两种给药途径对联合抗生素建立伪无菌大鼠模型比较

利用联合抗生素通过饮水和灌胃2种给药途径干预大鼠,评估是否可建立伪无菌大鼠模型。

将15只SD大鼠随机分为正常组（Nor组）,饮水组（Dri组）和灌胃组（Ig组）,每组5只。饮水组：用超纯水配制成浓度为0.5 g/L万古霉素、1.0 g/L氨苄西林、1.0 g/L新霉素和1.0 g/L甲硝唑的混悬液,自由饮水。灌胃组：用生理盐水配制成浓度为200 mg/mL万古霉素,400 mg/mL氨苄西林,400 mg/mL新霉素和400 mg/mL甲硝唑的混悬液,0.5 mL/kg体积灌胃。建模14 d。收集空肠、盲肠和结肠的肠道内容物分别进行菌群培养,并对混合的肠道内容物样本进行测序。

与正常组相比,在有氧和厌氧培养条件下,饮水组和灌胃组肠道内容物在培养基上的菌落数量显著减少。饮水组和灌胃组肠道菌群丰富度和多样性均明显降低,肠道菌群的物种数量显著减少。饮水组大鼠肠道菌群主要以埃希-志贺菌属为主,灌胃组以克雷伯菌属为主。

通过饮水和灌胃给予大鼠联合抗生素,均清除了其大部分的肠道菌群,可以达到建立伪无菌大鼠模型的要求。

     

香蕉果实冷胁迫相关MaWRKY11转录因子的特性、互作蛋白筛选与鉴定

为探讨香蕉(Musa acuminata)响应冷胁迫的分子机制,从香蕉果实冷害的数字基因表达谱中筛选并分离了1 个WRKY转录因子,命名为MaWRKY11。MaWRKY11 具有2 个WRKY 保守结构域,属于I 类WRKY 成员,定位于细胞核,是核蛋白。MaWRKY11 具有转录激活活性,且激活区在N 端。实时荧光定量PCR 分析表明MaWRKY11 受冷胁迫诱导,外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理减轻香蕉果实冷害的同时也上调了其表达。另外,酵母双杂交筛选表明,MaWRKY11 可与脱水诱导的早期应答蛋白MaERD 相互作用。这些表明MaWRKY11 可能通过与逆境相关蛋白如MaERD 互作来响应香蕉果实的冷胁迫。     

RNA结合模体蛋白3对细胞总蛋白质合成的影响及其靶基因的鉴定

RNA结合模体蛋白3 (RNA binding motif protein 3,RBM3)受低温应激产生,参与介导亚低温的神经保护功能,但其作用机制及其下游靶分子尚不清楚。本研究构建了人RBM3基因的重组表达质粒,运用一种新型的、非放射性方法即翻译表面感应(surface sensing of translation,SUnSET)来检测RBM3过表达对细胞总蛋白质合成(global protein synthesis,GPS)的影响。结果显示,RBM3过表达使细胞总蛋白质的合成水平上调23. 7%(P 0. 001),这与RBM3过表达引发的真核翻译延伸因子2 (eukaryotic translation elongation factor 2,e EF2)及真核翻译起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)的活性增高相一致。对RBM3可能的下游靶基因内质网蛋白3(reticulon 3,RTN3),以及Yes相关蛋白1 (Yes-associated protein 1,YAP1)的表达进行分析。结果显示,RBM3使RTN3及YAP1在蛋白质水平的表达分别提高了51. 7%(P 0. 01)与43. 3%(P 0. 01)。与蛋白质水平变化相比,RBM3使YAP1在mRNA水平上调了2. 0倍(P 0. 001),但对RTN3的mRNA表达未见显著影响。以上研究表明,SUnSET是一种稳定、可靠的细胞GPS的检测手段; RBM3可显著促进细胞GPS,且对其下游基因RTN3和YAP1存在靶向关系。本研究的结果为深入探讨RBM3的神经保护作用机制提供了理论基础。     

