一种PCR酶切克隆目的DNA方法

以PCR扩增克隆survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆survivin启动子。通过软件在线分析扩增的survivin启动子酶切位点,将扩增与预期的片段大小一致的DNA片段进行酶切,再进行测序。结果表明,采取酶切鉴定PCR产物的方法,可以初步对PCR产物是否正确做出判断。     

新疆一号冰川土壤细菌多样性的研究*

应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分离PCR扩增的16S rDNA来研究土壤微生物的多样性。直接从新疆一号冰川不同海拔高度的土壤样品中提取总DNA。用两套细菌通用引物分别扩增16S rDNA的V3和V6/V9高变区的特异性片段,PCR产物进行DGGE分析。PCR-DGGE图谱表明,PCR产物经DGGE检测到的条带清晰且分离效果好。结果表明,PCR-DGGE是一种快速研究微生物群落结构的有效方法。     

紫杉醇合成关键酶BAPT基因的克隆及原核表达

目的:克隆曼地亚红豆杉紫杉醇生物合成途径中的关键酶3-氨基-3-苯基丙酰转移酶(3-amino-3-phenylpropanoyltrans-ferase,BAPT)基因,并在大肠杆菌中表达.方法:首先提取曼地亚红豆杉细胞的总RNA,反转录获得其sscDNA,并以其为模板扩增BAPT酶的基因,然后将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组质粒pET32a(+)-BAPT,并将重组质粒转入E.coli BL21宿主中诱导表达.结果:扩增获得1338 bp的BAPT基因序列,成功构建了原核表达质粒pET32a(+)-BAPT,并在E.coli BL21中实现高效表达.结论:BAPT基因表达产物的分子量约为51 kDa,与预期大小一致.该研究为进一步分析曼地亚红豆杉BAPT酶的酶学特性奠定了基础.     

在自然衰老和诱导条件下棉花悬浮细胞程序性死亡的发生

棉花胚性悬浮细胞在MS 0.1mg/L2,4-D 0.1mg/LKT培养基中培养生长良好,但在不继代的情况下会自然衰老。培养至第17天,细胞生活力开始下降;至第21天可检测到核小体大小倍增的DNA梯(DNALadder)存在。42±3℃热激、10μmol/L喜树碱、20μmol/L串珠镰孢菌毒素和50mmol/L放线菌酮等胁迫诱导可分别引起MS 0.1mg/L2,4-D 0.1mg/LKT培养基中的棉花悬浮细胞发生程序性死亡。在MS 0.1mg/L2,4-D 0.1mg/LKT和MS 0.1mg/LIBA 0.1mg/LKT培养基中悬浮培养的棉花胚性细胞处于不同的生理状态,两种不同状态的棉花悬浮细胞对热激、喜树碱、串珠镰孢菌毒素等胁迫因子的反应不同。     

岩溶环境下华南忍冬气孔泌钙及其生物矿化

植物对不同生长环境具有不同的适应机制。华南忍冬（Lonicera confusa）是生长于岩溶富钙环境下的典型植物,它具有通过气孔泌钙方式适应富钙环境的特性。以华南忍冬为研究对象,利用环境扫描电镜系统研究了华南忍冬气孔泌钙现象,并对泌钙后自组装的不同生物矿化物质进行了能谱分析,同时对比分析了能谱仪的点扫描和面扫描方式对相同物质的检测效果。结果表明：生长于岩溶富钙环境下的华南忍冬叶片表面不同晶型的钙盐是由气孔排出后形成的;钙盐分泌出组织后,自组装成多种形态的晶体,如晶沙、球晶和棱晶,晶体中除含有较高的钙外,还含有一定量的硫及其它元素,推测晶体的成核物质可能是由含硫氨基酸构成的蛋白质。研究结果为相关钙盐的仿生矿化研究提供了一定的启示。能谱分析能有效用于植物表面的微区分析及植物分泌物的物质基础测定。     

