毛竹β-1,4-糖苷酶基因cDNA克隆与表达分析

根据水稻β-1,4-糖苷酶(korrigan)基因的保守区序列设计引物,以毛竹cDNA为模板,采用PCR方法,成功扩增出1个含有完整阅读框架的cDNA序列,长度为2191bp,共编码617个氨基酸,将其命名为PeKOR基因。其氨基酸序列分析的结果表明,PeKOR与其他β-1,4-糖苷酶有较高的同源性,同水稻序列相似性高达91%,且其序列具有典型的Glycosyl hydrolase9super family结构域,推测此PeKOR为毛竹β-1,4-糖苷酶基因。在竹笋中采用半定量方法研究该基因的表达情况,结果表明该基因在高温条件下表达量较低温条件下明显升高。     

壳聚糖絮凝沉淀纯化翅果油树叶片多糖的方法探究

采用壳聚糖絮凝沉淀法对翅果油树(Elaeagnus mollis Diels)叶片多糖进行纯化研究,分别考察了壳聚糖用量、絮凝时间、絮凝温度及溶液酸碱度(pH)对吸附色素、沉降蛋白质和多糖损失率的影响,并采用正交试验优化出壳聚糖絮凝法纯化翅果油树叶片多糖的最佳条件为:壳聚糖用量1 mg/mL、溶液pH值=5、絮凝时间50~70 min、絮凝温度20~40℃。实验结果表明,在最佳条件下,色素含量和蛋白质含量分别降低了69%左右和35%左右,多糖的纯度也得到了一定的提高。     

993例先天性智力低下患儿的细胞遗传学研究

本文对993例先天性智力低下患儿外周血淋巴细胞进行了G显带染色体分析,检出异常核型234例,检出率23.56%．其中常染色体数目异常190例（19.13%),常染色体结构异常27例（2.72%);性染色体数目异常12例（1.2%),性染色休结构异常5,例（0.51%)．提示先天性智力低下与染色体异常密切相关．     

一株产冠菌素新菌种的分离与鉴定

【目的】从不同样本中分离筛选性能稳定的产冠菌素菌株。【方法】根据冠菌素引起植物叶片产生弥散性黄萎病、块茎膨大的特性,采集各种植物病叶、病枝及感病植物的土壤,采用穿刺法与系列稀释法分离筛选菌株;液相色谱测定菌株产生的冠菌素;在电子和光学显微镜下观察菌体形态;根据生理生化试验、(G+C)mol%含量、16S rDNA序列分析等对菌株进行鉴定;对分离提纯的发酵产物进行紫外、质谱和红外分析。【结果】菌株BBC933为革兰氏阴性菌,端生鞭毛,短杆状,无芽孢。在41℃下不生长,细胞内有聚β-羟基丁酸盐颗粒积累,没有精氨酸双水解酶和氧化酶,不能水解淀粉、明胶,不进行硝酸还原及反硝化作用,过氧化氢酶反应呈阳性。菌株的(G+C)mol%含量为67.2%,根据该菌株16S rDNA序列的同源性分析,构建系统发育树。【结论】菌株BCC933鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholder cepacia),具有产冠菌素性能。国内外未曾见报道洋葱伯克霍尔德氏菌产冠菌素。     

ZNF230/荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在Cos细胞中的表达与定位

为了用绿色荧光蛋白标记观察人类无精症相关基因ZNF230在Cos7细胞中的蛋白质表达及定位,用PCR方法扩增得到突变的人和小鼠mt-ZNF230和mt-znf230基因,使其3′端的终止密码TGA突变为TGG,并装入T-载体,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP-N1的绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP）基因融合,构建了ZNF230—荧光蛋白融合基因表达载体。然后经真核表达质粒－脂质体介导,导入Cos7细胞系。荧光显微镜观察显示：在空白载体pEGFP-N1转染的Cos细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP-ZNF230的Cos细胞中荧光主要聚集在细胞核中。表明转染的Cos细胞系能高效表达人ZNF230和小鼠znf230蛋白,ZNF基因表达的蛋白定位于细胞核内。Abstract: To use green fluorescent protein as a marker to studythe localization of the fusion protein, the mutant full length cDNAs of human ZNF230 and mouse znf230 with their stop codon TGA changed to TGG were obtained by PCR amplification., and then cloned into pGEM-Teasy vector. After the double enzyme cutting, the mutated human and mouse ZNF230(znf230) were inserted into mammalian expression plasmid pEGFP-N1.Thus we constructed the plasmid with fusion gene of ZNF230 and green fluorescent protein(GFP).Then the Cos cell was transfected with the fused gene by liposome. Fluorescence microscopy showed that green fluorescence protein expressed over the whole cell when transfected with vector pEGFP-N1.While after the transfection with pEGFP-ZNF230, the fluorescence located mainly on the nuclei of the cells. We demonstrated that the transfected Cos cell line can express human ZNF230 and mouse znf230 with high efficiency.When transfected with the constructed recombinant pEGFP-ZNF230 vector, the ZNF230 protein localizes mainly on the nucleus.     

