肿瘤转移抑制蛋白MTss1shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

肿瘤转移抑制蛋白MTss1在小脑浦肯野神经元发育中表达受到调控,然而功能并不清楚.拟通过RNAi的方法降低内源MTss1的表达,为MTss1在神经元中的功能研究建立基础.针对小鼠MTss1基因(Mtss1)的mRNA序列,设计合成三对shRNA序列,克隆到pSuper-Retro-Puro质粒中,瞬间转染GFP-Mts...     

Mtss1抗体制备及小脑中不同亚型磷酸化水平的检测

肿瘤转移抑制蛋白(Metastasis suppressor1,Mtss1),又名肿瘤转移消失蛋白(Missing in metastasis,MIM)在小脑神经元发育中受到调控,依次表达两种亚型:包含Src磷酸化位点的广泛表达亚型;含Src磷酸化位点片段经RNA剪接去除的神经元特异亚型.为检测这两种Mtss1亚型的酪氨酸磷酸化水平是否因Src磷酸化位点的去除存在明显区别,制备了灵敏度较高并可特异性沉淀外源和内源表达的Mtss1的兔多克隆抗体,对发育时期与成年大鼠小脑内源Mtss1酪氨酸磷酸化水平进行检测,发现成年后的Mtss1与出生后发育时期的Mtss1均发生明显的酪氨酸磷酸化,表明剪接去除包含有Src磷酸化位点中的神经元特异亚型中,还有其他的酪氨酸残基被磷酸化,提示其他酪氨酸磷酸化激酶信号通路对Mtss1神经元亚型的调控作用.