猪雌激素受体基因（ESR）点突变的PCR－SSCP检测

雌激素受体基因(ESR)是控制猪高产仔数的主效基因之一,具有明显的基因效应:BB型比AA型母猪胎总产仔数和产活仔数分别高出1.40～3.37和0.63～3.58头,是目前商品猪育种和生产中重点检测的主要基因之一。常规采用PCR－RFLPs方法区分该基因由点突变造成的3种不同的基因型。本研究建立1种基于PCR的SSCP(single－stranded conformation polymorphism)方法对猪ESR该位置的点突变进行检测,具有操作简便、灵敏度高和不需要酶切等优点,可以在育种实践中广泛应用。 Abstract:ESR is a major gene controlling litter size in swine.The sows of BB genotype produce 1.40～3.37 more piglets of the total number born and 1.07～2.40 piglets of the number born alive respectively comparing with those of AA genotype.ESR has been one of the widely detected genes in pig breeding and production.Usually the point mutation of ESR gene was detected by PCR-RFLP approach.The present study established a novel method based on PCR-SSCP,with the advantage of easy maniputation,high sensitivity and no necessity for restriction enzyme digestion.This method may be applied for commercial detection of the point mutation of ESR gene in swine breeding.     

嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var. levisporus内切β-葡聚糖酶的分离纯化及特性研究

采用培养分离、室内测定等方法,对嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var. levisporus产生的内切β-葡聚糖酶进行了分离纯化及特性研究.粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的内切β-葡聚糖酶.结果表明,经12% SDS-PAGE测得酶的单亚基分子量约为31.5 kD,凝胶过滤层析测得酶的分子量约为34.5 kD.该酶反应的最适温度为55 ℃,最适pＨ为2.5～3.0该酶在pH3.0条件下60 ℃较为稳定;80 ℃保温30 min有20%原酶活性.金属离子对内切β-葡聚糖酶活性影响较大, 其中K⁺、 Ca²⁺、Mn²⁺对酶有激活作用;Al⁺、Cu²⁺ 、Al³⁺对酶有显著抑制作用.该酶对羧甲基纤维素具有很强的底物特异性.     

中国部分地方鸡种Ｂ—ＬⅡβ（β１外显子）基因分子遗传多态性研究

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰs方法对１０个鸡种的Ｂ－ＬⅡβ（β１外显子）基因进行了遗传多态性研究,综合４种限制性内切酶的酶切情况,共检测到３７种基因组合型,并且在个体间以及品种间的基因型频率、基因组合型频率都存在较大的差异。同时各酶切位点的Ｈardy-Weinberg平衡状态在品种上也表现不一致。克隆测序结果表明β１外显子分子遗传多态性更多地体现在氨基酸水平,作为抗原结合区,其丰富的多态性与抗原多样性相一致。     

微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ相互作用的鉴定

为鉴定微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1在肝脏组织的功能,采用GST pull-down结合质 谱技术,检测该蛋白在肝脏中的结合蛋白,结果提示,肌球蛋白Ⅵ与HSPC300/hHBRK1共沉降,Western 印迹杂交证实了质谱的结果．构建HSPC300/hHBRK1原核表达载体,诱导并获得了His-hHBRK1融合蛋白．利用免疫共沉淀证实hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ存在相互作用,激光共聚焦检测显示hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ在肺癌95D细胞的胞浆共定位,提示其相互作用可能是直接结合．肌球蛋白Ⅵ参与细胞迁移、高尔基分泌泡的运输和维持高尔基体稳定性等作用．hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ相互作用,为微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1参与细胞迁移和胞内物质运输提供了进一步佐证．     

免疫共沉淀结合微流控芯片技术筛选GBLP相互作用蛋白

为了进一步阐明G蛋白β亚基2样1蛋白（guanine nucleotide-binding protein subunit beta 2-like 1,GBLP）在普萘洛尔（propranolol,PRO）生物学效应发生机制中的作用,采用免疫共沉淀法结合液相色谱-芯片-离子阱串联质谱（HPLC-CHIP-IT-MS/MS）系统筛选并鉴定人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中的GBLP相互作用蛋白.结果表明,有7种蛋白与GBLP存在相互作用,分别为酪蛋白α-S1、酪蛋白α-S2、β酪蛋白、桥粒芯蛋白1前体、α-烯醇化酶、果糖二磷酸醛缩酶C、硫氧还原蛋白过氧化物酶2.这些蛋白的生物信息学检索结果提示,GBLP可能参与了细胞的能量代谢调节和抗氧化机制,与普萘洛尔的生物学效应发生机制密切相关.     