佳助结扎血管夹对胆囊切除术后兔的安全性研究

目的：观察佳助结扎血管夹对胆囊切除术兔机体的影响,为临床的研究应用提供参考。方法将36只日本大耳白兔随机分成3组,即正常对照组、试验组和同类产品对照（ Hem-o-lok）组,每组12只,除正常对照组外,试验组和同类产品对照组分别用佳助结扎血管夹和Hem-o-lok结扎夹,在开腹胆囊摘除术中夹闭胆囊管及胆囊动脉。观察术后12个月内实验兔的血液生化、电解质、血液学、凝血指标、结扎效果和脏器系数的变化。结果与正常对照组比,试验组兔体重在术后3 d时明显降低（P ＜0.01）,ALT在术后1周时明显升高（P ＜0.05）, CREA和ALB水平均在术后1-2周时显著降低（ P ＜0.05,P ＜0.01）,NEUT数目和TG含量在术后2周时明显升高（P ＜0.05）,GLU在术后1周和1个月时明显降低（P ＜0.01）;LYM和RBC数目分别在术后1个月和1周时降低显著（P ＜0.05）,PLT数目在术后1-2周时均明显升高（P ＜0.01）;同类产品对照组兔体重在术后3 d-1个月时明显降低（P ＜0.05,P ＜0.01）,血浆ALT、NEUT和PLT数目在术后1周时亦明显升高（P ＜0.05,P ＜0.01）,ALB和GLU含量在术后2周时均明显降低（P ＜0.01）,TC含量在术后1-2周时则明显升高（P ＜0.05）;其它时间段,试验组和同类产品对照组兔体重、血液生化指标、血液学参数均与正常对照组比无明显影响（P ＞0.05）;术后各组电解质指标、凝血指标和脏器系数亦均无明显差异（P ＞0.05）。结论佳助结扎血管夹在兔夹闭胆囊管残端和血管中的应用是安全、可靠的,其安全性与Hem-o-lok结扎夹基本一致。     

树木年代学的研究进展

我国树木年代学研究自20世纪90年代以来取得了长足进展,尤其是树木年轮气候学研究已经在国际上有一定影响.然而,我国树木年代学研究发展相对不均衡,其他树木年轮分支学科的发展相对较弱.本文综述国内外树木年代学不同分支学科研究进展,对比我国树木年代学研究现状和国际研究概况,为我国树木年代学不同分支学科的研究提出建议.我国未来树木年轮气候学研究应在开展大量不同区域树木年轮气候学重建基础上,尝试选用不同数理方法和多树木年轮指标(宽度、密度、同位素和木材解剖学指标)进行长时间尺度和大空间范围重建工作,并通过诊断方法和过程模拟方式讨论重建时段的气候机制.     

Ad-GFP-nm23-H1体内外抑制人高转移肺巨细胞癌株95D生长和转移作用的研究

目的 观察Ad-GFP-nm23-Hl抑制人高转移肺巨细胞癌株95D细胞生长和转移的作用,为后期nm23-Hl基因和腺病毒载体用于95D及其他肿瘤的基因治疗提供一定的理论和方法.方法 应用MTT法及Transwell小室法分别检测95D细胞经Ad-GFP-nm23-Hl作用后的细胞体外增殖活性、黏附能力以及侵袭力的变化.同时应用人高转移肺巨细胞癌株95D裸鼠移植瘤模型,研究Ad-GFP-nm23-Hl对此移植瘤生长的抑制作用.结果 10~8PFU/ml、10~9PFU/ml、10~(10)PFU/ml处理组,可以明显抑制95D细胞的增殖、黏附和侵袭能力,其抑制作用呈剂量-效应关系.10~9PFU/ml 的Ad-GFP-nm23-Hl对移植瘤的抑瘤率为38.23%,较对照组差异显著.结论 Ad-GFP-nm23-Hl对人高转移肺巨细胞癌株95D细胞的生长和转移以及95D实体瘤具有抑制作用.     

