微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ相互作用的鉴定

为鉴定微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1在肝脏组织的功能,采用GST pull-down结合质 谱技术,检测该蛋白在肝脏中的结合蛋白,结果提示,肌球蛋白Ⅵ与HSPC300/hHBRK1共沉降,Western 印迹杂交证实了质谱的结果．构建HSPC300/hHBRK1原核表达载体,诱导并获得了His-hHBRK1融合蛋白．利用免疫共沉淀证实hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ存在相互作用,激光共聚焦检测显示hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ在肺癌95D细胞的胞浆共定位,提示其相互作用可能是直接结合．肌球蛋白Ⅵ参与细胞迁移、高尔基分泌泡的运输和维持高尔基体稳定性等作用．hHBRK1与肌球蛋白Ⅵ相互作用,为微丝相关蛋白HSPC300/hHBRK1参与细胞迁移和胞内物质运输提供了进一步佐证．     

胆管癌患者与健康志愿者血清样品蛋白质表达差异分析

胆管癌（cholangiocarcinoma,CCA）是一种难于早期诊断和治疗的恶性肿瘤.利用蛋白质组学技术以期筛选出人血清中具有医学价值的胆管癌癌变的标志物.利用白蛋白/IgG去除试剂盒去除血清中高丰度的白蛋白和IgG,再经丙酮沉淀得到高质量的血清样品.样品经双向电泳（2-DE）得到了分辨率较好的胆管癌血清的蛋白点图谱.利用Image Master 2D软件对比分析了胆管癌病人和正常健康对照组的2-DE图谱.其中,表达上调蛋白有8个,表达下调蛋白有6个.用质谱获得上述差异蛋白的肽质量指纹图谱,并经数据库检索共鉴定出了11种差 异蛋白质,其中8种蛋白质的表达与胆管癌密切相关.本研究为阐明胆管癌的机理提供了一条新途径.     

玉米螟P450基因cDNA的克隆及植物次生物质对其诱导表达

昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生 理功能,包括对植物次生物质代谢和杀虫剂解毒等.本研究以玉米螟5龄幼虫中肠的总RNA为 模板,根据不同昆虫P450基因家族保守氨基酸序列,设计并合成简并引物,利用RT-PCR扩 增出了玉米螟细胞色素P450基因cDNA片段,将其克隆到pMD19 T载体进行序列测定.测序获得了编码213个氨基酸残基的641 bp的DNA片段,命名为OfP450(GenBank登录号：EU807990) ;与已公布的棉铃虫、家蚕、欧洲防风草结网毛虫、小菜蛾和黑腹果蝇等的细胞色素P450氨基酸序列进行比较,其一致性分别为55％、50％、49％、44％和31％.将植物次生物质棉酚、丁布添加入人工饲料中,对玉米螟进行了饲喂实验,采用优化半定量RT-PCR,以18S rRNA为内标,RT-PCR检测进食棉酚、丁布植物化合物的玉米螟中肠P450基因的转录. 结果表明,其转录水平能被棉酚、丁布显著诱导. 提示本实验克隆的玉米螟细胞色素P450对植物次生物质的代谢作用与P450表达量呈正相关.该研究为下一步将植物介导的RNA干扰技术应用于害虫生物防治提供坚实的基础.     

P53蛋白与SV40大T抗原之间相互作用的研究

为确定一种定量研究酵母体内蛋白质-蛋白质之间相互作用的简便、快捷的方法,为抗癌小分子化合物药物筛选提供一条可行性途径。本文选择P53蛋白与SV40大T抗原为靶蛋白对,首先用酵母双杂交系统（LiAc法质粒共转化酵母细胞）方法定性证明了两者之间存在相互作用,然后通过α-半乳糖苷酶活力定量测定了相互作用力的大小,并确定了最佳酶活测定时间,并与β-半乳糖苷酶活力测定进行了比较,认为α-关乳糖苷酶活力定量测定是研究蛋白质-蛋白质间相互作用的一种更加简便快捷的方法。     