杜氏盐藻随机MAR文库的构建

核基质附着区(Matrixattachmentregion,MAR)是一段与核基质结合的DNA序列。为分离杜氏盐藻核基质附着区,我们首次构建了杜氏盐藻MAR文库。首先用0.5%TritonX-100裂解细胞,经30%和70%Percoll不连续梯度离心分离盐藻细胞核,再用二碘水杨酸锂(lithiumdiiodosalicy-late,LIS)去除组蛋白和限制酶消化除去结合松弛的DNA片段,最后通过蛋白酶K消化和乙醇沉淀提取盐藻核基质DNA。采用4种限制酶酶切,T_4DNA连接酶连至用相应限制酶酶切的pUC18载体上,转化E.coliJM109感受态细胞,挑选阳性克隆,构建MAR文库。部分测序分析表明,克隆的DNA片段具有明显的MAR特征。为进一步研究MAR对基因表达的调控作用及其作用机制提供了基础。     

我国葡萄球菌的耐药性

本报告是利用纸片法对来自我国20个省市百余家医院1091株临床分离的金黄色葡萄球菌对12种常用的抗菌药物敏感性的调查报告,其结果表明99.7%的菌株对RIFAMPICINUM极度敏感,99.8%的菌株对CHLORAMPHENICOLUM和FURAZOLIDONUM高度敏感;29.6%的菌株对CARBENICILLNUM,21.1%的菌株对ERYTHROMYCINUM,18.1%的菌株对KANAMYCINUM,13.7%的菌株对PENICILLINUM NATRICUM耐药.调查结果表明,分布在我国南北方不同纬度的葡萄球菌对12种常用抗菌药物的敏感性基本相同,无明显的地域性差异.     

嫁接茄的黄萎病抗性与根际土壤生物学活性的关系

以野生茄托鲁巴姆(Solanum torvum)和刺茄(S.surattense)为砧木,西安绿茄(smelongena)为接穗,研究了嫁接茄的抗黄萎病效果及其根际土壤微生物种群数量和酶活性变化,探讨了嫁接茄的抗病性与根际土壤生物学活性的关系.结果表明:嫁接茄的抗病效果明显,其根际微生物种群数量及所占比例、根际土壤酶活性均发生了改变,且不同生育时期存在一定的动态变化.总体看,嫁接茄的抗病性增强,与其根际放线菌数量增加、放线菌数量与真菌数量的比值提高,根际土壤脱氢酶、多酚氧化酶活性提高有关.     

脑死亡诱发肺损伤机制及治疗进展

肺移植是终末期肺疾病的最终治疗方案.供体短缺是肺移植所面临的主要问题.目前,脑死亡供体是肺移植供体的重要来源.然而,脑死亡过程会诱发急性肺损伤并且加重肺缺血再灌注损伤.脑死亡肺损伤机制主要包括三个方面:血流动力学的剧烈改变、全身炎症改变、神经内分泌的改变.其肺损伤表现于肺间质水肿、血浆外漏和肺泡出血,造成肺水肿等.深入探索脑死亡肺损伤的机制,将对治疗及实施肺保护提供有力的依据.     

癌相关成纤维细胞miR-200c对乳腺癌细胞侵袭的影响

探讨miR-200c在癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)活化中的作用,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭能力的影响。通过质粒构建的方法分别获得miR-200c稳定干扰的NF(normal fibroblast)及其对照细胞株、miR-200c稳定过表达的CAF及其对照细胞株;采用Western blotting法检测miR-200c对CAF活化标志物α-SMA和FAP表达的影响;采用细胞划痕愈合实验检测miR-200c对CAF迁移能力的影响;采用胶收缩实验和侵袭实验分别检测miR-200c对CAF细胞外基质和对癌细胞侵袭能力的影响。成功构建了miR-200c稳定干扰的NF及其对照细胞株、miR-200c稳定过表达的CAF及其对照细胞株;与低表达miR-200c的细胞株相比,高表达miR-200c细胞株的α-SMA和FAP表达水平及迁移能力明显降低,其胶收缩能力和癌细胞的侵袭能力也明显减弱。miR-200c能够明显抑制CAF细胞的活化并通过细胞外基质重塑(extracellular matrix remodeling,ECM)的方式抑制癌细胞的侵袭。