全文获取类型
收费全文 | 1163篇 |
免费 | 191篇 |
国内免费 | 476篇 |
专业分类
1830篇 |
出版年
2024年 | 15篇 |
2023年 | 36篇 |
2022年 | 36篇 |
2021年 | 56篇 |
2020年 | 54篇 |
2019年 | 58篇 |
2018年 | 65篇 |
2017年 | 79篇 |
2016年 | 61篇 |
2015年 | 92篇 |
2014年 | 103篇 |
2013年 | 58篇 |
2012年 | 79篇 |
2011年 | 91篇 |
2010年 | 75篇 |
2009年 | 62篇 |
2008年 | 55篇 |
2007年 | 61篇 |
2006年 | 55篇 |
2005年 | 85篇 |
2004年 | 69篇 |
2003年 | 60篇 |
2002年 | 57篇 |
2001年 | 36篇 |
2000年 | 31篇 |
1999年 | 43篇 |
1998年 | 21篇 |
1997年 | 33篇 |
1996年 | 29篇 |
1995年 | 29篇 |
1994年 | 20篇 |
1993年 | 16篇 |
1992年 | 11篇 |
1991年 | 16篇 |
1990年 | 14篇 |
1989年 | 14篇 |
1988年 | 7篇 |
1987年 | 4篇 |
1986年 | 5篇 |
1985年 | 2篇 |
1984年 | 2篇 |
1983年 | 9篇 |
1981年 | 3篇 |
1976年 | 2篇 |
1965年 | 2篇 |
1963年 | 2篇 |
1958年 | 3篇 |
1957年 | 4篇 |
1956年 | 4篇 |
1954年 | 1篇 |
排序方式: 共有1830条查询结果,搜索用时 0 毫秒
21.
【背景】大肠杆菌(Escherichia coli) O157:H7是导致肠出血性大肠杆菌食源性疾病暴发的主要血清型,免疫磁珠(Immunomagnetic beads,IMBS)在E. coli O157的检测中发挥着重要作用,而免疫磁珠的稳定性、特异性、广谱性等性能指标关系着在实际应用中的使用效果。【目的】制备高效、稳定且具有广谱性的免疫磁珠,联合分子检测技术如环介导恒温扩增 (Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术、PCR等,提高目标菌的检出率。【方法】采用新型的磁珠活化剂MIX&GO制备E. coli O157免疫磁珠,并进行广谱性以及特异性检测;针对6种试剂牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)、酪蛋白(Casein)、海藻糖(Trehalose)、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone,PVP)、抗坏血酸(Vitamin C)和防腐剂ProClin 300,利用正交试验L18(37)优化免疫磁珠保存液组分;采用IMBS-LAMP、IMBS-PCR、IMBS-生化、菌液-LAMP、菌液-PCR、显色平板-生化鉴定6种方式对20份生猪肉样品进行检测。【结果】利用MIX&GO活化剂制备的免疫磁珠捕获率最高达到81.5%±1.3%;免疫磁珠保存液最优配方为:牛血清白蛋白15.0 g/L,酪蛋白10.0 g/L,海藻糖10.0 g/L,PVP 2.0 g/L,抗坏血酸5.0 g/L,ProClin 300 2.5 g/L,保存6个月后免疫磁珠捕获率为75.5%;在20份生猪肉样品的检测中,自制磁珠和商品化磁珠与LAMP联用均检出9例阳性样品;IMBS-LAMP在6种检测方式中具有最高的检测灵敏度,但检出的样品会因磁珠抗体的差异而有所不同。【结论】与商品化磁珠相比,实验制备的免疫磁珠具有良好的特异性和广谱性,免疫磁珠-LAMP联用提高了目标菌的检出率,是一种高灵敏度、具有应用前景的检测方法。 相似文献
22.
两株香蕉枯萎病拮抗细菌的筛选及抑菌机理 总被引:5,自引:0,他引:5
【目的】从发病蕉园中的健康香蕉根际筛选能有效抑制香蕉枯萎病病原菌生长的拮抗菌,进一步研究其抑菌机理。【方法】应用双层平板初筛和平板对峙实验复筛具有抑菌效果的拮抗菌;经生理生化试验、16S rRNA基因测序和特异引物扩增对拮抗菌进行鉴定;酸沉淀方法提取拮抗菌发酵液抑菌物质粗提液,基于比色法和HPLC测定粗提液对菌丝蛋白质含量、脂质过氧化、麦角甾醇和果胶酶活性的影响。【结果】筛选获得两株拮抗细菌H-2和H-7,初步鉴定为枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌,Gen Bank登录号分别为KX791428和KX791430;温室盆栽试验显示,两株拮抗菌对香蕉枯萎病的生防效率分别为59.1%和53.0%;H-2和H-7粗提液处理病原菌菌丝后,因脂质过氧化产生的丙二醛含量显著增加,分别达0.55μmol/L和0.48μmol/L;而蛋白含量、麦角甾醇含量和果胶酶活性均显著下降,其中H-2处理的抑制幅度更大,三项指标分别为0.15 mg/g、1.31 mg/g和0.008 7 U/m L,显著低于对照的0.25 mg/g、1.96 mg/g和0.035 U/m L。【结论】从健康香蕉根际筛选到两株拮抗细菌,两者可能通过增强病原菌菌丝的脂质过氧化和降低细胞代谢产物合成的方式抑制病原菌生长,可为两株拮抗菌的生防应用提供理论依据。 相似文献
23.
