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用 RNA 干扰 (RNA interference , RNAi) 技术抑制哺乳动物细胞中外源报告基因的表达,以探讨该过程中 RNAi 作用的剂量和时间效应 . 应用 Lipofectamine 2000 将外源报告基因的表达载体与编码短发夹 RNA (short hairpin RNA , shRNA) 的质粒共转染 HEK293H 细胞,观察 shRNA 载体对报告基因的抑制效应 . 转染后, shRNAs 的瞬时表达可特异地抑制细胞内报告基因的表达 . 在共转染后 12 , 24 , 48 , 60 , 72 , 96 h 时检测 EGFP (enhanced green fluorescent protein , EGFP) 基因 mRNA 及蛋白质表达水平,结果显示, EGFP mRNA 及蛋白质表达在 12 h 时略有降低, 24~48 h 时表达逐渐降低, 48~72 h 时降低最明显,其后 EGFP 表达水平逐渐恢复 . 提示该过程中 RNAi 效应呈现由弱到强、又由强到弱的逐渐消逝趋势 . 共转染一系列剂量比例的 EGFP 干扰载体与靶载体的结果表明,在一定剂量范围内, RNA 干扰载体所介导的抑制效应与干扰载体剂量大小有关,当其剂量进一步加大足以抑制外源基因表达时,抑制效应则维持在一“平台期” . 此外,通过 RNAi 抑制 HeLa 细胞、 HEK293 细胞中荧光素酶基因的表达, 荧光素酶活性变化也表现出上述类似的效应 . 这些结果表明,在体外哺乳动物细胞中,基于表达载体的 RNAi 作用呈现剂量和时间依赖性效应 . 这为基于载体表达的 RNAi 技术应用研究提供了一定的理论参考及依据 . 相似文献
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豫西寒武系苗岭统张夏组薄层微晶灰岩中发育了大量的Thalassinoides bacae遗迹化石,利用微区X射线荧光光谱仪和扫描电镜观察,并结合能谱分析,对Thalassinoides bacae遗迹化石的元素分布及微观特征进行分析。结果表明:衬壁与围岩的元素特征相似,晕圈的Fe、Mg富集;在填充物与衬壁的边界处Fe的含量高,且有大量的莓状黄铁矿(微晶呈八面体、五角十二面体、立方体、球体和不规则形)、黄铁矿的自形单晶及其铁的氧化物。认为晕圈构造是受到铁白云石流体的影响而形成的成岩晕;莓状黄铁矿的特征表明其为生物成因,为Thalassinoides bacae的耕作行为习性提供了重要依据,表明造迹生物在潜穴衬壁的边缘培植微生物以提供食物来应对食物贫乏,这是早期生物行为习性进化及后生动物向不同环境辐射的重要标志。 相似文献
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裸肉足虫作为联结微生物和大中型土壤动物的重要环节, 在土壤生态系统物质循环和能量流动过程中起着重要作用。为探明裸肉足虫群落沿海拔梯度的分布特征及其主要驱动因子, 作者在长白山北坡选择不同海拔梯度(700 m、1,000 m、1,300 m、1,600 m、1,900 m和2,200 m), 采用最大可能数法对裸肉足虫进行了培养计数, 并采用平板培养、标记、分离再培养的方法进行了分类鉴定, 分析比较了不同海拔梯度裸肉足虫的群落组成和结构特征。结果表明: 长白山北坡裸肉足虫物种丰富, 不同海拔梯度裸肉足虫丰富度指数存在显著差异, 且与土壤酸碱度呈极显著正相关关系。其中林分较为单一的岳桦(Betula ermanii)林带(1,900 m)裸肉足虫丰富度最低, 位于植被交错带的针阔混交林带(1,000 m)裸肉足虫丰富度最大, Shannon-Wiener多样性指数和Pielou均匀度指数在不同海拔梯度间不存在显著性差异, 但变化趋势与丰富度一致。聚类分析结果显示, 1,300 m、1,600 m和1,900 m海拔带以及700 m和2,200 m海拔带裸肉足虫群落组成较为相似。典范对应分析(canonical correspondence analysis, CCA)显示, 裸肉足虫群落组成和结构主要受土壤酸碱度、铵态氮以及碳氮比的影响, 而海拔和土壤含水量对其没有显著影响。综上, 裸肉足虫群落多样性随海拔梯度的增加并未呈现递减或单峰的变化趋势, 土壤的基本理化性质是驱动裸肉足虫群落分布的主要因素; 此外, 地上植被也可能通过凋落物和根系分泌物间接影响裸肉足虫的群落组成和多样性。 相似文献
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组织蛋白酶D基因C224T多态与散发阿尔茨海默氏病的关联研究 总被引:2,自引:1,他引:1
组织蛋白酶D(Cathepsin D)是一种细胞核内体/溶酶体内的门冬酰胺蛋白酶。它有可能通过剪切淀粉样前体蛋白参与阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease, AD)相关的神经退化。在以德国人为对象中的研究显示组织蛋白酶D基因(CTSD)C224T多态与AD发病风险紧密相关。然而,此结果未能在另一些群体中得到重复。为此,我们通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分析了CTSD基因C224T多态性和载脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)基因多态性在成都地区汉族老年人中的分布,探讨了CTSD C224T多态与散发AD的相关性。