蝙蝠葛的化学成分研究

目的:对防己科蝙蝠葛属植物蝙蝠葛(Menispermum dauricum DC)的干燥根茎化学成分进行研究.方法:采用抗肿瘤细胞活性实验与中药化学实验相结合的方法,最终确定蝙蝠葛95％乙醇提取物,再经大孔树脂以70％乙醇溶液洗脱部位为其抗肿瘤活性部位,再经硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法、中低压液相色谱及高效液相色谱法等现代分离技术对其化学成分进行系统研究,分离得到单体化学成分,并通过其理化性质与波谱数据(Uv、IR、NMR、MS等)分析鉴定其化学结构.结果:从蝙蝠葛药材95％乙醇提取物中分离得到7个化学成分,分别鉴定为蝙蝠葛新诺林碱(1)、northalifoline(2)、青藤碱(3)、粉防己碱(4)、荷苞牡丹碱(5)、紫堇定(6)、香草酸(7).结论:其中化合物5、6、7均为首次从该属植物中分离得到.     

海洋侧孢短芽孢杆菌的分离鉴定及其抗菌活性物质初步研究

采用滤纸片和牛津杯法对分离自大连海参养殖圈海水及海底污泥的506株细菌进行了抗菌活性筛选,获得了1株抗菌活性较强的菌株HS—A465。经形态观察及生理生化实验,结合16SrDNA序列分析,确定为海洋侧孢短芽孢杆菌（Brevribacillus laterosporus）。采用薄层层析和茚三酮显色检测,在其发酵上清液中存在2种具有较强抗菌活性的代谢物质,对每一种成分进行了分离纯化和抑菌实验。结果发现,成分2和3具有显著的抑菌作用。进一步分析表明,成分2和3还具有很强的热稳定性和pH稳定性,对有机溶剂耐受性较好。根据茚三酮显色结果,可以初步推断该活性物质结构上含有游离的氨基酸,初步推断它们是直链的肽类物质。这一研究成果将为海洋抗菌活性物质的进一步开发利用提供理论参考。     

介绍一种快速培养草履虫方法

将第一年分离和培养好的草履虫培养液,在上完实验课后,不要倒掉,在装有草履虫培养液的烧杯口上盖上清洁的新闻纸,扎好杯口。由于新闻纸透气又较易吸湿,所以,杯内的培养液透过纸在1年内可全部蒸发掉,只剩下干稻草。而在稻草上含有草履虫的包囊。到第二年做实验前3～5天,将含有包囊的干稻草烧杯内注入凉开水或蒸馏水,浸泡杯中干稻草约40分钟后,再搅拌     

小RNA深度测序技术分析西瓜花叶病毒蜀葵分离物

蜀葵病毒病害的发生对其生长造成严重影响,明确蜀葵病毒病害的种类及变异进化对蜀葵病毒病害的防治具有重要意义。利用小RNA深度测序技术对具有明显脉明、花叶症状的蜀葵叶片进行鉴定。结果发现,感病蜀葵被西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)、锦葵脉明病毒(Mala vein cleaning virus, MVCV)和一种新的RNA病毒[暂命名为蜀葵病毒1号(Althaea rosea virus1, ArV1)]所侵染。为进一步明确WMV蜀葵分离物(WMV-Tg)的进化关系,对病毒WMV-Tg全基因组进行扩增,获得全长为10 046个核苷酸序列(nt)。序列分析结果显示,WMV-Tg与已报道的WMV分离物基因组核苷酸序列的同源性为83.3%～90.2%。系统进化关系表明,WMV-Tg与WMV-Pg聚为一簇,亲缘关系最近。对蜀葵WMV-Tg来源的小RNA(WMV-derived small interfering RNAs, WMV-vsiRNAs)的长度分布、5′碱基偏好性、极性分布以及热点区分布的分析,有助于加深对WMV-vsiRNAs的了解,并为进一步研究病毒来源的小RNA(virus-derived small interfering RNAs, vsiRNAs)在抗病毒防御中的功能,以及为蜀葵病毒病的防治奠定理论基础。     

