北部湾涠洲岛水域发现上颌和须板异常的布氏鲸:对保护的启示

2018年初以来,北部湾涠洲岛附近出现了布氏鲸（Balaenoptera edeni）的活动。一头上颌与须板异常的小布氏鲸个体引发热议,其视频在网络上广泛流传。我们在船只调查时,目击该个体10次,其以单独活动为主（90%）,主要出现在涠洲岛到斜阳岛之间的水域,最小凸多边形家域面积为14km2,核心家域面积为166.9km²。然而,在 2019年3月30日我们发现该个体已死亡漂浮在海面,根据尸体腐烂状况来推测,该个体的死亡时间大约为3~5日,死亡原因不明。根据照片和现场解剖分析,推测该小布氏鲸的上颌和鲸须异常可能是被渔网或绳索缠绕导致的。由于无法从外形上确认属于哪一个亚种,因此我们测定了该个体的线粒体DNA D-loop（mitochondrial DNA, mtDNA）和细胞色素b（cytochrome b, Cyt b）基因,分别得到909bp和395bp的序列,经比对和系统发育重建,发现该个体属于近岸分布的小布氏鲸亚种（Eden’s whale, B. e. edeni）。由于小布氏鲸具有一定季节迁移特性,我们无法判断造成其上颌伤害的渔网或绳索是否在中国水域。尽管如此,仍然建议当地部门应加强宣传,减少渔网等海洋垃圾的丢弃和排放,为小布氏鲸营造一个安全的栖息环境。     

HFRSV在平皿表面室温暴露后存活力的定量研究

将肾综合症出血热病毒布于玻璃平皿表面,室温条件下分别暴露0、30、60、90和120min,观察病毒的定量存活情况.结果在经过120min的暴露后,HFRSV的效价仍高达104.23 TCID50.这一结果为HFRS的流行病学及其防治研究提供了重要的基础数据.     

mRNA差示技术的原理及其应用

生物个体发育与基因有序的选择性表达有关,许多疾病的产生是由于基因表达不正常所致,因此确定细胞中基因表达差异是一项重要的研究课题。以往研究基因表达差异的方法主要包括:cDNA减法杂交和蛋白质双向电泳。cDNA减法杂交需要建立cDNA文库,通过两次杂交分离去除双链分子,再将单链分子同文库进行杂交。该法不仅技术复杂、费时,而且重复性较差。蛋白质双向电泳仅能粗略地比较两种细胞内表达的蛋白的差异,不能直接从基因水平分析鉴定。1992     

GGNBP1抗体制备及小鼠组织表达谱分析

体外实验研究表明配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)可能与GGN1相互作用形成睾丸特异性复合物,在精子生成过程中发挥作用.从小鼠睾丸总RNA中反转录扩增Ggnbpl全长cDNA,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达GGNBP1,经聚丙烯酰胺凝胶纯化后免疫新西兰白兔,制备兔多抗血清.镍离子金属螯合柱纯化表达的GGNBP1蛋白,与NHS活化基团交联,制备GGNBP1抗体亲和层析柱,纯化GGNBP1多抗.在293FT细胞中瞬时表达Myc-GGNBP1融合蛋白,用于Mvc单抗验证GGNBP1抗体特异性,结果证明获得了特异性的GGNBP1抗体.分别制备小鼠脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织匀浆,用GGNBP1抗体进行Western印迹分析,结果仅在睾丸组织匀浆中检测到GGNBP1特异性条带,证明GGNBP1是睾丸特异性表达蛋白.     

重组p16腺病毒的构建及其对人白血病细胞的抑制作用

为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及野生型 p1 6基因的抗肿瘤特性 ,构建了复制缺陷型重组 p1 6腺病毒 .首先将 p1 6全长 c DNA插入穿梭质粒 p Ad CMV产生重组质粒 p Ad-CMV- p1 6,然后通过脂质体介导与 p JM1 7共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生 E1区缺失的重组腺病毒空斑 .用纯化后的腺病毒感染人白血病细胞株 HL- 60后 ,PCR及 Western blot分析显示在感染细胞中有外源性 p1 6 c DNA存在和 p1 6蛋白表达 ;被感染的 HL- 60细胞的生长受到明显抑制 ,而未感染细胞及对照腺病毒感染的细胞没有受到抑制 .结果表明 ,腺病毒作为一种新型基因转移载体 ,可有效地介导肿瘤抑制基因 p1 6的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景 .     

