橡胶树炭疽菌蛋白激酶A催化亚基基因的克隆及表达

为了解蛋白激酶A (protein kinase A, PKA)在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)的生长发育和致病性中的功能。本研究利用同源克隆法设计引物,采用PCR和RT-PCR的方法获得炭疽菌(C. siamense)的PKA两个催化亚基PKA-C1与PKA-C2,并基于RSF-Duet载体构建两基因原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)菌株中表达,利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果表明:催化亚基PKA-C1编码498个氨基酸,包含3个内含子;PKA-C2基因编码381个氨基酸,包含2个内含子;两基因均含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域S_TKc和S_TK_X;聚类分析显示两基因与胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides)依赖cAMP蛋白激酶催化亚基序列有高度同源性。SDS-PAGE检测表明目的基因在大肠杆菌中可成功表达,大小符合预期。本研究结果为进一步分析炭疽菌的PKA催化亚基基因功能提供了帮助。     

雷米普利对自发性高血压大鼠脑动脉缝隙连接蛋白43表达的影响

本文旨在探讨血管紧张素转换酶抑制剂雷米普利(Ramipril)是否通过调节脑动脉血管细胞缝隙连接蛋白43 (connexin43, Cx43)的表达发挥其降压及保护脑动脉的作用。Wistar-Kyoto (WKY)和自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)随机分为4组:WKY组、WKY+Ramipril组、SHR组、SHR+Ramipril组(n=8)。运用无创尾动脉测压仪测量收缩压;采用苏木素-伊红染色观察脑动脉病理学改变;应用压力肌动图技术检测各组脑动脉血管收缩率;应用免疫荧光和免疫组织化学技术分析脑动脉上Cx43的分布及表达;采用real-time PCR和Western blot技术分别检测脑动脉上Cx43 mRNA及蛋白表达。结果显示:(1) SHR组收缩压显著高于WKY组(P 0.01, n=8);SHR+Ramipril组收缩压明显低于SHR组(P 0.01, n=8)。(2)相比于WKY组,SHR组脑动脉管壁增厚明显(P 0.01, n=8),而SHR+Ramipril组相比于SHR组,动脉管壁厚度明显减少。(3) SHR组脑动脉收缩率高于WKY组(P 0.05, n=8);SHR+Ramipril组脑动脉收缩率低于SHR组(P 0.05, n=8)。应用2-APB (Cx43非特异性阻断剂)或Gap26 (Cx43特异性阻断剂)预孵育后,SHR+Ramipril组动脉收缩率显著下降(P 0.05, n=8);给予Cx43非特异性激动剂AAP10预孵育后,SHR+Ramipril组动脉收缩率显著升高(P 0.05, n=8)。(4) SHR组脑动脉上Cx43 mRNA及蛋白表达水平高于WKY组(P 0.05, n=8);SHR+Ramipril组脑动脉上Cx43 mRNA及蛋白表达水平明显低于SHR组(P 0.05, n=8)。以上结果提示,雷米普利能够下调SHR脑动脉血管细胞间Cx43 mRNA和蛋白的表达,降低血压,改善高血压诱发的脑动脉重塑以及血管功能障碍。     

中国莸属一新种

本文发表了一新种即金沙江莸Caryopteris jinshajiangensis Y. K. Yang et X. D. Cong sp. nov.     

阿里红多糖体内抗肿瘤作用及其机制研究

目的 研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)抗肿瘤作用及其抑瘤机制.方法 通过腋部皮下接种S180小鼠腹水制备荷瘤小鼠模型.造模后随机分为空白组、模型组、阳性对照组、FOPS低中高剂量组,每组10只.空白组与模型组灌胃生理盐水,阳性对照组腹腔注射50 mg/kg环磷酰...     

