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目的:建立廿烯醇化酶(EN01)腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨EN01过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法:采用EN01腺病毒过表达载体以梯度感染复数值(MOI)100、250、350、400pfu/cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞,于转染后2,4h、48h,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(EusA)研究EN01过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果:最佳转染条件是,当MOI为350pfu/cell,转染48h后,转染率达100%;通过荧光定量PCR与Westernblot法,检测到EN01mRNA与蛋白均过表达(P〈0.01);与培养液组和腺病毒空载体组相比较,EN01过表达使颗粒细胞孕酮分泌量极显著增加(P〈0.01)。结论:EN01过表达会使体外原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞孕酮分泌量增加。 相似文献
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