可溶性TRAIL蛋白的高密度培养及补料策略研究

采用分批补料的方法高密度培养重组大肠杆菌C600/PbvTRAIL制备人可溶性TRAIL蛋白,优化发酵工艺,探索简单高效的分离纯化方法并测定蛋白生物活性。通过比较几种不同的补料策略：间歇流加、Dostat、pHstat,摸索了一种流加策略,即DOstatpHstat组合流加,有效的避免了发酵过程中,尤其是诱导表达阶段乙酸积累的增加,使TRAIL蛋白在高密度培养条件下,得到高效表达。菌体密度最终达到300g/L（WCW）以上,可溶性TRAIL蛋白占菌体总蛋白的4.2%,含量为1.1g/L。在整个发酵过程中,乙酸浓度接近于0,且未使用任何特殊手段,如纯氧、加压等,简化了发酵工艺,降低了发酵成本,为TRAIL的工业化生产创造了条件。     

CXCL8在肿瘤耐药中的作用

肿瘤耐药是影响疾病进程和患者预后的主要因素。CXC趋化因子配体8(CXC chemokine ligand8,CXCL8)又称为白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8),是具有趋化作用的细胞因子,是肿瘤微环境的重要成员。CXCL8在多种肿瘤患者的循环和组织中表达升高,与药物疗效和预后有相关性。CXCL8主要通过招募细胞浸润、诱导肿瘤细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)获得干性特征,还能通过促进血管生成等多途径降低药物的应答效力。本文概述了CXCL8在肿瘤耐药形成中的作用,为建立疗效监测指标、制订联合治疗方案提供重要的理论基础和实验依据。     

前额尔巴阡区多布罗托夫层中脊椎动物足迹的新发现

不久以前我们曾发表了节良琴(Делятин)城附近普路特(Прут)河边非常有趣的脊椎动物足迹化石地点的简报。发见这些足迹的多布罗托夫层属於充填在前喀尔巴阡山前凹地的下Моласс系,并且是上伏罗迪申(Воротыщенская)系不同相之一。依时代它们属于下中新世(假定属于布尔吉加尔Бурдигапьскии统)。以前的文章中曾记述过很多偶蹄类,即洞角类(羚羊)的足迹;鸟类足迹及一种猛兽(猫科)的足迹。最近К.К.佛列罗夫又有新发现,关於新发现的记述就     

黄芪多糖基于PI3K/Akt通路对食管癌大鼠抑瘤作用及免疫功能的影响

摘要 目的：探究黄芪多糖（APS）对食管癌（EPC）模型大鼠的抑瘤作用、免疫功能及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法：选取6周龄SPF级健康SD大鼠50只,随机分为模型组(M组)、顺铂组（S组）、黄芪多糖低剂量组（APSL）、黄芪多糖中剂量组（APSM）、黄芪多糖高剂量组（APSH）,每组10只。通过移植人食管癌Eca109细胞建立EPC模型,分别给予3 mg/kg顺铂和100、200、400 mg/kg的APS干预。测量各组大鼠肿瘤体积和肿瘤质量,计算肿瘤生长抑制率、胸腺指数和脾指数,HE染色观察肿瘤组织形态学,采用流式细胞仪检测外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞群,Western blot测定各组肿瘤组织中PI3K和Akt蛋白的相对表达。结果：经干预后,S组和各APS组大鼠肿瘤体积和肿瘤质量均显著小于M组（P＜0.05）;S组和APSH组肿瘤体积和肿瘤质量相显著小于APSM和APSL组（P＜0.05）;APSM组大鼠肿瘤体积和肿瘤质量显著小于APSL组（P＜0.05）;APSH、APSM和APSL组的抑瘤率分别为45.59%、32.35%和17.65%。S组大鼠的胸腺指数和脾指数均显著低于M组（P＜0.05）;各APS组大鼠的胸腺指数和脾指数均显著高于S组（P＜0.05）;APSH和APSM组大鼠胸腺指数和脾指数均显著高于M组（P＜0.05）。各APS组大鼠CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺均显著高于S组和M组,而CD8+均显著低于S组和M组（P＜0.05）;APSH、APSM和APSL组之间两两相比亦均有统计学差异（P＜0.05）。S组和各APS组PI3K/Akt信号通路蛋白的相对表达均显著低于M组（P＜0.05）;APSH、APSM和APSL组之间两两相比亦均有统计学差异（P＜0.05）。结论：APS可通过调控PI3K/Akt 信号通路和改善免疫功能,发挥对EPC的抑制作用,为临床治疗EPC提供了新的思路和理论依据。     