花生雌雄两性细胞发育关系的研究

本试验结果表明 ,雌雄配子体形成过程和程序与前人结论相一致 ,但发现 :1 )尽管雌雄蕊同时形成 ,但在雌雄配子形成不同步的情况下 ,花粉和胚囊中的大量淀粉却能同时充实 ,并且同时成熟等待受精。 2 )大孢子母细胞形成比小孢子母细胞迟 0 .7～ 0 .8片展叶 ;雌配子体形成比雄配子体迟 0 .5～ 0 .6片展叶。 3)雌雄两性细胞发育特点不同 ,雄性是小孢子形成快而花粉粒发育慢 ,雌性是大孢子形成慢而胚囊发育快 ,为此在所用时间上 ,花粉粒发育约是小孢子形成的 1 .6倍 ,是胚囊发育的 2 .3倍 ,而大孢子形成约是胚囊发育的 2 .2倍 ,约是小孢子形成的 1 .4倍。     

花生雌雄两性细胞发育关系的研究

本试验结果表明,雌雄配子体形成过程和程序与前人结论相一致,但发现：1)尽管雌雄蕊同时形成,但在雌雄配子形成不同步的情况下,花粉和胚囊中的大量淀粉却能同时充实,并且同时成熟等待受精。2)大孢子母细胞形成比小孢子母细胞迟0.7～0.8片展叶;雌配子体形成比雄配子体迟0.5～0.6片展叶。3)雌雄两性细胞发育特点不同,雄性是小孢子形成快而花粉粒发育慢,雌性是大孢子形成慢而胚囊发育快,为此在所用时间上,花粉粒发育约是小孢子形成的1.6倍,是胚囊发育的2.3倍,而大孢子形成约是胚囊发育的2.2倍,约是小孢子形成的1.4倍。     

大豆花叶病毒半夏分离物侵染性克隆构建及鉴定

大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)作为半夏(Pinellia ternata (Thunb.) Breit.)主要病毒病害之一,已对其产量和品质造成严重影响。构建病毒侵染性克隆是反向遗传学研究病毒基因功能、病毒与宿主相互作用的有力工具,为明确SMV侵染半夏的分子机制,开展SMV全长cDNA侵染性克隆的构建特别重要。因此文中利用Gibson体外重组系统对大豆花叶病毒山西半夏分离物(SMV-SXBX)侵染性克隆进行组装,通过农杆菌浸润法接种健康半夏;进一步通过机械传代、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)证实SMV-SXBX侵染性克隆3′末端含有poly(A)尾56 nt时具有稳定侵染性。该方法便捷、高效,且避免了SMV侵染性克隆在大肠杆菌中的不稳定问题。SMV全长侵染性cDNA克隆的构建,为进一步研究SMV复制和发病的分子机制奠定了基础。     

土壤含水量及蛹室对甜菜夜蛾蛹越冬的影响

研究了自然条件下土壤含水量和蛹室对甜菜夜蛾Spodoptera exigua Hübner蛹越冬的影响,发现蛹在自然蛹室中能存活30d以上(不超过60d)。处理15d,随着土壤含水量的变化,蛹的存活率分别降至80%、20%和43%。但处理30、60、90和120d时死亡率均达到100%。调查发现,随着处理时间的延长,各土壤含水量中所埋的蛹死亡特征均有一个相同趋势,即发黑、发霉——肿胀——腐烂——残留部分蛹体。不同土壤含水量条件下,蛹的过冷却点、结冰点和蛹体含水量间均存在显著性差异(P≤0.05),尤以在最低的土壤含水量条件下蛹的过冷却点、结冰点和蛹体含水量最低,分别为(-20.2±1.1)℃、(-11.95±2.5)℃和(57.6±7.7)%。在室外变温条件下,结果初步表明蛹室对蛹有一定的保护作用。     

木通马兜铃的组织培养和快速繁殖

1 植物名称 木通马兜铃(Aristolochia manshuriensis Kom.),又称木通、关木通. 2 材料类别 嫩茎段. 3 培养条件 基本培养基为B5.(1)嫩茎生根及腋芽萌发培养基:B5+IBA 0.1 mg-L-1(单位下同)+GA32.0+2%蔗糖;(2)节增殖及生根培养基:1/2B5+IBA 0/05+1%蔗糖.     

重组海参溶菌酶工程菌发酵及表达产物纯化和性质的研究

旨在研究重组海参i型溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)可溶性表达的发酵条件、纯化及生物学性质.采用摇瓶发酵的培养方式,分别从培养基组分和发酵条件两个方面对获得可溶性重组SjLys进行研究.表达产物通过亲和层析纯化以及凝胶过滤层析脱盐,获得了电泳纯为95%的重组SjLys蛋白.进一步对其生物学活性分析,结果表明该酶最适温度为45℃,最适pH值为6.8,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有广谱抑菌作用.上述结果将为海参溶菌酶进行产业化奠定应用基础.