黑曲霉W3350脯氨酰内肽酶在大肠杆菌中的表达

目的：构建pET-PEP重组原核表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法：采用RT-PCR技术从黑曲霉（Aspergillus niger）W3350中扩增出脯氨酰内肽酶（PEP）的基因,插入表达载体pET-22b（＋）,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和DNA序列测定验证,将正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG（终浓度1mmol/L）诱导获得表达。结果：表达产物进行超声破碎,经SDS-PAGE电泳检测,PEP分子质量大约为57kDa,与理论值相符,通过酶活方法测定脯氨酰内肽酶酶活为0.656U/ml,约是出发菌株的5倍。结论：首次成功构建表达载体pET-PEP并在原核细胞中表达,为进一步研究PEP的生物学功能奠定了基础。     

黄芪原生质体分离技术

以黄芪叶片和愈伤组织为材料,对黄芪原生质体的制备分离技术进行了研究。结果表明:采用黄芪叶片制备原生质体远远优于黄芪愈伤组织,能够获得大量高活力的原生质体;采用2%纤维素酶+0.5%半纤维素酶+0.5%果胶酶的混合酶水解12h就能达到较好的分离效果,获得高质量的黄芪原生质体,然后进行原生质体的培养。     

眼镜蛇及竹叶青蛇咬伤与心肌酶谱研究

目的 探讨眼镜蛇和竹叶青蛇咬伤后心肌酶谱改变的关系,以提高蛇伤的诊治水平.方法 选择在我科住院治疗的眼镜蛇咬伤病人124例及竹叶青蛇咬伤86例,根据其肢体肿胀程度分为轻度、中度、重度3组,所有病人在入院时均查心肌酶谱及心电图,心肌酶谱中还增加了肌红蛋白(Mb)、抗心肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白I(cTnI)检测参数.并对实验室检测的心肌酶谱进行统计分析.结果 124例眼镜蛇咬伤病人中,心肌酶谱异常者占87.8%;86例竹叶青蛇咬伤病人中,心肌酶谱异常者占79.4%.中度肿胀组和重度肿胀组心肌酶谱异常发生率为100%;中度组与轻度组比较,心肌酶谱各项指标明显升高(P＜0.05);重度组与轻度组比较,心肌酶谱各项指标更显著(P＜0.01).眼镜蛇咬伤中、重度肿胀组,其心电图改变有显著性差异(P＜0.05),但竹叶青蛇伤组,心电图变化无特殊临床意义.结论 我国南方常见的眼镜蛇及竹叶青蛇咬伤,心肌酶谱变化显著,且升高与受伤的严重程度呈正相关,可作为诊断和观察病情的敏感指标.     

灵芝发酵液多糖提取物对荷瘤小鼠细胞免疫的动态观察

目的:观察灵芝发酵液多糖提取物对S180荷瘤小鼠部分免疫指标的动态调节作用,探讨其抗肿瘤机制.方法:S180瘤细胞荷瘤昆明小鼠80只建立动物模型,生理盐水组(NS组)与灵芝发酵液多糖组(GFG组)各40只,分别于荷瘤后第4,7,10,13,16天每组各处死8只小鼠,检测GFG对NK细胞活性、淋巴细胞转化率的影响.结果:GFG能显著提高荷瘤小鼠NK细胞活性和淋巴细胞转化率.随荷瘤时间延长,GFG组较NS组能维持较高水平(P＜0.01),但总体呈下降趋势.结论:灵芝发酵液多糖提取物能显著提高NK细胞活性和淋巴细胞转化率,并维持一定水平.     

逆转录病毒介导的siRNA对宫颈癌细胞CXCR4表达的抑制

目的：观察逆转录病毒介导RNA干扰抑制宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的效率。方法：人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体pSOS,先转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清,再将其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达受抑的情况。结果：成功构建pSOS-CXCR4载体,并发现在24、48和72h,CXCR4 mRNA的抑制率分别为29.9%,56.8%和62.8%,CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%,49.6%和62.9%。结论：逆转录病毒介导RNA干扰能有效抑制宫颈癌细胞CXCR4表达。     

植物基因启动子的克隆及其功能研究进展

启动子在植物基因表达调控过程中起着重要作用。对于植物基因启动子的克隆及其功能研究有助于了解信号传递途径和基因表达调控模式,为植物转基因工程研究提供理论依据。本文综述了植物基因启动子的基本结构、类型、克隆方法及功能研究进展,着重介绍了广泛应用于转基因工程的诱导型启动子及启动子功能分析,展望了今后植物启动子的研究方向。     

NaCl胁迫下交替呼吸途径对叶绿素含量及其荧光特性的影响

以菜豆幼苗作为试验材料,分析了NaCl胁迫下交替呼吸对叶绿素含量以及叶绿素荧光特性变化特征的影响,以探讨交替呼吸途径在逆境下的生理学作用以及植物在盐胁迫下光系统Ⅱ(PSⅡ)的调节作用机制。结果表明:(1)随着NaCl胁迫浓度(0、100、200、300mmol/L)的增高,菜豆幼苗叶片叶绿素含量显著下降,叶片光系统Ⅱ(PSⅡ)潜在最大光化学量子效率(Fv/Fm)、光适应下最大光化学效率(Fv′/Fm′)、PSⅡ光适应下实际光化学效率[Y(Ⅱ)]和光化学荧光猝灭(qP)与对照相比均显著性下降,而非光化学猝灭(NPQ)较对照组显著增加,同时交替呼吸容量在NaCl胁迫下也显著上升。(2)与单独NaCl胁迫相比,在NaCl胁迫下施加交替呼吸的抑制剂水杨基氧肟酸(SHAM)会导致菜豆幼苗叶片叶绿素含量、Fv/Fm、Fv′/Fm′、Y(Ⅱ)和qP进一步显著下降、NPQ进一步显著增加。研究认为,NaCl胁迫导致菜豆叶片光系统Ⅱ光化学效率下降和光能耗散增加,交替呼吸途径可有效缓解NaCl胁迫下菜豆叶绿素含量的减少以及光系统Ⅱ光化学反应效率的下降。     

