微生物来源的γ内酰胺酶研究进展

γ-内酰胺酶属于酰胺酶,其中的(+)γ-内酰胺酶能够高效率的动力学拆分外消旋体γ-内酰胺,获得光学纯的(-)γ-内酰胺。光学纯的(-)γ-内酰胺是制备抗病毒药物碳环核苷化合物的重要手性中间体。目前报道共有7个来源于微生物的γ-内酰胺酶,其中来源于Aureoacterium sp.的(-)γ-内酰胺酶的晶体结构获得了解析。根据晶体结构推测的(-)γ-内酰胺酶的催化机理与α/β水解酶超家族的催化机理是类似的。但是,目前还没有(+)γ-内酰胺酶的晶体结构模型的数据及机理的描述。γ-内酰胺酶的研究方向主要包括γ-内酰胺酶的蛋白质工程改造,对不同对映体选择性的γ-内酰胺酶的催化机理的阐述,以及γ-内酰胺酶在生物体内的功能研究。     

野油菜黄单胞菌8004甘天丝亮特征序列酯酶及其酯酶结构域在大肠杆菌中的表达，包涵体复性及性质

【目的】了解野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv. campestris）8004 GDSL(蛋白序列中甘氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和亮氨酸特征序列)酯酶的性质。【方法】利用PCR方法扩增Xcc_est及其不同结构域的基因,这些基因以组氨酸标签融合蛋白的形式在大肠杆菌中获得表达。融合蛋白通过镍亲和色谱纯化。【结果】部分纯化的Xcc_est 在催化对硝基苯丁酸酯时,最适pH值为8.0,最适温度为52 °C。 Xcc_est 对于对硝基苯丁酸酯的Km值和Vmax值分别是47.6 ± 4.6 μmol/L, 和67.6 ± 7.8 U/mg,Xcc_est的酯酶结构域(Xcc_estN1-334)对于同一底物的Km值和Vmax值分别是 469.4 ± 9.8 μmol/L和2.5 ±0.9 U/mg。Xcc_est的成熟结构域(Xcc_estN26-606)可以获得成功复性,但是成熟酯酶结构域(Xcc_estN26-334)不能获得复性。复性后的Xcc_estN26-606底物谱较广,在室温下具有较高稳定性。【结论】复性的成熟结构域蛋白(Xcc_estN26-606)具有一定的生物转化应用前景。     

嗜冷枯草芽孢杆菌低温脂肪酶纯化与酶学性质研究

从筛选出的产低温脂肪酶的菌株发酵液中,经硫铵沉淀、疏水色谱和阴离子交换色谱纯化得到电泳纯酶。酶的最适作用温度为25℃,0℃以下仍可保持25%左右的相对酶活;在pH5.8～8.8的范围内有较高活力,其最适作用pH为7.8;对热很敏感,在60℃保温30min活性即全部丧失,具有典型的低温脂肪酶特征;酶催化不需要金属离子的参与,结构中可能含有二硫键。在25℃,pH8.0测得酶水解反应的Km值为2.65×10-5mol/L,Vmax值为5.21mmol/(L.min)。     

产环氧化物水解酶的黑曲霉菌种分离和发酵条件的研究*

从土壤中筛选出一株能将苯基环氧乙烷立体选择性水解为R-苯基乙二醇的环氧化物水解酶的黑曲霉SQ-6。对其产酶发酵条件进行了研究,最佳碳、氮源分别为2.0%蔗糖和2.0%玉米浆,最适初始pH为4.0,该酶不需诱导,同时还研究了其他发酵条件对产酶的影响。使用含酶细胞进行底物苯基环氧乙烷转化,产物(R)-苯基乙二醇转化率为41%,ee值为99%。     

产γ_内酰胺水解酶菌株的筛选及发酵条件研究

(-)γ-内酰胺是合成两种抗艾滋病药物(-)carbovir和(-)abacavir的重要原料,具有重要的应用价值,微生物酶法拆分( /-)γ-内酰胺生产(-)γ-内酰胺的方法具有良好的应用前景。以N-乙酰苯丙氨酸为唯一碳源,从土壤中筛选得到了69株具有酰胺水解酶活性的菌株,利用液相色谱分析方法确定了其中20株有较高的酰胺水解酶活性,利用手性色谱分析的方法进一步得到了一株具有较高立体选择性,能拆分( /-)γ-内酰胺而获得(-)γ-内酰胺的菌株L29-9,对该菌株的产酶培养基的碳、氮源及初始pH值等进行了研究。结果表明:当选择碳源柠檬酸2g/L、氮源酵母提取物5g/Lp、H 7.0、培养时间40h时,通过完整细胞转化,在30℃下经过12h的反应,产物(-)γ-内酰胺产率达40%,ee值99.5%。     

胃良性病变不同部位粘膜肌形态改变及其意义

观察胃良性病变不同部位粘膜肌形态学改变及其意义。用目镜测微尺对不同部位的胃粘膜肌厚度进行测量,部分病例做网状纤维的VG染色。结果显示根据粘膜肌的形态学变化,把增厚之粘肌分作三个类型：即炎性增厚、肌性增厚和纤维性增厚,粘膜肌的改变与相应区的胃粘膜病变有关,结果表明粘膜肌的改变有三种类型,胃窦区的病变较体区重,粘膜的形态改变可能影响胃粘膜腺体的分泌,并有利于粘膜内癌向粘膜下侵犯。