活化/抑制CD59 对T 淋巴细胞增殖的影响

目的：研究活化/抑制CD59 分子对T 细胞增殖的影响。方法：Jurkat细胞分别电转入pSUPER-siCD59 质粒及用CD59 活化 抗体刺激。激光共聚焦显微镜下观察细胞的电转情况及CD59 分子在细胞膜上的分布及表达;MTT 比色法检测细胞的增殖。 Western blot检测CD59 分子表达及T细胞活化相关蛋白ZAP70磷酸化水平。结果：激光共聚焦显微镜下可见电转染细胞表达绿 色荧光,转染效率约为40%。转染pSUPER-siCD59 质粒后CD59荧光强度强度降低,CD59 分子均匀分布于细胞膜与正常Jurkat 细胞分布一致。抗体活化后CD59 在细胞膜成簇状分布。抗体活后细胞增殖速率和磷酸化ZAP70 的蛋白表达水平均高于正常组 （P<0.05）,而细胞电转质粒后则恰恰相反。结论：CD59 通过与信号转导分子的相互作用促进T 细胞活化增殖。     

海参肠道中乳酸菌的分离鉴定及活性物质研究

从辽宁大连海域的海参肠道中经初筛和复筛分离得到一株具有广谱抑菌活性的乳酸菌HS-R13。经过16S rDNA序列同源性比对及系统发育树分析,鉴定该菌株为乳酸片球菌属(Pediococcus)。通过抗菌作用的排酸实验、过氧化氢排除实验和蛋白酶敏感实验以及Tricine-SDS-PAGE电泳,初步确定该菌株所产生的抗菌活性物质为多肽类,它对李斯特氏菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌等常见的食品病原菌有明显抑制作用。生物学特性研究表明,该活性物质对在不同的酸碱度及高温条件下,均能保持较高活性,为海洋源细菌素的研究提供了基础。     

胀果甘草多糖GiP-B1通过TLR4/MyD88/NF-κB言号通路激活巨噬细胞RAW 264.7

为研究胀果甘草多糖GiP-B1通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对巨噬细胞RAW 264.7免疫功能的影响,体外以TLR4干扰RNA (TLR4-siRNA)转染巨噬细胞RAW 264.724 h,用100 μg/mL GiP-B1处理转染和未转染细胞,12 h后分别采用CCK-8和ELISA法检测GiP-B...     

橡胶树白粉菌分支酸变位酶基因克隆及蛋白表达纯化

由橡胶树白粉菌引起的橡胶树白粉病是橡胶树的重要的叶部病害之一,严重影响橡胶的产量。然而目前对橡胶树白粉菌的致病机理研究匮乏。分支酸变位酶是莽草酸途径的关键酶,能够将分支酸转化为预苯酸,为植物提供氨基酸及大量代谢产物,在植物抗病中起到非常重要的作用。而植物病原物在致病过程当中能够分泌分支酸变位酶影响植物莽草酸途径,从而抑制植物的防卫反应。因此研究橡胶树白粉菌分支酸变位酶在其致病过程中的功能具有一定的意义。试验利用同源比对分析在橡胶树白粉菌基因组中获得一个分支酸变位酶同源蛋白,并用PCR克隆获得橡胶树白粉菌分支酸变位酶基因,命名为OHCmu。后续构建GST-OHCmu融合原核表达载体,筛选最优诱导条件,并利用GST亲和层析柱对蛋白进行纯化。结果表明橡胶树白粉菌OHCmu基因大小843 bp,具有1个内含子,编码263个氨基酸;具有d5csma_结构域,属于Chorismate mutaseⅡ蛋白家族;GST-OHCmu融合蛋白外源诱导表达在供试条件下(IPTG:0.8 mmol/L, 16℃)可以有较好的表达,获得融合蛋白大小约为56 kD。经过GST亲和层析柱纯化、切割GST标签后,顺利获得浓度较高、较纯的橡胶树白粉菌OHCmu蛋白。研究结果为后续OHCmu蛋白的特性及致病机理研究提供参考。