乳杆菌表面蛋白的研究进展

本文综述了乳杆菌表面蛋白的分布以及近年来表面蛋白的功能和分子生物学方面的研究进展.     

两歧双歧杆菌中serpin基因的克隆、表达与功能分析

从Bifidobacterium bifidum WBBI02基因组中克隆了serpin基因片段,构建了重组Serpin蛋白的原核表达体系,实现了Serpin的表达与纯化。纯化的Serpin蛋白进行了抑制肠道蛋白酶活性检测,以及对双歧杆菌粘附作用影响的显微观察研究。结果表明:WBBI02中长度为768 bp的serpin基因序列,与GENEBANK中Bifidobacterium longum NCC2705 serpin序列同源性为99. 9 %。原核表达载体pBX₂-WBBI02表达的Serpin能有效地抑制糜蛋白酶和胰弹性蛋白酶的活性,最高抑制率分别为90%和97%,显微观察结果证实Serpin能促进双歧杆菌对HT-29细胞的粘附。     

益生菌和致病菌对肠道的黏附及其相互作用研究进展

探讨益生菌及致病菌对肠道上皮细胞的黏附机制,比较其黏附后的生物学效应差异,重点对二者之间的竞争性黏附作用进行了概述.在上述基础上对益生菌抑制致病菌的研究前景和发展趋势进行了展望.     

单核增生李斯特菌Internalin A的克隆表达与抗体制备

目的克隆表达单核增生李斯特菌Internalin A（InlA）,并以之为抗原制备检测单核增生李斯特菌的抗体。方法通过PCR技术从单核细胞增生李斯特菌4b中扩增出inlA基因,克隆筛选和测序鉴定后,最终构建该基因的原核表达质粒pGEX-4T-InlA,谷胱甘肽树脂亲和层析纯化表达产物后,免疫小鼠分别制备相应的多抗和单抗。结果在大肠埃希菌中成功表达了InlA,并对其进行了纯化,融合表达产物分子量约为110 kD;免疫小鼠获得的抗血清效价达到1∶1600;得到了3株抗InlA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗效价为1∶1×10^5-1∶3×10^5。2种抗体与其他病原菌均无交叉反应。结论通过表达单核增生李斯特菌的特异性蛋白制备的抗体,能有效地消除交叉反应,提高检测的特异性。     

红莲型水稻细胞质雄性不育花药蛋白质组学初步分析

采用固相pH梯度－SDS PAGE 双向电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻(YTA)的不育系和保持系(YTB)单核期花粉总蛋白质进行了分离,通过银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。Image Master 2D V5.0 软件可识别约1800个蛋白质点,其中差异表达的蛋白质点数为85。将其中16个差异点采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ionizaton time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）进行了肽质指纹图分析,通过采用Mascot 软件对MSDB数据库查询,其中9个蛋白质点得到了鉴定。YTA相对于YTB有部分参与碳代谢和淀粉合成的酶缺失或表达量降低,这些蛋白质分别是ADP-葡萄糖磷酸转移酶（AGPase）,UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶,乙酰辅酶A合成酶和二氢硫辛酸脱氢酶等。其中AGPase是参与淀粉合成的蛋白,与花粉发育密切相关。乙酰辅酶A合成酶和二氢硫辛酸脱氢酶是细胞内合成乙酰辅酶A的重要酶,而乙酰辅酶A是进入TCA循环的重要底物,乙酰辅酶A的缺乏可以导致TCA循环不能顺利进行,从而不能提供小孢子发育所需要的大量能量。YTA相对于YTB部分参与碳水化合物代谢的重要酶缺失或表达量降低,有可能导致因线粒体提供的能量不足,淀粉合成受阻,因而花粉不能正常发育。      

乳酸菌的安全性研究

乳酸菌通常被认为是安全的,但在机体免疫抑制、肠道发育未成熟、肠上皮受损等情况下,可以导致心内膜炎、菌血症、局部性感染等临床症状.本文综述了国外有关乳酸菌的致病性、抗药性基因转移方面研究的一些新进展,以期引起国内对乳酸菌安全性问题的重视.     

一种适用于线粒体基因表达分析的cDNA-RAPD方法

由于植物线粒体DNA分子结构复杂,并在与细胞核共进化的过程中形成了自己独特的表达系统,迄今仍没有一种较好的能够对植物线粒体基因表达进行分析的方法。本文依据线粒体RNA的自身特点,对已用于分析真核mRNA的差展方法进行了改进。采用随机六聚体引物取代oligo(dT)n,从而将线粒体RNA及其他各类无poly(A)尾的mRNA纳入到可直接研究的范围,发展了一种适用于线粒体基因表达分析的方法。 Abstract:Several techniques are available in detecting variations in gene expression between different samples,such as SSH,RACE etc.However,they can not be applied to analyze mitochondrial gene expression due to the specific characteristics of mitochondrial RNA.So some modifications were made to the conventional techniques.Here we reported a demonstration of this modified technique,taking rice mitochondria as materials.In this technique,using random hexamers to prime the RT,the resultant cDNA likely included coding regions because it was not locked to the poly(A) tail of the messenger RNA.     

2株动物微生态制剂菌的分离鉴定及其生物学特性初步研究

目的从饲料中进行微生物的分离与培养,筛选动物微生态制剂候选菌株。方法利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)筛选得到的7株微生物区分为2种菌,经测序确定其为热带假丝酵母和植物乳杆菌;检测了不同pH、温度、胆盐、金属铜和需/厌氧对其生长的影响。结果当pH小于2.5或铜离子高于150 ppm时,植物乳杆菌无法生长,而热带假丝酵母数量略有下降;胆盐和金属离子对2种菌影响较小,42℃培养条件下相对于30℃培养时热带假丝酵母数量下降了6个数量级。结论筛选得到的2株菌具有应用于动物微生态制剂的潜力,为动物微生态制剂候选菌筛选和评价提供了基础数据。     

基于细胞的抗单增李斯特菌单域重链抗体的筛选及鉴定

【目的】获得针对单增李斯特菌的特异性单域重链抗体,并对筛选过程中特异性克隆的富集规律进行分析,为筛选具有种属特异性的噬菌体展示抗体提供参考。【方法】采用固相筛选技术,以热灭活的单增李斯特菌菌体为抗原,通过四轮常规筛选和一轮消减筛选,从驼源天然噬菌体展示文库中筛选针对单增李斯特菌的单域重链抗体。采用Phage-ELISA法,对后四轮筛选洗脱物中随机挑选的噬菌体进行鉴定,阳性克隆进行基因测序及结合特异性分析。通过多序列比对分析将获得的基因序列进行分组和统计。【结果】成功筛选到2株单增李斯特菌特异性的单域重链抗体。【结论】在优化的筛选条件下,基于全细胞的筛选方法能够获得特异性识别单增李斯特菌的单域重链抗体,消减筛选对于去除非特异性克隆是有效的和必要的。     

水稻线粒体coxII基因转录本的编辑位点研究

RNA编辑是指由RNA水平的核苷酸改变所引起的密码子发生变化的一种预定修饰,它的发现是近年来对分子生物学中心法则的重要补充.本文以红莲型(HL)水稻细胞质雄性不育系粤泰A,保持系粤泰B和杂种F1(不育系A与恢复系71068的杂交一代)为材料,首次研究了线粒体基因coxII转录本的编辑位点.coxII基因的转录本有15个编辑位点,其中有14个发生在密码子的第一和第二位点.这14个位点的编辑可改变氨基酸的种类,并导致所编码蛋白的疏水性以及所编码蛋白在氨基酸序列上的保守性增加.