真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法

顺乌头酸酶（aconitase,Aco）是细胞内重要的铁硫蛋白酶,它催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸. 真核细胞中顺乌头酸酶有两种,分别定位在细胞质的顺乌头酸酶1（c-Aco）和定位在线粒体的顺乌头酸酶2（m-Aco）.检测它们活性的变化能敏感地反映出细胞中能量代谢、自由基产生、铁硫簇组装及铁代谢水平的改变. 顺乌头酸酶活性的传统检测方法通常是测定细胞中总的顺乌头酸酶活性,该方法难以准确区分出c-Aco和m-Aco各自的活性变化.因此我们建立一种胶内酶活性分析法检测顺乌头酸酶活性. 该方法利用非变性电泳技术将c-Aco和m-Aco浓缩分离,通过泡染底物显色,条带颜色深浅反映了酶活性的强弱. 同时,比较了胶内酶活性分析法和分光光度法检测细胞内c-Aco和m-Aco的活性,并对比检测了过氧化氢处理细胞前后Aco活性的变化.结果显示,这两种方法均可敏感地检测出Aco的活性改变,并有广泛的细胞系实用性,但胶内酶活性分析法可区别测定c-Aco和m-Aco活性,不需繁琐的细胞质和线粒体分离,简便易行.文中介绍的线粒体分离纯化技术也为线粒体功能深入研究提供了一个快速、高效的分离纯化方法.     

通平养心方对高糖诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究北大核心CSCD

观察通平养心方对高糖诱导的H9c2细胞损伤的保护作用机制。高糖造成细胞损伤模型;MTT法检测细胞存活率;激光扫描共聚焦显微镜成像法,检测线粒体特异性荧光染料四甲基罗丹明乙酯(tetramethyrhodamine ester,TMRE),观察细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm)的变化,证明通平养心方是否通过抑制线粒体通透性转移孔(mitochondrial permeability transition pore,m PTP)的开放而发挥心肌线粒体的保护作用;Western-blot检测p-JNK、p-GSK-3β。结果发现,通平养心方和JNK抑制剂均能阻断高糖造成的H9c2心肌细胞损伤;0.1μg/m L通平养心方预处理10 min,细胞存活率升高、TMRE荧光减弱程度降低,p-JNK表达下降,p-GSK-3β表达升高。表明通平养心方能够通过线粒体保护途径对抗高糖诱导的H9c2细胞损伤,机制可能是通过JNK通路促进其下游因子GSK-3β磷酸化,从而抑制m PTP的开放实现的。     

卧龙--川西大地上的明珠

在中国西南美丽富饶的天府之国———四川省的西北大地上 ,镶嵌着一颗巨大的明珠———卧龙自然保护区 ,闻名中外的中国保护大熊猫研究中心坐落其间。从海拔 50 0米的四川省省会成都驱车西行 ,在平整的水泥公路上飞驰 ,路过已有两千多年历史、举世无双的水利工程———都江堰 ,约经两个半小时的行程 ,便到达了海拔 1 2 0 0米至 62 50米的、风景秀丽的卧龙自然保护区。“熊猫之乡”和“大自然的广谱基因库”卧龙自然保护区始建于 1 963年 ,是四川省最早建立的自然保护区 ;1 975年经国务院批准为国家级重点自然保护区 ;1 980年加入世界“人与…     

洞庭湖区常绿阔叶林的特征与分析

一、洞庭湖区常绿阔叶林的生境及自然条件洞庭湖区居荆江南岸,地理位置在北纬28°39′20″至30°14′18″,东经111°42′44″至113°39′45″之间。环湖和湖间丘陵5,044平方公里,占全区总面积的26.86%,其间保存有天然次生林106万亩。环湖和湖间丘陵多属低丘波状台地,除个别低山外,海拔多在350米以下。基岩由浅变质岩、砂页岩、石英砂岩、局部花岗岩体和厚层的第四纪红壤所组成。林地有机质含量一般在2—3%,全氮含量0.075—0.15%,速效氮、磷、钾含量为60     