肌肉脂肪酸转运膜蛋白及其相互关系

肌肉（骨骼肌）组织对脂肪酸的利用水平是影响机体能量稳态的关键因素.肌肉摄取的长链脂肪酸(long chain fatty acids,LCFAs)主要依赖细胞膜载体蛋白协助的跨膜转运过程.近年来,一系列与脂肪酸转运相关的膜蛋白被相继克隆鉴定,其中在肌肉中大量表达的有脂肪酸转运蛋白-1（fatty acid transport protein-1,FATP-1）、膜脂肪酸结合蛋白（plasma membrane fatty acid binding protein,FABPpm）、脂肪酸转位酶（fatty acid translocase,FAT/CD36）和小窝蛋白-1（caveolin-1）.研究上述肌肉脂肪酸转运膜蛋白的结构功能、调控机制及相互关系,可能为肥胖等脂类代谢紊乱疾病的诊治提供新的手段.     

豉甲科及水生肉食亚目的分子系统发育学分析(昆虫纲：鞘翅目)

利用PAUP和MrBayes软件,对线粒体COⅠ基因序列3个密码子位置的数据模块分别进行了豉甲科(Gyrinidae)和水生肉食亚目(Hydradephaga)在亚科或科水平上的系统发育学分析,结果表明第二密码子数据模块获得了理想的分析结果。由PAUP生成的豉甲科最优树来自第二密码子数据模块的分析,而由MrBayes生成的最优树来自全部密码子数据模块的分析。此外,用对应的氨基酸序列生成的ME和MP树与第二密码子数据模块分析的结果也一致。亚科Orectochilinae和Gyrininae以高的支持率形成了单系。然而,来自亚科Enhydrinae的种Porrorhynchus landaisi landaisi呈现了异常的位置。SH-test检验也支持该异常位置,表明这个种可能代表了一个科。在来自第二密码子数据模块的水生肉食亚目最优ML树中,整个Hydradephaga树呈现单系,豉甲科位于树的基部,表明了该科在水生肉食亚目中是一个早期的分支。在树中还产生了一个单系的Dytiscoidea总科,由Dytiscidae、Hygrobiidae、Noteridae和Amphizoidae 4个科组成,单系的Haliplidae与之成为姐妹群。此外线粒体分子钟的结果表明豉甲科的5对相近种间的分化是一个短时期内发生的(0.01～1.81百万年前),这点可能与它们的特殊地理分布有关。     

水生肉食亚目(Hydradephaga)系统发育学研究简论

水生肉食亚目(Hydradephaga)属于鞘翅目Coleoptera,是一类具有水生习性的食肉性真正水生甲虫(True water beetles)。在真正水生甲虫的系统分类中存在三种假说,一种是肉食亚目(Adephaga)位于该系统的基部,一种是多食亚目(Polyphaga)位于该系统基部,第三种是藻食亚目(Myxophaga)位于该系统基部。最近研究结果更多倾向第一种假说。目前水生肉食亚目大约有5 500个种,200多个属,含8个科。水生肉食亚目的科间水平系统发育关系虽被广泛研究,但观点仍不统一。有代表意义的有三个假说,一是豉甲科(Gyrinidae)位于系统基部,接下来是龙虱科(Dytiscidae)、两栖甲科(Amphizoidae)、水甲科(Hygrobiidae)、小粒龙虱科(Noteridae)与沼梭科(Haliplidae);二是沼梭科位于系统的基部;三是豉甲科位于系统的基部,接下来是沼梭科和龙虱总科(Dytiscoidea),其中龙虱总科由两栖甲科、水甲科、龙虱科、小粒龙虱科组成。目前根据形态学的分类,并结合分子系统学研究方法,第三种假说更符合水生肉食亚目的系统分类,也支持了水生肉食亚目作为一个单系,其祖先来自陆生的假说。     

miR-146a参与不同疾病的研究进展*

miR-146a是近年来miRNA研究的热点,其在不同物种中高度保守,并参与了各种类型疾病的发生与发展,如炎症、自身免疫性疾病、癌症与肥胖症等,其机制主要通过TLR4、MyD88、NF-κB和Akt等信号通路来发挥作用。就miR-146a在不同疾病过程中的作用及其机制进行综述,为深入研究miR-146a在各类疾病中的调节作用提供资料。     

过表达外源M-CSF促进MCF7细胞增殖

为探讨过表达外源巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对细胞增殖的影响,将重组载体 pCMV/cyto/myc-M-CSF转染MCF7细胞、G418筛选,RT-PCR、Western 印迹和免疫荧光鉴定M-CSF的mRNA表达、蛋白表达及定位,通过计算细胞倍增时间、MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响. 结果表明,转染M-CSF的MCF7细胞过表达M-CSF-mRNA及蛋白,并且定位表达于细胞质;与转染空载体及未转染M-CSF组细胞比较,转染M-CSF的MCF7细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的MCF7细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强;以上结果提示,胞质过表达M-CSF可促进MCF7细胞的增殖.