两种不同密度分离液分离的脐血CD34+、CD34-细胞造血活性比较

目的:比较两种不同密度的ficoll-泛影葡胺分离造血干细胞群的效果,找出更适合分离脐血造血干、祖细胞的分离密度,为脐血造血干细胞的医学研究及临床应用提供一定依据。方法:采集脐血6份,根据密度梯度离心法,用质量分数为(1.068±0.001)g/m L、(1.077±0.001)g/m L ficoll-泛影葡胺分离液等量分离同一份脐血,分别计数这两种分离液的单个核细胞获得率及细胞存活率,得到的单个核细胞再分别经免疫磁珠分选法获得高纯度的CD34~+细胞及除去了CD34~+的单个核细胞(CD34~(-depleted) MNCs),统计分析这两种不同密度分离液获得的CD34~+细胞、CD34~(-depleted)MNCs在甲基纤维素中形成CFU-GM集落数。结果:1(1.068±0.001)g/m L、(1.077±0.001)g/m L两种分离液分离的单个核细胞平均密度分别为(1.52±1.0)×10~6个/m L、(2.84±0.98)×10~6个/m L,(P0.05);经免疫磁珠纯化后的CD34~+细胞占单个核细胞(MNCs)的比率分别是(1.26±0.47)%、(1.07±0.15)%,(P0.05);2(1.068±0.001)g/m L分离的单个核细胞经免疫磁珠纯化后1.5×10~3个CD34~+细胞形成CFU-GM的集落(140.5±14.5)显著多于(1.077±0.001)g/m L的集落数(118.3±13.8)(P0.05);(1.068±0.001)g/m L分离的5×10~4个CD34~(-depleted) MNCs形成的CFU-GM集落数(132.0±5.1)也显著多于(1.077±0.001)g/m L的集落数(101.3±9.4),(P0.05)。结论:与1.077 g/m L Ficoll相比,1.068g/m L Ficoll-泛影葡胺分离液分离的单个核细胞中的CD34~+、CD34~-细胞造血活性更强,更适合用来分离脐血中造血干细胞群。     

HistoGel预包埋法在微小组织石蜡切片中的应用

目的：探讨微小组织HistoGel预包埋的石蜡切片制作方法和优势。方法：选择拟胚体(embryoid body, EB)为微小组织,将人 类胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cell, hESC)切割成小块,用拟胚体培养基在低贴附培养皿中悬浮培养形成拟胚体。收集拟 胚体,4 %的多聚甲醛固定。将HistoGel 加热到60 ℃熔解,离心去除拟胚体中的固定液,把液态的HistoGel 加到拟胚体上,调整拟 胚体的相对位置使其相对集中,待胶冷却凝固,将含有拟胚体的胶块取出,进行常规的石蜡切片操作,包括脱水、透明、浸蜡、包 埋、切片和苏木素- 伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色。显微镜下观察拟胚体的形态,并用拟胚体的形态完好度来评判这种方法。结 果：HistoGel 仅在60 ℃便可熔解,室温可以冷却凝固,含有拟胚体的胶块在整个操作过程中很方便。展片过程中,石蜡和HistoGel 能够保持平整。HE 染色的结果可以看出,拟胚体内部结构完好,细胞核和细胞质清晰可辨。结论：HistoGel可以作为一种微量细 胞组织的预包埋胶制作石蜡切片,而且相比琼脂预包埋,HistoGel 因其操作更加方便和特有的物理特性显示出更多的优点。