化子PNRC(proline richnuclearreceptorcoregulatoryprotein ,富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白 )可通过含SH3结合模体的PNRC2 78 30 0区域与孤儿核受体类固醇生成因子 1(steroido genicfactor 1,SF1)相互作用 .激活功能 2 (activationfunction 2 ,AF 2 )结构域在核受体配体依赖性转录激活中发挥了重要作用 ,为探讨AF 2结构域在SF1转录激活中的作用机制 ,采用酵母双杂合分析、缺失突变技术和瞬时转染等研究方法考察了AF 2结构域对SF1反式激活功能及SF1与PNRC相互作用的影响 .SF1的反式激活功能有赖于AF 2结构域 ,其机制是SF1AF 2结构域的突变严重影响了SF1与PNRC的有效相互作用 ,并消除了PNRC对SF1反式激活功能的辅激活作用 .结果表明 ,SF1与PNRC的相互作用有赖于AF 2的功能结构域     

实验性心肌肥厚大鼠左室c-fos表达及卡托普利的作用

心肌肥厚时,心肌细胞作出适应性反应发生结构改建,这种重构与压力超负荷早期心肌细胞 原癌基因表达过盛密切相关。本文应用大鼠腹主动脉缩窄模型结合血管紧张素转化酶抑制剂 卡托普利(Cap),研究心肌肥厚早期c-fos表达及六周后血压、心功能及酶学指标的改变, 以探讨Cap抑制心肌肥厚的可能机制。 1　材料与方法 　　(1)动物模型复制　采用体重(250±20) g的健康、雄性SD大鼠(由本校动物室提供),按腹主 动脉缩窄法制备压力超负荷性心肌肥厚模型,使腹主动脉残留管腔直径为0.7 mm。 　　(2)动物分组　动物分成两部分：第一部分：大鼠19 只,其中4只,在腹主动脉缩窄前及缩 窄后1 h、3 h、12 h分别处死,留取心脏。另15只随机均分成手术组、伪手术组、Cap治疗 组(n=5)。复制心肌肥厚模型后3 h处死动物,留取心脏,提取总RNA,检测左室c-fos mRNA表达。第二部分,大鼠30 只,随机均分成手术组(LVH,n=10,腹主动脉缩窄后未 用Cap治疗),伪手术组(sham,n=10,行伪手术)及Cap治疗组［LVH+Cap,n=10,腹 主动脉缩窄后用Cap50 mg/(kg*d)治疗］。建立模型6周后,右颈总动脉插管,记录动脉血 压后,进一步插管入左室,测取并计算左室内压力最大上升、下降速率及等容舒张期左室压 力下降的时间常数(T值)。处死动物,留取心脏标本备用。 　　(3)左心室c-fos mRNA表达　取左室心肌组织50 mg,一步法抽提RNA。用地高辛随机引物法 标记的c-fos探针(华美生物试剂公司,cDNA片段,1.3kb)进行斑点杂交,IBAS图象分析仪 测定杂交信号的相对光密度(IOD)。 　　(4)心肌重量及质膜Na+-K+ATPase活性测定　称量左室重量(LVW)及体重(BW),计算LVW /BW。制备10%心肌匀浆,差速分离质膜及线粒体。通过检测反应液中ATP水解释放的无机磷 含量来确定酶活性。     

孔雀石绿、温度对长刺溞存活的影响

研究孔雀石绿对长刺 96小时的急性毒性反应以及温度对长刺存活的影响 ,结果表明 ,孔雀石绿对长刺的安全浓度为 0 0 30 3× 10 -6;长刺的存活温度为 1～ 44℃ ,最适温度是 18～ 2 5℃     

克隆绵羊——多莉（DOLLY）的研究进展

多莉，第一例大型克隆哺乳动物，由一只称为ＦｉｎｎＤｏｒｅｔ的６岁母羊乳腺体细胞的基础生命物质经细胞核转移等操作而产生。成果分布后，持怀疑观点的学者提出，提供体细胞的母羊是否本身处在妊娠状态？推测多莉是由胚胎细胞产生，并非体细胞本身克隆所致。由于６岁的母羊死于１９９５年，只能用其冷冻保存的乳腺组织在Ｈａｎｎａｈ研究中心进行细胞群体的分析。首先，用微卫星扩增技术，以三套引物进行测定；其次，进行ＤＮＡ指     

云南中度退化的喀斯特天坑草地植物群落优势种种间关系

喀斯特天坑作为独特的宏大地表负地形,其坑底生境与外界环境相互独立,呈现出独特的植物群落格局及特征.本研究选取云南沾益天坑群中可进入性较强的中度退化天坑--巴家陷塘为对象,筛选出重要值大于1的优势种,结合总体关联性分析、χ²检验、AC联结系数及Spearman秩相关系数对巴家陷塘退化天坑植物群落中11种优势种的种间关联性和相关性进行研究.结果表明: 巴家陷塘退化天坑植物群落种间联结指数VR=1.377>1,总体呈显著正关联,但正负关联差异较大,阳生型植物和阴生型植物呈极显著负关联,现阶段仍具有独立的分布格局,但呈逐渐趋于稳定的趋势;Spearman分析中种间正相关对数(26对)少于种间负相关对数(29对),结合天坑微环境的差异,将退化天坑的优势物种划分为3个生态种组,群落总体呈现出一定的圈层分布规律.