利用 CRISPR／Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Ir s1）基因

目的：为研究胰岛素受体底物1（Irs1）基因与代谢病之间的关系,我们利用CRISPR/Cas9系统敲除大鼠Irs1基因,为研究代谢病提供基因敲除大鼠。方法针对Irs1第一外显子,设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9。将Cas9 mRNA和sgRNA混合物注射入SD大鼠的受精卵中,实现靶基因敲除。用T7 EN1实验初步检测靶基因的修饰情况,再经过测序分析确定突变。结果获得了5个在Irs1基因突变的首建鼠,突变效率为83％。结论得到了稳定遗传的Irs1基因敲除大鼠。     

NF-κB在哮喘病患儿支气管肺泡灌洗液中的表达及意义

目的：探讨NF-κB、IL-17在儿童支气管哮喘中的作用及机制。本文通过观察哮喘急性发作儿童支气管肺泡灌洗液（BALF）NF-κB、IL-17的水平变化,探讨其在哮喘急性发作儿童气道炎症中的作用。方法：我院2012年12月-2013年2月期间行纤维支气管镜检查患儿共80例,包括哮喘急性发作组（哮喘组,n=40）、非喘息组（肺炎组,n=20）及对照组（n=20）,收集所有病例的BALF,进行细胞学分类,RT-PCR法测定BALF中细胞中NF-κB蛋白（P65mRNA）、IL-17mRNA的表达;Western法检测P65蛋白、IL-17蛋白表达。结果：与对照组比较,哮喘组和肺炎组患儿的P65mRNA、IL-17mRNA水平均明显增高;P65蛋白、IL-17蛋白水平均明显增高（均P〈0.05）;哮喘组患儿的P65mRNA、IL-17mRNA水平、P65蛋白、IL-17蛋白水平较肺炎组高（P〈0.05）。结论：NF-κB、IL-17在哮喘儿童气道炎症中发挥重要作用,NF-κB通过调控IL-17来实现促进哮喘病情进展。     

NF-kB 在哮喘病患儿支气管肺泡灌洗液中的表达及意义

目的:探讨NF-κB、IL-17在儿童支气管哮喘中的作用及机制。本文通过观察哮喘急性发作儿童支气管肺泡灌洗液(BALF)NF-κB、IL-17的水平变化,探讨其在哮喘急性发作儿童气道炎症中的作用。方法:我院2012年12月-2013年2月期间行纤维支气管镜检查患儿共80例,包括哮喘急性发作组(哮喘组,n=40)、非喘息组(肺炎组,n=20)及对照组(n=20),收集所有病例的BALF,进行细胞学分类,RT-PCR法测定BALF中细胞中NF-κB蛋白(P65mRNA)、IL-17mRNA的表达;Western法检测P65蛋白、IL-17蛋白表达。结果:与对照组比较,哮喘组和肺炎组患儿的P65mRNA、IL-17mRNA水平均明显增高;P65蛋白、IL-17蛋白水平均明显增高(均P<0.05);哮喘组患儿的P65mRNA、IL-17mRNA水平、P65蛋白、IL-17蛋白水平较肺炎组高(P<0.05)。结论:NF-κB、IL-17在哮喘儿童气道炎症中发挥重要作用,NF-κB通过调控IL-17来实现促进哮喘病情进展。     

水曲柳FmJAZ1基因在非生物胁迫中的响应模式和激素诱导表达分析

克隆FmJAZ1基因,明确其在低温和NaCl胁迫中的响应模式和激素诱导下的转录表达特性。通过基因克隆的方法得到水曲柳中的FmJAZ1基因,利用生物信息学软件对所得到的序列进行分析并构建系统进化树,对水曲柳FmJAZ1基因进行了时空表达特异性的分析,对根、茎、叶、芽、雄花、雌花、种子等7个部位以及在5-9月5个月份分别取样,对水曲柳进行低温(4℃)和盐胁迫(200 mmol/L NaCl)2种非生物胁迫处理以及脱落酸(ABA)、赤霉素(GA3)、生长素(IAA)、茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)等激素信号诱导处理,然后对试验材料进行荧光定量分析。克隆出全长为684 bp的核苷酸序列。生物信息学软件分析得到JZA1基因具有完整的开放阅读框,编码227个氨基酸,JAZ1蛋白不含有信号肽,不属于跨膜蛋白,为不稳定亲水性蛋白。时空表达结果显示,FmJAZ1基因在茎中表达量最高,且在8月份表达量最高;非生物胁迫结果表明低温处理后FmJAZ1在6h、24h表达量较高;而NaCl处理后,在24 h表达量较高,且该基因响应低温胁迫较NaCl胁迫迅速;激素信号诱导结果显示,处理后不同时间,基因表达量变化较为明显,其中GA3处理后3h最为明显,为对照组的77.3倍,分析了FmJAZ1基因在低温、NaCl胁迫和激素诱导下的表达模式。FmJAZ1基因充分响应了逆境胁迫和激素信号诱导,通过蛋白和基因层面对逆境进行响应,JAZ蛋白在其中起到了桥梁的作用,并扮演了重要的角色。     