肠淋巴液引流对失血性休克小鼠心肌组织ACE/ACE2的作用

目的：观察失血性休克后小鼠心肌组织血管紧张素转换酶（ACE）/ACE2平衡的变化及肠淋巴液引流（PHSML）的作用。方法：BALB/c雄性小鼠24只,随机分为对照组、假手术组、休克组、休克+引流组（n=6）。建立失血性休克模型,行液体复苏;休克+引流组液体复苏后,引流肠淋巴液。在液体复苏后6 h或假手术组相应时间点、对照组于麻醉后,留取心肌组织,qRT-PCR法检测ACE、ACE2、血管紧张素Ⅱ （Ang Ⅱ）1型受体（AT1R）、Mas相关G蛋白偶联受体（Mas1R）的mRNA表达,ELISA方法检测Ang Ⅱ和Ang （1-7）含量。结果：休克组小鼠心肌组织ACE与AT1R mRNA表达、Ang Ⅱ水平均显著高于对照组与假手术组,ACE2与Mas1R mRNA表达显著低于对照组与假手术组、Ang （1-7）含量显著低于对照组,ACE/ACE2、Ang Ⅱ/Ang （1-7）、AT1R/Mas1R显著高于对照组与假手术组;PHSML引流显著抑制了失血性休克对这些指标的作用。结论：失血性休克上调心肌ACE-Ang Ⅱ-AT1R轴、下调ACE2-Ang （1-7）-Mas1R轴表达,引起ACE/ACE2失衡;PHSML引流下调ACE-Ang Ⅱ-AT1R轴、上调ACE2-Ang （1-7）-Mas1R轴表达,在一定程度上维持了ACE/ACE2平衡。     

通脉养心丸对冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者铁调素水平的影响

目的:探讨通脉养心丸对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)伴慢性病贫血(ACD)患者铁调素水平的影响。方法:于2015年4月-2016年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院(南院)接受治疗的患者中选取70例年龄≥40岁的冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者并随机分成两组,每组各35人,分别服用通脉养心丸(II组)或未服用通脉养心丸(III组)。同时选取冠心病患者不伴有慢性病贫血40人为对照组(I组),该组患者服用通脉养心丸。观察比较三组服药8周前后的血铁调素及血红蛋白、铁蛋白水平的变化。结果:服药前,II、III组的血Hepc水平均明显高于I组(P0.05)。8周治疗后,II组患者血Hepc表达明显下降,Hb水平较治疗前显著升高(P0.05),其余两组血Hepc表达与治疗前相比差异无统计学意义(P0.05);II组、III组血Hepc水平显著高于I组(P0.05),III组的血Hepc水平显著高于II组;III组患者的Hb水平明显低于I组、II组(P0.05)。结论:通脉养心丸能降低冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者的铁调素水平,提高该类患者的血红蛋白值,对冠状动脉粥样硬化性心脏病伴慢性病贫血患者,尤其是轻度贫血患者有一定的治疗价值。     

4种桦树幼苗耐盐性分析与评价

耐盐植物引种和培育是开发利用盐碱地的主要方式,具有重要的研究价值。本试验以哈萨克斯坦引进的吉尔吉斯白桦（Betula kirghisorum）、欧洲白桦（B.pendula）、毛枝桦（B.pubescens）和本地的白桦（B.platyphylla Suk.）1年生幼苗为试验材料,于2014年7月在东北林业大学进行中性盐（NaCl）和碱性盐（NaHCO₃）的胁迫试验,测定生长量、光合参数和叶绿素含量,并通过因子分析法,对比评价4种桦树幼苗的耐盐碱能力,筛选出综合性状优良的桦树树种,为耐盐植物引种和培育提供有价值的数据。结果表明：随着盐浓度的升高,桦树幼苗的高生长和光合效率受到显著抑制,而当浓度≥0.5%时,大部分幼苗枯死。株高增长量、基径增长量、净光合速率（P_n）、光能利用效率（SUE）、羧化效率（CUE）、表观量子效率（AQY）及叶绿素含量之间的相关性多数达到了显著水平;最后利用因子分析法分别构建了0.1% NaCl、0.3% NaCl、0.1% NaHCO3和0.3% NaHCO₃胁迫处理的综合评价公式,并分别筛选出了综合性状相对优良的单株,其中NaCl胁迫下较优单株为32、33、34、35;NaHCO₃胁迫下较优单株为262、263、264、35。综合比较认为,吉尔吉斯白桦对低中浓度的中性盐的抗性最强,本地对照白桦对低中浓度碱性盐的抗性最强,而吉尔吉斯白桦和毛枝桦对高浓度碱性盐抗性较强。