结果发现CTSD基因C224T多态分布在病例组与对照组之间没有显著性差异,提示成都地区汉族人群中CTSD基因C224T多态与散发AD不具有关联;但比值比的比较提示CTSD等位基因T和ApoEε4有弱的协同作用。Abstract: Cathepsin D is the major lysosomal/endosomal aspartic protease and exhibits β- and γ-secretase-like activity in vitro. Data from German suggest that the C224T polymorphism in the Cathepsin D gene (CTSD) exon 2 is strongly associated with the risk for Alzheimer’s disease (AD).Meanwhile other studies have not been able to replicate the result. It’s necessary to determine the genotype of the polymorphism in CTSD in Chinese sporadic AD patients and age-matched controls with normal cognition and examine possible association of the polymorphism with the disease. We find no strong evidence of association between the CTSD C224T polymorphism and Chinese sporadic AD. Whereas there may be a weak synergistic interaction between ApoE ε4 and CTSD T allele. 相似文献
58.
为研究内源性TGF-β1对全反式视黄酸(ATRA)作用HL60细胞的影响,应用定量RT-PCR和ELISA方法,研究ATRA诱导HL-60细胞分化过程中TGF-β1 表达的变化.并构建TGF-β1 RNA干扰表达质粒,抑制HL-60细胞内源性TGF-β1表达,进而研究ATRA诱导内源性TGF-β1表达下降的HL-60细胞分化的情况.结果发现,ATRA诱导HL-60细胞分化过程中,TGF-β1 表达明显增高.得到4个针对不同靶位点的RNA干扰表达质粒.其中,针对起始编码区的质粒转染48 h后对HL-60细胞的TGF-β1蛋白抑制率为73~2%.内源性TGF-β1表达下降后,ATRA作用的HL-60细胞NBT还原试验的光密度值降低,CD33抗原阳性的细胞比例较对照组升高,CD11b抗原阳性的细胞比例较对照组降低.表明内源性TGF-β1表达下降后,ATRA诱导HL-60细胞分化的作用有所减弱,提示内源性TGF-β1在ATRA诱导HL-60细胞分化中起一定的作用. 相似文献
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目的了解长春地区就医人群中幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)毒力基因分布,分析本地区H.pylori主要毒力基因型与胃十二指肠疾病关系。方法将胃黏膜标本培养分离H.pylori并运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对H.pylori的三种毒力基因cagA、vacA(s1a、s1b、s1c、s2、m1a、m1b、m2、i1和i2)、iceA(iceA1和iceA2)及其亚型进行检测,分析H.pylori的毒力基因型与疾病之间的关系。结果分离H.pylori 60株,标本依据病理诊断结果分为4组:消化性溃疡组(peptic ulcer disease,PUD)25株、非溃疡性消化不良组(non-ulcer dyspepsia,NUD)9株、糜烂性胃炎组(gastritis erode,GE)15株和胃癌组(gastric cancer,GC)11株。cagA基因的阳性率为90.0%,与阴性相比在疾病中的分布差异有统计学意义(x~2=8.4440,P=0.0270)。vacA基因的s1和s2亚型的阳性率分别为86.7%和13.3%。在s1阳性菌株中,s1c等位基因检出率最高为33.3%,其次s1a检出率为23.3%,而s1b在NUD和GC中检出率为0.0%。vacA基因m区m1检出率为43.3%(m1a和m1b检出率均为21.7%)和m2检出率为56.7%。vacA基因i区等位基因i1和i2的检出率分别为78.3%和21.7%,i1明显高于i2,可能是胃肠道疾病的主要毒力因子,但与疾病的类型无明显相关性。iceA1和iceA2的阳性率分别为80.0%和16.7%,iceA1/iceA2混合型的阳性率为3.3%。三种毒力基因混合型以cagA~+/vacAs1m1i1/iceA1的菌株最多,占总数的31.7%,其次为cagA~+/vacAs1m2i1/iceA1,占总数的28.3%。结论本地区H.pylori毒力因子cagA、vacA和iceA都与胃十二肠疾病的发生密切相关,但与疾病的类型无关。H.pylori毒力基因混合型cagA+/vacAs1m1i1/iceA1和cagA~+/vacAs1m2i1/iceA1是胃十二肠疾病疾病中最主要的优势基因型,其分布也与疾病的类型无密切相关性。 相似文献
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