温度对亚洲小车蝗成虫体内呼吸代谢相关酶和抗氧化酶活性的影响

【目的】阐明亚洲小车蝗Oedaleus asiaticus高温耐受能力,明确温度对亚洲小车蝗成虫体内呼吸代谢相关酶和抗氧化酶活性的影响。【方法】在18～42℃温度范围内,以3℃为间隔设置9个温度处理,将亚洲小车蝗成虫置于光照培养箱黑暗条件下处理4 h,后于室温条件下恢复1 h。采用生化方法测定各处理成虫体内糖类代谢酶3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH),脂类代谢酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)和三羧酸循环关键酶柠檬酸合成酶(CS),以及3种抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活性。【结果】实验所测的亚洲小车蝗雌雄成虫体内7种呼吸代谢相关酶和抗氧化酶活性均随温度升高呈现先增后减的趋势。雌雄成虫GAPDH, GPDH, HOAD和CS活性分别在33, 27, 33和39℃时最高,而SOD, CAT和POD活性均在30℃时最高;所测7种酶活性均在18℃时最低。在大多数测试温度下雌雄成虫酶活性差异显著。不同温度下雌、雄成虫的GAPDH/HOAD活性比值在1.99～3.31之间,说明在实验温度下亚洲小车蝗呼吸代谢主要消耗糖...     

山茱萸抗过敏活性组分的筛选及其对RBL-2H3细胞脱颗粒的作用CSCD

为研究山茱萸中抗过敏活性成分,采用透明质酸酶抑制实验对山茱萸中活性组分进行初步筛选;采用细胞脱颗粒抑制实验对透明质酸酶抑制活性较高的组分进一步评估;采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行成分分析。结果表明山茱萸石油醚部位(petroleum ether extract of Corni Fructus,COPE)具有显著透明质酸酶抑制活性,其IC50值为3.11 mg/mL;经硅胶柱层析分离得到4个透明质酸酶抑制活性更高的组分,其中组分COPE-8对RBL-2H3细胞脱颗粒抑制作用更显著,呈剂量依赖形式且具低细胞毒性。经20μg/mL COPE-8处理后,RBL-2H3细胞脱颗粒释放的组胺和β-氨基己糖苷酶分别减少46%和39%;经GC-MS分析,COPE-8中主要活性物质为萜类物质,包括α-香树脂醇、β-香树脂醇和香紫苏醇。结果表明COPE-8具有显著的抗过敏活性,在抗过敏活性物开发方面具有一定的应用价值。     

重组α-环糊精葡萄糖基转移酶表达条件的优化及其产物专一性的分析

将来源于Bacillus sp 602 -1的α-环糊精葡萄糖基转移酶(ot-CGT)基因(cgt)插入到表达载体PQE30中,构建重组质粒PQE30/cgt,成功转化宿主菌E coli M15后,得到重组菌株E coli M15 (PQE30/cgt).在IPTG的诱导下得到酶表达的最适条件:TB培养基,0.01 mmol/L IPTG,诱导温度16℃,胞内酶比活力最高可达5 209 U/mL;加入IPTG 24 h后,添加甘氨酸和甘露醇会促使酶向胞外分泌.酶蛋白自诱导表达的适宜条件为在TB培养基中添加乳糖3.0 g/L,葡萄糖1.2 g/L,16℃培养96 h,酶比活力达到8 635 U/mL,明显高于IPTG诱导的效果.通过SDSPAGE验证了上述结论.酶催化转化实验表明:重组酶转化质量分数为1％可溶淀粉24h后,α-环糊精(α-CD)转化率可达38.2％,α和β的峰面积比约为3.4:1,α-CD具有较高的专一性,因此该重组α-CGT酶具有较好的工业化应用前景.     

550例支原体药敏结果分析

目的：了解本地区感染泌尿生殖系的解脲、人型支原体耐药情况。方法：对性病科和妇科门诊近3年来550例支原体感染者用支原体药敏试剂盒进行司巴沙星（SPA）、克拉霉素（CLA）、可乐必妥（CRA）、交沙霉素（JOS）、阿奇霉素（AZI）、罗红霉素（ROX）、强力霉素（DOX）、美满霉素（MIN）、氧氟沙星（ODL）、乙酰螺旋霉素（ASP）、四环素（TET）、红霉素（ERY）12种抗生素的药敏试验。结果：统计近3年耐药率,总计依次是4.2%、8.4%、10.4%、23.2%、23.8%、29.6%、29.6%、33.0%、43.1%、55.3%、61.9%、82.7%。结论：耐药率司巴沙星、克拉霉素、可乐必妥较稳定,基本低于10%,其余均较高且大部分呈逐年增长趋势,且解脲和人型支原体耐药性有较大差异。