24.
25.
26.
黑龙江省森林面积为1,5771百万公顷,占全省总面积的34.7%。全国森林总面积的12.5%。黑龙江省森林具有丰富的药用植物资源,研究表明,共有药用植物724种,分别隶属于110科,410属,其中商品药植物352种,分别隶属于91科,250属,根据地域分异规律。结合全省气候,土壤,地形,地貌,植被及药用植物生态分布特点,自然植被,植物区系与药用植物生态分布的相关性,将全省森林药用植物资源进行了综合区划,全省共分为2个区,即大,小兴安岭药用植物区和张广才岭药用植物区,进行全省森林药用植物资源区划,对于合理保护和利用林区药用植物资源,发展林区经济具有重要现实意义。 相似文献
27.
利用PCR技术,从扣囊复膜孢酵母的总DNA中扩增得到β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase)基因 (BGL1),长度为2596 bp,连接到pGEMT载体上,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,使之位于α-因子信号肽下游,且与之同框, 构建成重组质粒pSHL9K。 通过电转化将重组质粒pSHL9K插入到Pichia pastoris GS115菌株染色体中,获得高效表达BGL1基因的毕赤酵母重组工程菌株。重组酶的最适温度为50℃,最适pH为5.4。培养基中β-葡萄糖苷酶活性最高可达47U/mL。 相似文献
28.
神经生长因子与周围神经再生 总被引:1,自引:0,他引:1
万新海 《微生物学免疫学进展》1996,(4)
介绍了神经生长因子的研究概况及其在周围神经再生过程中的作用,并对神经生长因子的应用前景作了展望。 相似文献
29.
苹果酸合酶是乙醛酸循环的关键酶之一。E.coli中苹果酸合酶A(malate synthase A,MSA)由aceB基因编码。根据E.coli基因组序列设计引物,利用PCR技术扩增aceB基因,并将其克隆入pET-29b(+),构建了重组表达质粒pET-MSA。经IPTG诱导,MSA在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达。纯化的MSA蛋白的分子量大小约为60 kDa,最适反应pH值和最适温度分别是pH值8.0、30℃。纯化的蛋白质在Mg2+存在时才能发挥最大的活性,其对乙酰辅酶A的Km和Vmax分别是8.07μM和3.6μM/min。此外构建了MSA和苹果酸合酶G(MSG)基因敲除菌株MG::ΔaceB和MG::ΔaceBΔglcB。研究发现缺少MSA的E.coli突变菌株在乙酸中的生长速率要比野生型菌株慢很多,表明MSA对大肠杆菌在乙酸中的生长起着重要作用。MSG虽然能部分补偿MSA的作用,但是包含MSA的乙醛酸旁路是更有效的乙醛酸代谢途径。 相似文献
30.
良种白沙枇杷"冠玉"的组织培养 总被引:7,自引:1,他引:7
1 植物名称 枇杷(Eriobotryajaponica)品种"冠玉"。 2 材料类别 顶芽。外植体的最佳采取时期是2~3月顶芽萌动季节。 3 培养条件 诱导休眠芽萌动及生长培养基(展芽培养基):MS+6-BA 1.2 mg·L-1(单位下同)+NAA 0.4+GA 30.5;增殖培养基:MS+6-BA 1.75+NAA 0.3;生根培养基:1/2MS+NAA 0.5。以上培养基均含蔗糖3%、琼脂0.8%,pH 5.8;培养温度(25±1)℃,光照12 h·d-1,光照度1 500~2 000 lx。 4 生长与分化情况 4.1 诱导展芽 取长1.5 cm左右的顶芽,用刀片刮去表皮毛及外层芽鳞后,放入1%洗衣粉溶液中,用玻棒搅拌5 min后流水冲洗2 h,再用刀片切成1 cm左右长,在无菌条件下用75%酒精灭菌1.5 min,再用升汞灭菌11min,无菌水漂洗5次,剥取0.3~0.5 cm的顶端,接人展芽培养基,进行暗培养。在1~2 d内,有部分外植体会发生褐变,并使芽体周围的培养基染成浅褐色,必须及时把这部分芽转移到新鲜培养基上,否则将引起外植体的死亡。 相似文献