长春花激素完全适应型细胞的生长和阿玛碱合成特性

从长春花激素依赖型细胞系（C20D）筛选出一种激素完全适应型的细胞系（C20hi),考察了两种细胞生长、阿玛碱合成和引吲哚生物碱生物合成相关的酶的活性,结果表明：在生长培养基上二生长无显差异,而C20hi细胞平均阿玛碱含量是C20D的31.9倍,在生产培养基上C20hi细胞生长较C20D快,C20hi平均阿玛碱含量是C20D的18.4倍。通过比较生产和生长培养基中C20hi细胞的色氨酸脱羧酶、异胡豆苷合酶和long牛儿醇-10-脱氢酶活性,发明,通过5年的继代培养,激素完全适应型细胞系C20hi的阿玛碱含量是比较稳定的。     

GGN3与GGNBP2的相互作用及作用区域确定

生殖细胞缺陷症(gcd)小鼠突变体是上世纪90年代初发现的一种不育突变小鼠,FancL(也叫Pog)的缺失是产生god突变小鼠的原因。FANCL是一种含有PHD结构域的泛素E3连接酶,是Fanconi贫血复合物中的组分之一。在生殖细胞中,FANCL与GGN1和GGN3相互作用,而GGN1和GGN3蛋白的功能还不清楚。为了研究GGN3的功能,揭示更多的参与该过程的蛋白质,运用Clontech公司新开发的第三套酵母双杂交系统以GGN3为诱饵从成年小鼠睾丸cDNA库中筛选与其相互作用的蛋白分子。发现了一个精子生成期间在睾丸中特异性高表达的基因Ggnbp2,免疫共沉淀分析表明,Ggnbp2编码的蛋白质产物GGNBP2在哺乳动物细胞中与GGN3特异相互作用。通过构建突变体,确定了GGNBP2蛋白与GGN3相互作用的区域。以上结果为揭示GGN3和GGNBP2在生殖发育中的功能、丰富生殖细胞发育的蛋白调控网络及其调控规律奠定了一定的基础。     

应用酵母双杂交技术寻找与GGNBP相互作用的蛋白质

生殖细胞缺陷症(gcd)小鼠突变体是20个世纪90年代初发现的一种不育突变小鼠,其不育原因是由于其胚胎期原始生殖细胞的数目低于正常。FancL(也叫Pog)的缺失是引起gcd突变小鼠的原因,FancL基因缺失后可能影响了小鼠胚胎期原始生殖细胞的增殖／存活和成年期小鼠精母细胞的减数分裂。FANCL是一种含有PHD结构域的泛素E3连接酶,是Fanconi贫血复合物的组分之一。在生殖细胞中,FANCL与GGN1和GGN3相互作用,GGN1和GGN2又与一种新的蛋白质GGNBP特异作用。但GGNBP蛋白的功能还不清楚。为了研究GGNBP的功能以及揭示更多的参与该过程的蛋白质,运用Clontech公司新开发的第3套酵母双杂交系统,以GGNBP为诱饵从成年小鼠睾丸cDNA库中筛选与其相互作用的蛋白质基因,发现了一个主要在睾丸中表达的新的基因,其编码的蛋白质产物在酵母系统中与GGNBP特异作用。     

中国特有植物篦子三尖杉的生物学特性及其保护

本文综述了我国特有植物篦子三尖杉（ＣｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓｏｌｉｖｅｒｉＭａｓｔ．）的生物学特性,包括其外部形态特征、苗端、幼茎、叶、树皮、木材的内部结构、生殖生物学特性、花粉形态、化学成分、地理分布和分类地位等,最后初步分析了篦子三尖杉的濒危机制,并提出了几项保护措施。     

小鼠FANCL抗体制备及组织表达谱分析

FANCL是一个范可尼氏贫血新蛋白,它作为泛素E3连接酶催化FANCD2的单一泛素化,在修复DNA损伤、维持染色体稳定的FA途径中起着关键作用。胚胎期FANCL与小鼠原始生殖细胞增殖密切相关,成年睾丸中FANCL与几个生殖细胞特异性蛋白形成一个睾丸特异网络,可能参与影响精子的生成。采用RT-PCR方法从小鼠总RNA中扩增克隆FancL全长cDNA片段,构建表达质粒,在大肠杆菌中表达了6His-FANCL蛋白,用表达蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备了抗FANCL多抗血清。采用镍离子金属螯合柱纯化6His-FANCL蛋白后,通过与活性基团-NHS交联制备了FANCL抗原柱,亲和纯化了FANCL多抗。为了验证抗体活性和特异性,在HEK293T细胞中瞬时表达了HA-FANCL融合蛋白,分别用HA单抗和纯化多抗进行Western印迹分析,结果表明获得了特异性的FANCL抗体。为了观察FANCL在组织中的表达谱,制备了多种小鼠组织匀浆蛋白,使用纯化的FANCL多抗进行Western印迹分析,在脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢、子宫和肌肉组织中都检测到FANCL蛋白的表达,说明FANCL在小鼠组织中是广泛表达的,这与其是DNA修复复合物中的重要成员相一致。