基于多源异构大数据挖掘的流感病毒防控预测预警平台构建研究 *

流感传播速度快,病原变异频繁,影响范围广,对其快速反应与防范对全球来说仍然是一个严重的挑战。医疗卫生和高通量测序技术的组合产生了非常复杂可变的海量的异质异构数据集,对其实现整合挖掘分析是个重要任务。现有逐级上报方式的流感监测体系存在分析结果滞后(1~2周)的问题,与流感病毒变异和传播速度快形成尖锐矛盾。因此,实时而全面的了解其流行动态非常必要。基于以上原因,建立统一的大数据平台,整合不同来源、不同结构的监测数据和特定算法及模型,对信息加以分析利用,并对病毒的流行、发展、变异、控制和反馈进行全生命周期的监控,通过时间、地域、环境和病毒之间的关联性等综合分析,形成一个高效安全、快速稳定,且准确及时的流感地理信息图谱预测预警系统,成为提升流感中心信息管理水平的必由之路。     

水曲柳FmABI5基因非生物胁迫及信号诱导的表达模式分析

ABI5（abscisic acid-insensitive 5）蛋白是一个响应ABA信号的碱性亮氨酸拉链类（basic leucine zipper,bZIP）转录因子。揭示了水曲柳FmABI5在非生物胁迫下的表达特征,为该基因在水曲柳中代谢调控功能的研究奠定基础。获得了水曲柳ABI5基因的全长,命名为FmABI5,应用生物信息学软件分析了水曲柳FmABI5基因的分子结构特征,利用PEG、低温（4℃）及盐（NaCl）进行非生物胁迫处理,利用脱落酸（ABA）和赤霉素（GA₃）进行信号诱导,分析FmABI5的表达特征。生物信息学分析表明该基因全长1 455 bp,含有完整的开放阅读框,编码484个氨基酸。FmABI5为不稳定类亲水性蛋白,不存在信号肽,具有跨膜能力,α-螺旋、延伸链、无规则卷曲分布于整个蛋白。分子进化分析结果表明,水曲柳FmABI5基因与芝麻的遗传距离较近,说明其亲缘关系较近;与马铃薯、潘那利番茄、水茄与甜椒的遗传距离较远,说明其亲缘关系较远。非生物胁迫结果表明,FmABI5基因表达水平随非生物胁迫处理时间不同而上下波动,但在处理6、48和72 h后,FmABI5基因对3种非生物胁迫处理都上调表达,说明FmABI5基因对非生物胁迫具有响应。信号诱导结果表明,外源的ABA与GA共同调节了FmABI5基因的表达。     

水曲柳中MYBL2基因表达特征分析

MYB转录因子家族是植物中最大的转录因子家族之一,参与植物生长、繁殖和代谢的各个时期,能通过多种方式参与植物抗逆生长。该文在水曲柳中克隆FmMYBL2基因,利用生物信息学分析其结构和表达特征,并构建FmMYBL2蛋白的系统进化树。对水曲柳幼苗进行低温胁迫、盐胁迫处理以及激素分子诱导处理(包括ABA、IAA、GA_3、JA、SA)。分别在0、1、3、6、12、24、48 h取样,利用实时荧光定量PCR对上述处理样品中FmMYBL2基因进行定量分析,并分析了FmMYBL2的时空表达特征。结果表明:(1)克隆得到的FmMYBL2基因全长为762 bp,编码253个氨基酸。(2) FmMYBL2蛋白是亲水性蛋白,氨基酸序列比对表明其与棉花同源关系较近。(3)荧光定量分析表明,FmMYBL2基因响应低温胁迫和盐胁迫,同时ABA、IAA、GA_3、JA、SA共同调控该基因表达。(4)在低温处理1 h、盐胁迫48 h时,虽然FmMYBL2基因表达量最高,激素诱导后表达量持续波动,但其能在短时间内迅速响应。(5) FmMYBL2基因在根、芽、花、种子中均有表达,雄花中的表达量最高。该研究结果为深入研究MYBL2基因功能和水曲柳抗逆生长的调控奠定基础。     

