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在PCR的过程中,采用5溴脱氧尿苷三磷酸(BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的方法,对克隆的野油菜黄单胞菌的α淀粉酶基因进行了体外诱变。结果表明,BrdUTP浓度越高,诱变越强;浓度越低,诱变越弱。当BrdUTP浓度为dTTP的0.1%时,可以得到最多的正诱变结果。用LBSP鉴别培养基初筛,然后用Yoo改良法测定酶活,仅一轮诱变就获得了其表达产物α-淀粉酶的酶活分别降低了5倍和提高了20倍的两个突变基因。再以后者为PCR模板进行第二轮诱变,从而筛选到了α-淀粉酶的酶活提高40倍的突变体。此诱变方法克服了用碱基类似物在体内诱变由于核酸复制酶等的校正作用而造成诱变无效的难题,并为基因的体外诱变找到了一条新途径。 相似文献
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基因体外诱变的一种新方法--脱氧核苷三磷酸替代法 总被引:1,自引:0,他引:1
在PCR的过程中,采用5-溴脱氧尿苷三磷酸(BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的方法,对克隆的野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因进行了体外诱变.结果表明,BrdUTP浓度越高,诱变越强;浓度越低,诱变越弱.当BrdUTP浓度为dTTP的0.1%时,可以得到最多的正诱变结果.用LBSP鉴别培养基初筛,然后用Yoo改良法测定酶活,仅一轮诱变就获得了其表达产物α-淀粉酶的酶活分别降低了5倍和提高了20倍的两个突变基因.再以后者为PCR模板进行第二轮诱变,从而筛选到了α-淀粉酶的酶活提高40倍的突变体.此诱变方法克服了用碱基类似物在体内诱变由于核酸复制酶等的校正作用而造成诱变无效的难题,并为基因的体外诱变找到了一条新途径. 相似文献
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目的:研究双脱甲氧基姜黄素体外抑制SKOV3卵巢癌细胞抑制作用的体外实验研究。方法:(1)将不同浓度双脱甲氧基姜黄素(0、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml)作用于人卵巢癌SKOV3细胞6、12、24h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测SKOV3细胞的增殖活性;(2)流式细胞仪观察双脱甲氧基对SKOV3卵巢癌细胞周期的作用,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:(1)双脱甲氧基姜黄素对SKOV3细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度和时间依赖效应;(2)双脱甲氧基姜黄素能诱导SKOV3细胞G1期阻滞,通过抑制细胞生长周期,降低细胞增生速率抑制肿瘤细胞增殖;(3)双脱甲氧基姜黄素能下调SKOV3细胞PCNA蛋白表达,并呈一定的浓度依赖性。结论:双脱甲氧基姜黄素能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖,可能为临床治疗卵巢癌提供了一种新的方法。 相似文献
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一个耐高温酵母菌株的tps1基因克隆及序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
葡萄汁酵母的菌株YY具有耐高温特性,研究其可能的耐高温机理具有重要的理论和实践意义。其在37℃能正常生长,致死温度为68℃。通过克隆其tps1基因序列,体外扩增后测序,分析蛋白序列的突变。发现在这一菌株的tps1基因序列有13个突变,TPS1蛋白序列存在有三个位点的变异,分别是67位(Gly/Ala)、69位(Glu/Gln)、387位(Val/Leu),这三个变异均增加了海藻糖-6-磷酸合成酶的疏水性,从而增加了酶在高温下的稳定性性。通过这一发现,可以部分解释菌株YY的耐高温机理。 相似文献
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早产是围生儿死亡和患病的重要原因之一,有效的风险评估可以降低潜在的早产发生风险。胎儿纤维连接蛋白(fetal fibronectin,f FN)是一种细胞外基质的糖蛋白,在胎盘植入、胎盘子宫的细胞黏附、正常妊娠的维持等方面均起重要作用。研究表明,多种产科情况都可导致f FN的异常,临床上通过对孕妇的宫颈阴道分泌物、血浆、羊水中的f FN进行检测,能够预测分娩时间、评估引产的困难程度和胎膜早破发生早产的风险。目前,f FN的测定主要是采取ELISA快速测定方法。本文主要对f FN与早产预测的研究进展进行了综述,其中对f FN的来源以及f FN测试单独或联合宫颈超声预测自发性早产的临床价值作了重点阐述。 相似文献
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11月2日,"中国科学院北京生命科学研究院.京蒙干细胞战略合作签约仪式暨北京生命科学论坛第十九次会议干细胞转化医学研讨会"在京隆重举行,会议宣布由中国科学院北京生命科学研究院与北京京蒙高科干细胞技术有限公司联合建立的"中国科学院北京生命科学研究院转化医学研究中心"正式成立, 相似文献
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目的:探讨产科病房安全管理的潜在隐患,并针对隐患采取防范措施,有效的控制产科病室医院感染的发生.方法:针对产科病房的安全隐患进行因素分析,并提出针对性护理预防措施.结果:对存在的护理问题和可能出现的差错苗头及时采取改进措施和效果评价反馈,将差错、事故消灭在萌芽中.结论:产科病房病区需配备具有高度责任心和有爱心的医护人员实施母、婴统一体的护理制度.在护理过程中强化防范意识;在健康教育中强化安全意识,贯彻以母婴为中心的思想,才能保证产科母婴病房的安全、舒适、和谐. 相似文献
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