AcMNPV突变株的蛋白表达时相研究

将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒（Autograph Clifornica nuclear polyhedrosis nvius,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317,ts538,ts8感染草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度（25℃）或非允许温度（33℃）下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白,抗P143蛋白,抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间。结果表明：1）P47蛋白是一种晚期（12hpi)表达蛋白,各突变株在允许温度（25℃）能够表达,但在非允许温度（33℃）不能表达。2）P143蛋白是一种早期（8hpi)表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少。3）在非允放温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度。4）野生才突变株ts317的病毒结构蛋白（P80,GP64,VP39,P24和PTP)允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些。5）除了GP64和除P24外,ts583和ts8感染的细胞非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白。6）野生型毒株HR3在允许温度和允许温度下的蛋白表达无明显差异。     

牛病毒性腹泻病毒的初步鉴定

近年来,我们在内蒙羔羊下痢病流行区采集到一株牛病毒性腹泻病毒。83年到85年间,对内蒙三盟,二市,六旗(县),二个良种场的229份病粪样做了病毒检测,其阳性率达59％。该病毒粒子为直径40—80nm,具有囊膜的球形颗料。且与BVDV(牛病毒性腹泻病毒)的NADL株及Danish株有共同抗源。该病毒感染羔羊已传至22代,经补体结合反应测定,其效价提高了6倍。病羔羊的解剖病变观察,说明有病毒性肠炎的病变。病羊的恢复期血清测定为阳性。根据上述结果,我们初步鉴定该病毒为BVDV的一个株,暂命为BVDV的1nL株。     

三株草鱼出血病病毒免疫原性的比较

从湖南邵阳、湖北仙桃、武汉南湖地区分离到的三株草鱼出血病病毒(GCHV873、GCHV875、GCHV876),分别对家兔进行免疫,并测定了它们在家兔体内形成抗体的水平以及这些抗体对相应抗原的中和能力。实验结果显示:GCHV873产生抗体滴度比GCHV875高一倍,较GCHV876高8倍;其抗体的中和效价分别是1:1778(10~(-3.25))、1:386(10~-(2.59))和1:181(10~-(2.25))。上述结果表明:GCHV873的免疫原性是三个分离株中最强的一个毒株。     

非典-SARS-冠状病毒

2002年11月,一种神秘不明的疾病出现在我国广东省继页肆虐全球,世界上有27个国家和地区相继报道出现这种疫情.     

AcMNPV突变株的蛋白表达时相研究

将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Californica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(33℃)下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白、抗P143蛋白、抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间.结果表明1) P47蛋白是一种晚期(12hpi)表达蛋白,各突变株在允许温度(25℃)能够表达,但在非允许温度(33℃)不能表达.2)P143蛋白是一种早期(8hpi)表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少.3)在非允许温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度.4)野生型和突变株ts317的病毒结构蛋白(P80、GP64、VP39、P24和PTP)在允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些.5)除了GP64和P24外,ts538和ts8感染的细胞在非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白.6)野生型毒株HR3在允许温度和非允许温度下的蛋白表达无明显差异.     

棉铃虫核多角体病毒iap2基因的克隆和序列分析

棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera sinle-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组中发现了一个抗细胞凋亡基因iap2.该基因位于病毒基因组的BamH I-F片段,全长753个核苷酸,编码250个氨基酸,预计蛋白质分子量29.2kD.在iap2基因上游-30～-33的位置有一个TATA框,在-50～53的位置有一个早期转录信号CAAT,在终止密码子下游有一个poly(A)信号AATAAA,HaSNPV iap2基因编码一个锌指结构和两个BIR结构.与LdMNPV、AcMNPV、SeMNPV和OpMNPV的IAPs及果蝇DIAP2和人类XIAP等九种IAPs相比较,HaSNPV IAP2与其它的BIR(baculovirus IAP repeater)和RING结构在Cys/His基元(motif)位点上高度保守.     

有机盐对基因启动子的σ因子选择性的影响

用σ＾７０或σ＾３８和核心酶（Ｅ）组成的大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶全酶（Ｅσ）对四种启动子进行了体外转录,结果表明,ｌａｃＵＶ５,ｒｐＩＪ主要被Ｅσ＾７０识别,ｋａｔＥ主要被Ｅσ＾３８识别,ｆｉｃ在低盐浓度时被Ｅσ＾７０识别,在高浓度盐时被Ｅσ＾３８识别,Ｅσ＾３８转录特异性启动子所需酶量大于Ｅσ＾７０转录特异性启动子的酶量,在含有分别对σ＾７０或σ＾３８亲和性大的混和启动子的体外转录中,启动子之间不存     

棉铃虫核多角体病毒lef-3基因的序列分析

在棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera Single-nucleocapsid Nucleopolyh edrovirus,HaSNPV)基因组中发现了lef-3基因,该基因位于病毒基因组的BamHⅠ -F片段上, 全长1140bp,编码379个氨基酸,预计蛋白质分子量为44kD,启动子区具有TATAbox,位于起 始密码子ATG上游40～43nt处,在终止密码子下游具典型的poly(A)终止信号AATAAA.并且 在它的氨基酸序列的N-端也具有一个类似SSB保守序列的基元结构.     

大肠杆菌RNA聚合酶σ亚基基因的表达及表达产物的分离纯化

将2种表达质拉pEGMD（含rpoD基因）和pETF（含rpoS基因）转化到BL21（DE3）菌株中,培养菌体。破碎细胞,用盐酸抓溶解包含体,经DEAE－纤维素柱层析,SDS－PAGE检测可得纯化σ的蛋白。通过紫外分光光度法测定蛋白浓度,实验表明σ38蛋白的得率为菌体温重的0．27％,σ70蛋白的得率为菌体湿重的0．06％。     

棉铃虫核多角体病毒进化保守性基因iap2基因表达载体的构建及表达

分析棉铃虫核多角体病毒基因组 ,结合GenBank中已知的序列 ,发现iap2基因位于其基因组的BamHⅠ F片段上 ,回收此片段作为模板 ,设计引物 ,通过PCR扩增得到了抗细胞凋亡基因iap2的DNA片段。将扩增产物克隆到pGEM T载体上 ,再进一步将插入片段酶切并连接到表达载体pET 2 8a上 ,构建了重组质粒pET iap2。DNA序列分析结果表明 ,克隆得到的DNA序列与所发表序列完全相同。含重组质粒pET iap2的大肠杆菌BL2 1 (DE3)表达了抗细胞凋亡蛋白IAP2。