禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达

利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别经SacⅠ、BglⅡ及SalⅠ线性化后,电转化GS115感受态细胞,以插入/替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-H5HA、GS115/pPIC9K-H7HA及GS115/pPIC9K-H9HA;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白,可直接进行抗原检测,并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。     

福尔马林致痛对大鼠降钙素基因相关肽的影响

目的:研究福尔马林致痛后大鼠脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的时空变化规律,为探讨CGRP在伤害性信息传递中的机制和作用提供实验依据。方法:选取健康成年正常SD大鼠54只随机分为生理盐水对照组和福尔马林实验组;实验组为右侧足底皮下给予0.1 mL 5%福尔马林后,分别存活15 min、30min、1 h、3 h、6 h、12h、24h和72h(n=6),免疫组化结合图像分析技术观测CGRP在脊髓腰段及L4~6DRG的表达变化。结果:正常DRG、脊髓前角和后角内CGRP有一定的基础表达。福尔马林致痛后3 h DRG的CGRP表达上升,12 h~24 h达峰值,72 h基本降低到正常;福尔马林致痛后6 h脊髓后角CGRP的表达上调,24 h达到高峰,72 h降低至正常;脊髓前角CGRP未见明显变化。结论:福尔马林致痛引起DRG和脊髓的CGRP的表达呈现一定的时空模式,可能是其参与伤害性信息传递的机制之一。     

一株嗜热聚对苯二甲酸乙二醇酯降解菌的分离及其降解特性解析北大核心

【目的】大量聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate,PET)塑料作为废弃物被丢弃,严重危害生态健康。针对嗜热PET降解菌缺乏这一情况,本研究旨在获得能够降解PET的嗜热菌,并阐述其降解机制。【方法】采集云南腾冲热泉中的废弃PET瓶,分析其表面生物膜的微生物群落多样性,从中筛选能够以PET为营养源生长的嗜热菌,并基于16S rRNA基因序列加以鉴定;以菌株的定殖能力与生长曲线为指标,优选出降解能力较强的降解菌,并测定其最适pH、温度和NaCl浓度;降解能力较强的降解菌分别作用于PET及PET中间体双(羟乙基)对苯二甲酸酯[bis(hydroxyethyl)terephthalate,BHET]和对苯二甲酸单(2-羟乙基)酯[mono(2-hydroxyethyl)terephthalate,MHET],测定产物生成量与降解率;通过观察PET膜表面微观结构、活菌数、酯酶活性等探究降解菌与PET的互作过程。【结果】废弃PET瓶表面生物膜中的微生物群落多样性低;从生物膜中筛选出5株能够以PET为营养源生长的嗜热菌;其中,菌株JQ3以PET为唯一碳源生长最佳,作为降解能力较强的降解菌,被鉴定为嗜热淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans),其最适生长pH为7.0、最适生长温度为50℃、最适生长NaCl浓度为0.5%;菌株JQ3以0.043 mg PET/d的速率降解PET,对苯二甲酸(terephthalic acid,TPA)产量在第7天达到峰值45.2 mmol/L;菌株JQ3对PET中间体降解效率显著,6 h可降解85.9%的BHET,60 h可降解50.1%的MHET。菌株JQ3能够定殖于PET表面并形成生物膜,侵蚀PET并造成开裂和剥落。【结论】B.thermoamylovorans JQ3作为一株嗜热PET降解菌,能够高温(60℃)降解PET及其中间体,为实现PET的有效降解提供了新策略。     

牛樟芝固态发酵菌丝体三萜及多糖提取工艺优化研究

为研究牛樟芝固态发酵菌丝体中三萜和多糖的最佳提取工艺，选取浸提时间、料液比和提取温度3个因素，分别设置3个水平，以三萜和多糖得率为指标，并采用正交试验法进行分析。结果表明，三萜的最佳提取工艺条件为：浸提时间3 h、料液比1∶30 (g·mL-1)、温度70 ℃，在此条件下，得率为3.43%；多糖的最佳提取工艺为：浸提时间2 h、料液比1∶20 (g·mL-1)、温度95 ℃，在此条件下得率为4.71%。研究结果为牛樟芝固态发酵菌丝体中三萜和多糖的提取工艺提供了参考。     

利用环境胁迫提高破囊壶菌二十二碳六烯酸生产的研究进展

破囊壶菌由于具备生产多种高值天然活性物质的能力，如二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)、角鲨烯和类胡萝卜素等，目前已被视为商业脂质生产的优质来源。本文首先对破囊壶菌的生态作用和生物技术价值进行介绍，并概述了脂肪酸的两条生物合成途径；其次重点阐述了NaCl、温度、溶氧和pH这4种环境胁迫因子对破囊壶菌生长、脂质积累、脂肪酸组成和DHA生产的影响；随后总结了当前利用环境胁迫因子的渗透调节策略、分段发酵策略和缓解氧化应激策略提升破囊壶菌DHA生物合成能力的研究现状；最后指出了破囊壶菌在环境胁迫的分子调控机制、分段式发酵策略、菌株进化及代谢工程等方面存在的问题，并对如何改进这些问题以及未来可能的发展方向进行了展望。该综述旨在为破囊壶菌实现高效工业化生产DHA提供有效的参考。     

安徽黄山发现孟闻琴蛙

琴蛙属(Nidirana)是广泛分布于东洋界的两栖动物，目前安徽省琴蛙属仅记录了弹琴蛙 (N. adenopleura)1种。2022年7月在安徽省黄山地区(九龙峰自然保护区和马金岭自然保护区)采集到9号两栖动物标本，其形态特征与孟闻琴蛙(N. mangveni)相似；此外，基于线粒体COI基因片段的分子系统发育分析显示，此次采集到的琴蛙标本与孟闻琴蛙聚为一支，且具有高的支持率(贝叶斯后验概率/最大似然支持率为1.00/98%)，而且和孟闻琴蛙遗传距离最近，与模式产地的孟闻琴蛙遗传距离仅有0.04%。因此，结合形态比较和分子系统学分析，鉴定此次采集的琴蛙属标本为孟闻琴蛙，为安徽省两栖动物分布新记录种。这一发现将孟闻琴蛙的分布范围扩展至皖南地区，为琴蛙属和皖南地区的生物地理学和地史研究提供了重要数据。