茉莉酸类与植物地下贮藏器官的形成

茉莉酸类化合物（茉莉酸及其衍生物）可能参与了马铃薯,薯蓣,菊芋的块茎,甘薯的块根以及洋葱,大蒜的鳞茎形成,JA及MeJA均可诱导离体下马铃薯块茎的形成和马铃薯髓部细胞的膨大,JA诱导细胞膨大是由于蔗糖积累导致渗透压增加以及细胞壁结构变化,从而使其伸展性增加,纤维素的合成起了重要作用,细胞骨架也是JA诱导细胞膨大所必需的,但迄今为止,尚未确定块茎形成的直接诱导物。     

niaD基因与uidA基因共转化糖化酶高产菌株Aspergillus niger T21

从AspergillusnigerT21分离到自发性的氯酸盐抗性株,再经氮源生长试验获得硝酸盐还原酶缺陷的niaD突变体N44。用含有niaD的质粒pSTA10转化N44,转化频率为5个／μg（转化子／DNA）。转化子的Southern印迹分析表明niaD基因同源整合到N44的染色体DNA中。pSTA10与含葡糖苷酸酶基因（uidA）的质粒pNOM102共转化N44,共转化频率为40％。共转化子的GUS（葡糖苷酸酶）活力测定结果表明uidA基因已在N44中表达。由此可知,以niaD为选择标记,uidA为报告基因,以N44为受体的转化系统可用于丝状真菌启动子功能检测和已知调控序列的功能分析。     

麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素链霉菌F21中的酰化特性

螺旋霉素(SP)与麦迪霉素(MD)均为16元大环内酯类抗生素,并且结构非常相似.螺旋霉素含有3个组分,其结构差异表现在16元内酯环C<,3>上的一个取代基的差异,SPⅠ组分为羟基、SPⅡ组分羟基乙酰化、APⅢ组分羟基丙酰化;麦迪霉素是以麦迪霉素A1为主要组分的多组分抗生素,麦迪霉素16元内酯环C3上连接的均为丙酰化羟基.已知这类抗生素16元内酯环C3羟基酰化是由一种称为3-O-酰基转移酶的蛋白催化完成.本研究将螺旋霉素产生菌-Streptomycesspiramyceticus F21中的螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因用Streptomyces mycarofaciens ATCC 21454中的麦迪霉素3-O-酰基转移酶基因原位替换后,发现所产生的螺旋霉素仍然含有3个组分,并且螺旋霉素Ⅲ组分也不是主要组分,说明麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素产生菌-S.spiramyceticus F21中不具有16元内酯环C3羟基丙酰化特异性以及酰化高效性,也提示其在麦迪霉素产生菌中的丙酰化特异性和高效性可能与该菌株(种)的特性有关.     

缺失plcg1基因引起成纤维细胞PI—3K信号上调

磷脂酶C－γ1（phospholipase C－γ1,PLC－γ1）与磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3K）是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC－γ1在表皮生长因子（EGF）介导的细胞分裂信号中的代偿机制,用磷脂酶C（phospholipase C,PLC）特异性抑制剂U73122及PI－3K牧场划必抑制剂wortmannin处理剔除PLC－δ1基因plcg1(PLC-γ1^-/-）及野生型（PLC－γ1^ / )小鼠胚胎成纤维细胞,发现未经处理情况下两种细胞的克隆形成能力、细胞活力及EGF引起的DNA合成能力相似,且均可被U73122与wortmannin抑制,但与PLC－γ1^ / 细胞相比,PLC－γ1^－／－更依赖于PI－3K,而对PLC的依赖性却减小。Western印迹也表明EGF刺激后PI－3K的p85α亚单位酷氨酸磷酸化程度比野生型显著增高,PI－3K信号通路的激活出现上调,且PLC－γ1^-/-中无基近亲PLC－γ2的代偿表达。因此PLC－γ1^-/-中PLC－γ1的功能可能被PI－3K通路代偿,而PLC－γ2或其他PLC同工酶并不代偿其功能。结果表明EGF介导的信号能路的冗余性及PLC－γ1信号通路的可代偿性。     

用地高辛标记Y染色体特异探针检测人的性别

采用了一种新的DNA探针非同位素标记方法,即地高辛配基标记人Y染色体特异DNA探针,成功地用于人基因组中男性特异DNA的检测。同时,将此种方法与生物素标记探针方法作了比较。结果表明：地高辛配基标记探针方法优于生物素标记。