血卟啉衍生物光敏产生的单线态氧量子产额的测定及其影响因素的研究

用色氨酸降解法测定了给定条件下含血卟啉衍生物(Hpd)的溶液系统中产生的单线态氧相对量子产额,并由单线态氧相对量子产额与色氨酸浓度之间的关系推算出单线态氧的实际产额及单线态氧与色氨酸反应的速率常数(1.0×10~8M~(-1)S~(-1)。研究了溶液pH、温度、Hpd浓度、光照波长等因素对单线态氧产额的影响。实验结果表明,单线态氧量子产额随温度升高而增大;随pH值升高而增大;随Hpd浓度增加而减小;并与光照波长有关。讨论了各个因素影响单线态氧量子产额的可能原因。     

几种血卟啉衍生物在中性水溶液中的聚集状态和光敏产生单线态氧量子产额的比较

通过稀释溶液导致吸收谱变化的分析,探讨了三种国产血卟啉衍生物(BHpd、YHpd和DHE)、血卟啉二盐酸(HPdHC)和原卟啉二钠盐(PpdSS)等五种卟啉类化合物在中性水溶液中的聚集状态。结果表明,YHpd和DHE的聚集体与BHpd和HpdHC的聚集体的结合方式可能不同,前两者结合得牢固,后两者结合得较为松懈。PpdSS的聚集形式介於上述两种情况之间。 用色氨酸光降解法测定了相近条件下用628nm光照时,五种卟啉类化合物中性水溶液中的单线态氧相对 量子产额。BHpd产生单线态氧的相对量子产额分别为YHpd和DHE的1.6倍和8.6倍,而HpdHC和PpdSS在表(?)上观察不到单线态氧的产生,它们本身却遭到较多破坏。 研究启示:由于BHpd和YHpd、DHE在聚集体的结合方式上的差异,它们的光动力的作用性更亦有所不同。     

血卟啉及其衍生物在水溶液和细胞内的时间分辨荧光的研究

本文报道了血叶啉衍生物(Hpd)及其由高压液相色谱法分离制备的4种主要成分以及血叶啉,血叶啉二盐酸盐和原叶啉(Ⅸ)二钠盐等8种叶啉衍生物分别在水溶液和CHO细胞内的荧光衰变动力学的研究,实验表明,除Hpd分离组分d的荧光寿命略短外,其余7种在水落液里的荧光寺命均在15ns左右,并发现它们的荧光态在细胞内衰变加快,然而,分离组分d在细胞内的荧光寿命却明显加长.根据实验结果,本文对叶啉衍生物的最低激发单线态在细胞内的驰豫过程提出了一种可能的模式,它反映了叶啉衍生物在细胞内与某种细胞组分的结合以及它们之间的能量传递.分析表明,荧光寿命的缩短意味着光敏效率的降低.     

YHPD及其分离组份在溶液中和CHO细胞内的吸收和荧光特征

本文报道了YHPD及其用HPLC方法分离得到的四种主要组份在溶液中和CHO细胞内的吸收和荧光特性.YHPD分离组份d在稀溶液状态(0.5μg/ml)与其它三种组份不同,表现出较稳定的聚集态性质,YHPD及组份摄入细胞后,荧光光谱和Soret吸收峰明显红移,荧光量子产额增高.同时看到YHPD的吸收和荧光特性受环境中H~ 浓度的影响     

国家自然科学基金委员会生命科学部1993年度资助项目介绍

国家自然科学基金委员会生命科学部于今年7月下旬完成了1993年度面上基金项目和重点基金项目的受理、评议和评审工作。对申请项目的同行评议工作,仍然采用两种方式,有10个学科全部用通讯方式,其他7个学科主要用会议的方式,少量项目通讯评议。各学科的评审会自6月下旬至7月下旬分别在长春、大连、南昌、青岛、厦门和烟台等地召开并圆满