艰难梭菌A毒素的细胞致死活性研究

本文报道艰难梭菌Ａ毒素对４种培养细胞的细胞致死活性的探讨。４种培养细胞为Ｖｅｒｏ（非洲绿猴肾细胞）细胞、ＴＰＣ─１（人甲状腺肿瘤细胞）细胞、ＮＩＨ３Ｔ３细胞（小鼠成纤维细胞）及将ｒａｓ癌基因转基因于ＮＩＨ３Ｔ３细胞的ＮＩＨ３Ｔ３ｒａｓ细胞。应用台酚蓝排除能试验、噻唑蓝（ＭＴＳ）比色、细胞膜损害测定试验、荧光显微术观察细胞核的形态变化等测定Ａ毒素细胞致死活性。实验表明：４种培养细胞系对Ａ毒素细胞圆缩化作用的敏感性依次为ＮＩＨ３Ｔ３ｒａｓ,ＴＰＣ─１,Ｖｅｒｏ,ＮＩＨ３Ｔ３细胞。而对Ａ毒素细胞致死活性的敏感性依次为ＴＰＣ─１,ＮＩＨ３Ｔ３,Ｖｅｒｏ,ＮＩＨ３Ｔ３ｒａｓ细胞。从而得知Ａ毒素的细胞致死活性不但依细胞种类不同而不同,而且也不一定与Ａ毒素的细胞圆缩化作用有关。肿瘤细胞ＴＰＣ─１细胞对Ａ毒素致死活性有特殊敏感性。以上结果对探索抗癌新药的研制具有重要意义。     

硝苯吡啶对腹腔神经节突触传递的阻断作用

本文应用细胞内记录技术,观察了钙通道阻滞剂硝苯吡啶（nifedipine)对离体豚鼠腹腔神经节突触传递的影响,硝苯吡啶（0.1-10umol/L)不影响所检细胞的静息膜电位,膜电阻及细胞内刺激引起的动作电位,但能显著阻断N-型胆碱能的突触传递,并且这种作用可被低钙模拟、高钙拮抗,硝苯吡啶（10umol/L)也不影响突触后膜对乙酰胆碱（ACh)的敏感性;但在高钾克氏液中,能减少微小兴奋性突触后电位（mEPSPs)的频率;在低钙和高镁克氏液中,能减少量子含量,而对量子大小无影响。结果表明,治疗量的硝苯吡啶(0.1umol/L)通过阻滞突触前膜钙内流及ACh的量子性释放,产生突触阻断作用。这可能是硝苯吡啶降压机理的一个组成部分。     

牛传染性鼻气管炎病毒的繁殖的冰冻蚀刻研究

用冰冻断裂和蚀刻技术对牛传染性鼻气管炎病毒及其在细胞中的繁殖进行了观察。验证了Furlong等提出的疱疹病毒核壳体模型;同时发现在细胞膜上大片形成吞饮泡,细胞质泡状结构的膜上颗粒随机分布于PF和EF面． 本文对这些现象与病毒繁殖及细胞骨架的关系进行了讨论。     

豆渣的有效利用技术继日本后在美国实现商业化

JAIUNIINC公司于2008年4月在美国加利福尼亚州开业,该公司将利用金泽大学开发的有效利用豆浆及豆腐的副产品——豆渣的技术在美国实现商业化。金泽大学药学系教授太田富久等研究人员开发的这项技术,将继日本之后在美国实现商业化。有报告称,美国的豆浆和豆腐的市场持续扩大．对豆渣进行有效利用的需求也将进一步扩大。     

EBS公司推出了指甲基因分析试剂盒

在日本横滨Pacifico国际会展中心举办的“综合医疗展2006”上,EBS公司董事长福岗太英子展示了“瘦身支持”、“戒烟支持”、“节酒支持”3种指甲基因分析试剂盒（GENOTYPIST）．