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微阵列(microarrays)技术及其应用 总被引:5,自引:0,他引:5
微阵列分为cDNA微阵列和寡聚核苷酸微阵列,微阵列上“印”有大量已知部分序列的DNA探针,微阵列技术就是利用分子杂交原理,使同时被比较的标本(用同位素或荧光素标记)与微阵列杂交,通过检测杂交信号强度及数据处理,把他们转化成不同标本中特异基因的丰度,从而全国比较不同标本的基因表达水平的差异,微阵列技术是一种探索基因组功能的有力手段。 相似文献
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本文继续介绍联合抽提法的第Ⅱ部分“免疫”核糖核酸(iRNA)的抽提。将白细胞匀浆沉淀残渣按Scherrer 和Darnell 的十二烷基磺酸钠加苯酚的热抽提法抽提。每克白细胞可得iRNAl~2毫克。A_(260)/A_(230)=2.05~2.26,A_(260)/A_(280)=2.03~2.20。RNA 含量为48.33±4.72%,DNA 含量为4.31±2.53%,蛋白质为2.76±0.32%,糖原含量为42.92±9.92%。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示五条区带,相当于4S、8S、9S、15S 和20S。冻干的iRNA 制剂经动物实验证明无毒性、无热原和无过敏性,但对家兔具有抗原性。制剂经RNase、DNase 或pronase 处理后与抗血清仍有沉淀反应,但经唾液淀粉酶处理后沉淀线消失。所以认为抗原性系由制剂中所含糖原所引起。溶于肝素溶液的制剂注射于病人,能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。 相似文献
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HLA-DRB1基因位点多态性的PCR-RFLP分析 总被引:1,自引:0,他引:1
设计并建立一套适合国内应用的改良PCR-RFLR方法,分5组特异性扩增DNA样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码DR抗原特异性的HLA-DRB1基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它DRB位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品,已报道过的DRB1位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。 相似文献
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本文以人VEGFcDNA为目的基因,构建成逆转录病毒质粒载体,并进一步包装成重组缺陷型逆转录病毒,以此感染原代兔皮肤成纤维细胞,经G418筛选,获得了具有分泌VEGF能力的抗性细胞克隆,经Southern、PCR、Northern、RT-PCR等检测,证实了外源基因已整合至原代兔皮肤成纤维细胞基因组中,无重排和产生野生型病毒之患。整合的VEGF可在修饰细胞中转录,经内皮细胞增殖实验和血管通透性实验证实其表达产物具有强大的生物活性。为进一步研究VEGF的生物学功能和生理效应提供有用的工具。 相似文献
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陈诗书 《中国生物工程杂志》1994,14(1):30-40
人类基因治疗研究的进展陈诗书(上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室)人类基因治疗研究中心一、基因治疗的概念基因治疗能够在比较短的时间从理论设想变为现实,主要是对疾病分子生物学的研究已取得了重大的进展,同时发展了许多有关的新技术新方法。特别是70年代对RNA或DNA肿瘤病毒转化细胞的研究中所发现的病毒的遗传物质可以转移至宿主细胞基因组中的证据,揭示这些病毒可以作为基因转移的媒介。重组DNA 技术的迅速发展使人们可以在实验室构建各种病毒载体。 相似文献
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复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明 ,mmc启动VEGF基因在小鼠肌细胞C2C12和NIH3T3细胞中能有效表达且具有一定的肌细胞特异表达功能 相似文献
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白介素-2受体及其介导的信号转导 总被引:2,自引:0,他引:2
白介素2(IL-2)是一种重要的调控免疫系统细胞增殖和分化的细胞因子。其生物活性的发挥是通过与细胞表面白介素-2受体(IL-2R)结合,继而激活胞质内多种非受体型蛋白质酪氨酸激酶(PTK),进一步启动3种主要信号转导途径:控制基因转录的Jak-STA... 相似文献
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从人外周血单核细胞中抽提总RNA为模板,分别用5’含EcoRⅠ、3’含BamHⅠ限制性酶切位点的细胞因子基因特异引物合成合信号肽全长IL-2、γ-IFN及α-TNFcDNA.然后将这些细胞因子cDNA分别重组入含筛选标记基因Neo的逆转录病毒载体LXSN中.采用磷酸钙共沉淀法转染逆转录病毒包装细胞系PA317.分别收集到含IFN-γ、TNF-α和IL-2基因的缺陷型逆转录病毒上清及只具空白载体质粒pLXSN的病毒上清这四种病毒颗粒用于导入人肝癌、胃癌细胞,可获得单克隆化的细胞因子基因修饰株PCR,Southern,RT-PCR及Northern杂交证明,有相应细胞因子及筛选标记基因的转入和表达生物活性分析也证实各基因修饰株细胞培养上清液中有一定活性的相应细胞因子.结果表明逆转录病毒介导的细胞因子基因转移是成功的 相似文献