水稻Qb-SNARE蛋白OsNPSN11多克隆抗体制备、鉴定与应用

在真核生物细胞囊泡运输过程中的膜融合主要是由SNARE蛋白介导的, OsNPSN11是从水稻中克隆的Qb-SNARE家族基因, 文章将OsNPSN11构建到原核表达载体pET-30a中与6个His标签融合, 重组质粒pET-OsNPSN11转化BL21(DE3)0.5 mmol/L IPTG诱导4 h后获得了高效表达。用镍离子亲和树脂(Ni²⁺-NTA His Bind Resin) 纯化融合蛋白, 以纯化后的蛋白为抗原免疫新西兰家兔制备多克隆抗体, Western blotting结果显示, 该抗体能特异识别在原核系统表达的抗原, 以及水稻不同组织质膜组分中的OsNPSN11, 可用于转基因水稻中目标蛋白的表达分析。     

基于肝癌细胞线粒体功能受损和caspase-3信号通路探讨罗哌卡因促进肝癌细胞凋亡的作用机制研究

摘要 目的：基于肝癌细胞线粒体功能受损和天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）信号通路探讨罗哌卡因促进肝癌细胞凋亡的作用机制。方法：选用细胞株人肝癌细胞BEL-7402进行实验研究。用不同浓度罗哌卡因处理BEL-7402细胞后,采用溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）法检测肝癌细胞的增殖情况,光镜及4,6-二苯胺-2-苯吲哚二盐酸盐（DAPI）溶液染色观察细胞形态,台盼蓝染色法测定细胞活力,流式细胞术分析BEL-7402细胞的凋亡情况,电子显微镜下观察细胞线粒体,激光共聚焦显微镜观察caspase-3在BEL-7402细胞中的细胞核迁移情况,蛋白免疫印迹试验评价罗哌卡因对细胞质凋亡相关蛋白、线粒体凋亡相关蛋白、BEL-7402细胞和线粒体凋亡相关蛋白表达的影响。结果：罗哌卡因能够抑制肝癌细胞的生长,并呈剂量依赖性和时间依赖性。罗哌卡因可诱导BEL-7402细胞发生凋亡,显著增加BEL-7402细胞的凋亡率。罗哌卡因能够损伤肝癌细胞线粒体功能。激光共聚焦显微镜观察显示caspase-3分子迁移到细胞核。罗哌卡因与caspase-3相互作用,促进caspase-3向细胞核内迁移,刺激caspase-3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP-1）、天冬氨酸蛋白水解酶9（caspase-9）蛋白的表达,抑制B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）的表达,促进凋亡酶激活因子（Apaf-1）的表达,促进线粒体释放细胞色素C（Cytochrome C）,激活caspase-3活性。结论：罗哌卡因具有促进肝癌细胞凋亡的作用,其作用机制可能与破坏肝癌细胞线粒体功能和激活caspase-3信号通路有关。     

含组氨酸标签的甲/乙型流感嵌合体假病毒颗粒的构建和表达

为了获得内含甲/乙型流感病毒部分序列的病毒样颗粒,本研究通过定点突变技术将6个组氨酸插入MS2噬菌体包膜蛋白的β-发夹环结构中,建立通用表达载体D-pET32a-CP-his。并采用聚合酶链反应扩增甲/乙流病毒cDNA的部分保守区域,将两种病毒的嵌合体基因序列连接到表达载体,转化BL21细胞。经诱导表达和镍柱亲和层析纯化,获得了含有甲/乙型流感病毒部分序列的高浓度和纯度的病毒样颗粒。该病毒样颗粒在4℃和-20℃条件下可稳定保存。本研究构建带有组氨酸纯化标签假病毒的通用表达载体,可以作为以后构建和制备耐RNase的mRNA标准品和质控品的平台;构建的甲/乙型流感嵌合体假病毒可为实验室流感病毒的检测提供新的标准品及质控品。