研究基因转录的RT-PCR技术

ＤＮＡ模板序列的转录调控是基因表达多级调节过程的关键 ,细胞周期中基因转录水平的改变应激细胞发育、分化及正常生理功能的多种信号转导。疾病或其它因素也应激转录水平变化 ,从而改变各种ｍＲＮＡｓ的稳定性。因此基因的ｍＲ ＮＡ水平分析 ,在基因调控研究领域是必不可少的。ｍＲＮＡ的常规分析方法是Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｓ、ＲＮＡｄｏｔ/ｓｌｏｔｂｌｏｔ、核酸酶保护法(ｎｕｃｌｅａｓｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ)和原位杂交 (ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ)。而ＰＣＲ技术的应用开创了ｍＲＮＡ分析新方法[1 -3] :ＲＮ…     

免不1号和2号治疗免疫性不育雄鼠的组织学和免疫组织化学研究

用中药复方免不1号,免不2号治疗免疫性不育雄鼠,观察睾丸,附睾组织学和免疫组化的变化。用精子抗原免疫昆明种雄性小白鼠,建立免疫性不育动物模型。同时分别饲喂中药复方免不1号,免不2号,醋酸强的松,生理盐水;从组织学和免疫组化等方面观察免疫性不育症的变化。结果显示免疫性不育雄鼠血清,精囊液抗精子抗体高,睾丸间质,睾丸曲细精管界膜,精原细胞,附睾管上皮细胞免疫复合物沉积多,睾丸每曲细精管精子和晚期精子细胞减少,中药免不1号和2号能降低抗精子抗体,清除免疫复合物的沉积,恢复曲细精管精子和晚期精子细胞数。结果表明：免不1号和2号通过调节全身免疫系统,清除循环和局部的抗精子抗体,免疫复合物,提高精子和精子细胞数,从而提高小鼠的受孕率。     

双梯度超薄胶PAGE分离DNA及其银染与回收

双浓度梯度超薄胶PAGE分离DDRT-PCR扩增产物表明,在30cm长的凝胶板上能清晰分辨长度仅差1bp的DNA,清楚的显示出100多条分离谱带,并可直接从银染PAGE胶中回收DNA谱带。     

苦瓜种子蛋白及其抑菌作用

SDS-PAGE分析表明,苦瓜种子含有多种蛋白组分,其中57kD和49kD蛋白可能由多个或多种亚基以二硫键结合形成。苦瓜种子蛋白对真菌和细菌有显著抑制效应。     

豌豆花DNA导入小麦后种子蛋白质组分变化的研究

豌豆花ＤＮＡ直接导入小麦体可诱导小麦种子蛋白质组分发生明显的变化,小麦种子蛋白质和总氨基酸含量都比对照增高２０％。这些变异性状能稳定遗传给后代。因此直接导入豌豆花ＤＮＡ技术可以为小麦品质改良和分子育种研究提供一条新途径。     

Tol2转座子介导斑马鱼rps26基因附近增强子捕获及注解分析

随着人类等生物大规模基因组测序工作的完成,认识和理解基因组上表达调控元件成为后基因组时代的重要研究任务,增强子捕获技术是一种鉴定基因组上增强子元件及其对基因表达调控机制的有效方法。本研究选择Tol2转座子系统介导制备的稳定增强子捕获品系TK4系(头部和躯干特异性GFP表达),利用Splinkerette PCR(sp-PCR)、原位杂交和比较基因组学等技术手段进行所捕获增强子的解析研究。将TK4系的F1代与野生型斑马鱼杂交,收集受精卵,于6 hpf(Hour post fertilization)、24 hpf、48 hpf、3 dpf(Day post fertilization)、4 dpf、5 dpf六个发育阶段通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白报告基因的表达模式;然后通过sp-PCR方法克隆到Tol2转座子插入位点斑马鱼基因组侧翼序列,经比对分析表明插入位点位于基因组23号染色体27749253位置,在rps26基因的intron1中,且报告基因插入方向与基因方向相反。在插入位点100 kb的基因组范围内有7个基因,分别为arf3a、wnt10b、wnt1、rps26、IKZF4、dnajc22和lmbr1l。通过VISTA程序对不同脊椎动物基因组同源序列比对结果显示,在rps26基因下游有2个潜在保守的非编码序列区CNS1(Conserved non-coding sequence)和CNS2,为可能的增强子元件。胚胎原位杂交表明:rps26基因的两个转录本有母源性表达,rps26-201在合子中的表达早于rps26-001,而TK4系斑马鱼的GFP在早期(6 hpf)不表达,后期rps26与GFP的表达模式既存在相似性,也存在差异性,提示两者可能既接受共同的增强子调控,但也存在不同增强子调控,所获得的2个潜在的增强子(CNS1和CNS2)可能对附近的基因(包括rps26)发挥差异的时空表达调控作用。本研究首次成功获得rps26基因附近2个潜在增强子,为深入研究这两个增强子对基因组附近基因的表达调控机制奠定基础,本研究所采用的结合技术手段也为增强子解析提供参考。     

导入外源DNA对小麦基因表达的影响

用（ＳＤＳ）ＰＡＧＥ对外源豌豆ＤＮＡ导入小麦体的不良变异后代种子蛋白质和酯酶同工酶（ＥＳＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化同工酶（ＰＯＤ）进行分析,发现变异小麦的种子蛋白质消减４个组分带,ＥＳＴ和ＰＯＤ消减２条酶谱带,ＳＯＤ的活性明显降低,并且变异小麦植株的发育生长表型呈现出脆弱,早衰迹象,表明导入外源ＤＮＡ抑制了某些基因的表达,同时分析导致这种负作用的原因。     

种子引发提高小麦抗渗透胁迫能力的效应

种子经渗透势-0.8 MPa或-1.2 MPa PEG—6000处理后,抗旱性不同小麦(Triticum aesttvum L．)“晋麦33”和“84G6”种子萌发率均有提高,种子电解质外渗率明显降低,种子萌发适应渗透胁迫能力提高,种子可溶蛋白质含量、PAL和POD活性显著增加,“晋麦33”种子CAT活性增加,两品种幼苗PAL、POD和CAT活性也均有提高,但“84G6”种子CAT活性下降。     

木霉菌防治植物真菌病害研究进展

木霉菌是一种重要的植物病害生防因子,尤其在防治植物病原真菌病害中一直受到极大的关注。木霉菌依靠其菌株在包括趋向生长、识别、接触、缠绕与穿透等步骤的真菌寄生过程中分泌产生的几丁质酶、葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶等一系列细胞壁降解酶,进行重寄生作用,拮抗其他植物病原菌,行使其生防功能。我们简要概述了木霉菌的种类、拮抗对象、抑菌机制、诱导抗性、促生作用、基于分子生物学的转基因工程研究,以及木霉菌在植物病原真菌生物防治中的应用。     

6—BA诱导的带正电荷的葡萄叶过氧化物酶

河岸葡萄叶的带正电荷过氧化物酶可受６－ＢＡ诱导,但盐,Ｈ２Ｏ２或Ｆｅ＾２＋＋Ｈ２Ｏ２均使叶片ＣＯＰＤ活性明显下降,而高浓度的无机盐明显刺激纯ＣＯＰＤ活性增加。在以愈创木酚为底物时ＣＰＯＤ最适ｐＨ为４．６０－５．７５,对Ｈ２Ｏ２的表面Ｖｍａｘ和Ｋｍ值分别为１１０Ｕ／ｍｇ蛋白和１．１５ｍｍｏｌ／Ｌ。