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重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在PichiaPink系统中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:比较PichiaPink表达系统和巴斯德毕赤酵母GS115在表达外源蛋白方面的差异,对PichiaPink表达系统的潜在优点进行评价。方法:以重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白(HSA-IFN-α2b)为报告蛋白,构建相关载体,分别转化PichiaPink系统菌株和巴斯德毕赤酵母GS115菌株,诱导HSA-IFN-α2b表达并测定表达水平;通过SDS-PAGE检测HSA-IFN-α2b在PichiaPink系统中的降解程度。结果:PichiaPink系统几乎所有的转化子都可以表达HSA-IFN-α2b,而GS115菌株只有60%的转化子能表达HSA-IFN-α2b;同一种Pink菌株中,整合有高拷贝数表达载体pPink-HC的菌株表达量高于整合有低拷贝数表达载体pPink-LC的菌株;Pink蛋白酶缺陷菌株在复杂培养基(YPD,BMMY)中HSA-IFN-α2b基本没有降解,而在合成培养基(BSM)中降解现象明显。结论:PichiaPink表达系统产生的转化子较GS115菌株产生的转化子易于筛选;PichiaPink系统蛋白酶缺陷菌株可明显减少外源蛋白降解。这些结果为利用PichiaPink表达系统高水平和大规模制备外源蛋白提供了实验依据。 相似文献
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两种蛙Sox基因的PCR-SSCP分析 总被引:2,自引:1,他引:2
采用PCR技术,以参考人SRI,基因HMG-box的保守区序列而设计一对特异引物,扩增了黑斑蛙和金线蛙的Sox基因。结果两种蛙的雌雄个体均扩增出217bp的基因片段,与人对照相同。对扩增产物进行SSCP分析显示,两种蛙雌雄个体间的单链迁移率相同,两种蛙之间差异较小,而与人有较大差异。测序表明,两种蛙的Sox序列之间以及与各类物种的Sox基因都有非常高的相似性,充分显示出Sox基因在系统进化上的高度保守性。 相似文献
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果蝇精巢生殖干细胞(Germline stem cells,GSCs)的数量伴随衰老呈现递减趋势。本文以两种野生型果蝇品系Oregon、W1118以及Stat基因突变体的精巢为研究材料,采用免疫荧光染色技术,标记果蝇精巢Hub组织及生殖干细胞,研究了室温(25℃)条件下三种果蝇羽化后六个时间点(第1、15、30、45、60、75 d)精巢GSC的数量。结果表明,两种野生型Oregon、W1118与stat突变体果蝇羽化后第1 d的GSC平均数分别为8.55、8.60与8.15,根据曲线图得到,两种野生型果蝇GSCs半衰期均为60 d左右,而stat突变体果蝇约为30 d,两者存在显著差异,表明stat基因突变加速了果蝇精巢GSCs的衰老。 相似文献
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扬子鳄4个Sox基因保守区的克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
参考人SRY基因HMG-box的保守区序列,设计一对简并引物,用PCR扩增了扬子鳄Sox基因的HMG-box,并对PCR产物进行了亚克隆和测序。结果在雌雄个体中均筛选到4个不同的Sox基因,无性别差异。其序列与人相应的SOX基因保守区编码序列的相似性分别为91%、96%、100%、96%,分别命名为AS-Sox1,ASSox2,ASSox11,ASSox22。与其他动物相关的Sox/SOX基因的聚类分析结果表明,扬子鳄Sox基因编码的氨基酸序列与进化位置各异的其他动物的Sox/SOX基因编码的氨基酸序列存在高度的同源性,显示出Sox基因在系统进化上的高度保守性。 相似文献
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一种KBMA炭疽疫苗候选株的研制 总被引:1,自引:1,他引:0
炭疽病是由炭疽芽胞杆菌Bacillus anthracis引起的一种人畜共患传染病,严重影响着人类的健康。近年来在细菌疫苗的研究中发现一种特殊的现象:细菌被杀死后,体内的代谢活性却仍然维持 (Killed but metabolically active,KBMA)。此发现为炭疽新型疫苗候选株的研制提供了新思路。先通过同源重组的方法,利用pMAD质粒和Cre-loxP重组酶系统完成对缺失两个毒性大质粒的炭疽芽胞杆菌减毒株AP422的uvrAB基因的敲除,得到AP422△uvrAB菌株,然后通过光化学处理 (包括长波紫外光的照射和8-甲氧基补骨脂素处理),使炭疽芽胞杆菌AP422△uvrAB失去繁殖能力。利用四氮唑化合物MTS检测其代谢活性,表明光化学处理杀死后的炭疽芽胞杆菌AP422△uvrAB在至少4 h内维持一个很高的代谢活性水平,即具备典型的KBMA特性。炭疽杆菌AP422 △uvrAB的KBMA菌株的成功研制为我们提供了一种新型炭疽疫苗候选株。 相似文献
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目的 观察超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1, SOD1)基因(sod1)表达对果蝇寿命和运动能力的影响,分析sod1与衰老之间的联系。方法 利用RNAi干扰技术,获得sod1敲低果蝇;运用载体构建和显微注射的技术获得sod1过表达效应;通过免疫组织化学的手段定位sod1表达产物。结果 sod1表达产物在细胞质中高表达,在细胞核中不表达;sod1全身性敲低果蝇与正常组果蝇相比表现出显著的寿命缩短以及明显的攀爬能力下降现象,而sod1过表达结果则恰恰相反。结论 SOD1调控果蝇的衰老和运动能力。 相似文献