依兰花精油的香气成分

云南省西双版纳产依兰油,用Finnigan-4510型毛细管气相色谱/质谱/计算机联用方法进行了化学成分分析,共分离检出了50个成分,鉴定了其中22个成分,占全精油的95.27％。主要成分为:β-丁香烯(33.00％),γ-穆罗烯(19.82％)。α-(艹律)草烯(7.69％),乙酸香叶酯(6.21％),香柠檬烯(5.40％),苯甲酸苄酯(5.33％),金合欢醇(4.75％),金合欢烯(3.29％),香叶醇(2.48％),对甲酚甲醚(2.41％)。并讨论了如何提高国产依兰油质量的问题。     

成年态南丰蜜橘试管嫁接育苗技术研究

为探索适合成年态南丰蜜橘[Citrus reticulata Blanco‘kinokuni’(Tanaka)H.H.Hu]的快速繁殖技术,对其试管茎尖微嫁接育苗进行研究。结果表明,最好的砧木是苦柚种子苗,以腹接方式的成活率最高。嫁接苗接种在MS+GA3 1 mg L–1+蔗糖75 g L–1的培养基中,暗培养7 d后转入光周期下培养,嫁接成活率达67.78%。不同移栽基质对嫁接苗的成活率影响不显著。嫁接苗与成年态南丰蜜橘再生芽在形态和POD、CAT及SOD同工酶分子表达上均无明显差异。这表明通过试管茎尖微嫁接技术可保持其遗传稳定性。     

依那普利叶酸片对高血压伴高同型半胱氨酸血症大鼠左室肥厚干预的研究

目的:观察高同型半胱氨酸对高血压大鼠心肌内质网应激相关因子GRP94、caspase12表达的影响,及依那普利叶酸片(简称依叶片)对其表达的干预作用。方法:30只雄性成年自发性高血压大鼠(SHR),随机分为对照组、模型组和依叶片组,每组10只。对照组给予普通颗粒饲料喂养同时给予双蒸水灌胃,模型组给予含3%蛋氨酸的颗粒饲料喂养同时给予双蒸水灌胃,依叶片组给予含3%蛋氨酸的颗粒饲料喂养同时给予依叶片粉剂20 mg/kg/d灌胃。实验第8周末,用颈动脉插管法测各组大鼠平均动脉压(MAP),同型半胱氨酸检测仪检测血清同型半胱氨酸(homocystein,Hcy)浓度,称取体质量、全心质量及左心室质量计算大鼠心肌肥厚指数HWI及LVEI,通过HE染色观察心肌细胞形态学改变,免疫组化检测大鼠心肌组织中GRP94及caspase12表达水平。结果:①大鼠血清Hcy水平的变化。对照组大鼠血清Hcy值在正常值范围。与对照组相比,模型组大鼠血清Hcy值显著增高(P0.01);与模型组相比,依叶片组大鼠血清Hcy值明显降低(P0.01)。②大鼠HWI、LVEI及MAP的变化。模型组大鼠的HWI及LVEI均明显高于对照组(P0.05);依叶片干预后大鼠的HWI及LVEI均明显降低(P0.05)。对照组与模型组大鼠的MAP均明显增高,但两组大鼠的MAP差异无统计学意义(P0.05);与模型组相比,依叶片干预后大鼠的MAP明显降低(P0.01)。③大鼠心肌细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关因子GRP94及caspase12表达。对照组及模型组大鼠心肌细胞GRP94及caspase12表达均增高。与对照组相比,模型组大鼠心肌细胞GRP94、caspase12表达增高更为明显(P0.05)。依叶片干预后大鼠心肌细胞GRP94、caspase12表达明显降低(P0.05)。结论:高Hcy通过ERS途径使高血压大鼠左室肥厚程度加重;依叶片可有效降低血清Hcy及血压水平,抑制心肌细胞ERS,从而有效逆转左室肥厚,其对左室肥厚干预的分子机制为"H型"高血压的预防及治疗提供了新的理论依据。     

GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化

以pET15b-HepⅠ为模板,通过PCR技术扩增出上游合有6×His标签的HepⅠ基因序列,克隆至表达载体pGEX-4T-1。测序鉴定后,将重组表达质粒pGEX-His-HepⅠ转入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,经IPTG诱导表达。表达产物可溶部分用GSTrap FF和HisTrap HP柱两步亲和纯化,所得产物经SDS-PAGE检测,在66 kDa和43 kDa处显示特异条带,分别与GST-His-HepⅠ和His-HepⅠ融合蛋白预期分子量相符;最终His-HepⅠ融合蛋白的比酶活为86.45 IU/mg,纯度高达99%,与仅一步亲和纯化得到的GST-His-HepⅠ融合蛋白相比,进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度。本研究为制备高纯度的HepⅠ提供了一种方法,对制备高安全性的LMwH和解析HepⅠ晶体结构具有重要意义。     

黄瓜霜霉病抗病基因的RAPD及SCAR标记

以感霜霉病黄瓜L18-10-2和抗霜霉病黄瓜129为亲本构建F2代分离群体,以F3代植株霜霉病抗性鉴定表示F2代各单株抗病性并得以区分各单株杂合或纯合感病性,采用RAPD技术和转SCAR的方法筛选黄瓜抗霜霉病基因分子标记.结果显示,在318条RAPD引物中有18条引物表现出两亲本间多态性,其中引物P18的SB-SP18561扩增片段与霜霉病抗病基因之间紧密连锁,根据交换率和Kosambi函数公式计算其遗传距离为7.85 cM.回收SBSP18561片段并克隆和测序,其准确长度为561 bp.将该RAPD标记转换为SCAR标记,长度为494 bp,命名为SSBSP18494.     

烟草叶肉细胞壁过氧化物酶同工酶的研究

烟草叶肉细胞质外体(apoplast)中过氧化物酶(即与壁游离的过氧化物酶)的活性,从幼嫩的叶片到成熟的叶片,有一个从低到高,呈S形变化的曲线。聚丙烯酸胺凝胶电泳,同工酶谱带变化如下:第一叶只有一组(AⅡ组),第二叶开始增加至两组(AⅡ组、AⅠ组),到第七叶又只有一组(AⅠ组),AⅡ组消失了。这反映细胞生长的不同阶段有不同的同工酶在起作用。 与烟草叶肉细胞壁结合的过氧化物酶,都定位于AⅠ组,其中有两种同工酶是以离子键结合于壁的,有一种以共价键结合于壁。     

EV71灭活疫苗（人二倍体细胞）在恒河猴婴猴模型中的免疫保护性分析

肠道病毒71型作为引起儿童群体常见传染性手足口病（HFMD）的主要病原,具有导致少量感染个体出现脑炎等神经系统病变以及相关心肺功能衰竭的病理学特性．因此其预防性疫苗的研发具有重要的公共卫生意义．在前期工作的基础上,一种EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在本研究中基于恒河猴婴猴模型进行了相应的免疫保护性分析．以160EU剂量对2～3月龄婴猴进行0,4周免疫后,动物在第4周接受了剂量为10。～CCID50的病毒经呼吸道的攻击．对病毒攻击后动物在14天内的临床症状、血液生物学、器官病原学分布以及病理学检测的动态观察表明,经疫苗免疫的动物未出现对照动物所具有的特征性临床表现,其血液生物学及病理学检测均无异常．同时,器官病原学分布亦呈阴性．结合动物中和抗体的明确增长及对照动物的综合表现分析,本文的工作证实了该EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在恒河猴婴猴体内的免疫保护性．     

利用细菌人工染色体技术构建整合F基因的重组MDV疫苗株*

目的:预防马立克氏病病毒(MDV)和新城疫病毒(NDV)混合感染鸡引起的疾病,构建表达NDV F蛋白的MDV疫苗株CVI988 BAC重组载体,并包装成重组病毒,为疫苗免疫提供更多的重组疫苗选择。方法:首先利用PCR扩增带有卡那霉素(Kanamycin,Kana)抗性基因片段的F基因,采用同源重组的方法将其整合到CVI988 BAC上,进一步诱导I-SceI表达敲除Kana基因而获得重组质粒CVI988 BAC-F。通过磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞获得重组病毒。结果:Western blot和间接免疫荧光实验证实重组病毒能够表达F蛋白。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果表明,F基因的插入不影响病毒的体外增殖。结论:利用BAC技术成功构建了整合F基因的重组MDV病毒CVI988 BAC-F,为MDV重组疫苗研发,防控NDV与MDV共感染奠定了基础。