生殖器疱疹病毒抗原的两种检测结果比较分析

比较分析生殖器疱疹病毒抗原的两种检测方法,找出更为准确、简便、经济、实用的检测方法,分别利用疱疹病毒抗原酶免疫(ELISA)法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测南方医科大学珠江医院门诊患者538例。酶免疫法检出率为27.5%,略低于荧光定量PCR法的28.3%,经SPSS12.0分析,两种方法检测结果无显著差异。酶免疫法检测生殖器疱疹病毒抗原具有操作简便、快捷、经济等特点,而敏感性和特异性均无显著差别,是一种更适合临床的检验方法,更具有值得推广使用的价值。     

六味能消胶囊联合复方消化酶对功能性消化不良患者临床症状及脑-肠轴相关因子水平的影响

摘要 目的：探讨六味能消胶囊联合复方消化酶对功能性消化不良（FD）患者临床症状及脑-肠轴相关因子水平的影响。方法：选取2018年7月~2019年12月期间攀枝花市中心医院收治的80例FD患者,以随机数字表法分为研究组（n=40）和对照组（n=40）。对照组给予复方消化酶治疗,研究组给予复方消化酶联合六味能消胶囊治疗,对比两组的脑-肠轴相关因子水平,疗效,症状改善时间及不良反应。结果：治疗4周后研究组的临床总有效率为92.50%（37/40）,高于对照组的72.50%（29/40）（P<0.05）。研究组食量恢复时间（4.62±0.74）d、食欲恢复时间（3.61±0.57）d、恶心呕吐消失时间（1.59±0.36）d分别较对照组的（7.68±1.71）d、（5.71±0.86）d、（3.87±0.52）d缩短（P<0.05）。研究组治疗4周后胃泌素（149.77±13.89）ng/L、胃动素（159.18±12.86）ng/L、神经肽S 受体 1（NPSR1）（164.10±15.88）pg/mL均高于对照组的（93.34±8.92）ng/L、（123.23±10.97）ng/L、（130.23±12.64）pg/mL（P<0.05）,研究组治疗4周后降钙素基因相关肽（CGRP）（49.52±6.49）pg/mL、血管活性肠钛（VIP）（22.69±3.61）ng/L、生长抑素（SS）（32.13±3.36）pg/mL低于对照组的（63.19±8.38）pg/mL、（27.83±3.73）ng/L、（41.85±4.38）pg/mL（P<0.05）。两组不良反应发生率对比无明显差异（P>0.05）。结论：复方消化酶联合六味能消胶囊治疗FD患者疗效显著,可有效缓解临床症状,改善脑-肠轴相关因子水平,且不增加不良反应发生率。     

高通量血液透析联合左卡尼汀对老年维持性血液透析患者免疫功能、氧化应激和微炎症状态的影响

摘要 目的：观察高通量血液透析（HFHD）联合左卡尼汀在老年维持性血液透析（MHD）患者中的应用效果。方法：选择我院2020年1月~2021年2月间接收的100例老年MHD患者。采用随机数字表法将患者分为对照组（50例,接受HFHD治疗）和研究组（50例,接受HFHD联合左卡尼汀治疗）,均治疗3个月。观察两组免疫功能、氧化应激、微炎症状态、其他血生化指标和治疗安全性。结果：与对照组相比,研究组治疗3个月后CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺更高,CD8⁺更低（P<0.05）。与对照组相比,研究组治疗3个月后血清白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平更低（P<0.05）。与对照组相比,研究组治疗3个月后血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平更高,丙二醛（MDA）水平更低（P<0.05）。与对照组相比,研究组治疗3个月后血红蛋白（Hb）、红细胞比容（Hct）、前白蛋白（PA）更高（P<0.05）。两组三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）组内治疗前、治疗3个月后以及组间对比统计学无意义（P>0.05）。与对照组相比,研究组不良反应总发生率更低（P<0.05）。结论：HFHD联合左卡尼汀可有效改善老年MHD患者免疫功能,改善机体营养状态,减轻氧化应激和微炎症状态,降低不良反应发生率,且对机体血脂代谢影响轻微。