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鉴别差异表达基因的新方法──抑制消减杂交法(SSH) 总被引:3,自引:0,他引:3
抑制消减杂交法(SuppressicSubtractiveHybridization,SSH)是最近(1996)报道的能有效鉴别两个不同细胞群差异表达基因的新方法[1,2]。该方法是以抑制PCR和消减杂交法为基础,在一轮反应中实现mRNA的均等化和消减步骤。本文对SSH法的原理、优缺点作了介绍,并与其它检测差异表达基因的方法,如mRNA差别显示法(DDRT-PCR)、代表性序列差异分析(RDA)比较,认为SSH方法具有高效快速、高敏感性和假阳性低等优点。同时,625个克隆中有很大一部分是转录物丰度很低的基因,40%的克隆可能为新的基因。因此,SSH可作为鉴别差异表达基因和克隆新基因的有效方法。 相似文献
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神经细胞粘连分子L1是神经系统发育过程中介导细胞-细胞相互作用的重要分子。L1能启动轴突的延伸并与神经细胞迁移有关,在神经系统发育和维持方面起重要作用。L1基因突变会导致智力迟钝,痉挛性截瘫,脑积水和其他的发育异常。L1基因突变导致遗传性神经细胞疾病的分子机理目前还不清楚,本研究介绍L1转基因小鼠的构建。在小鼠神经细胞粘连分子L1细胞外区段(L1ECD)cDNA的末端上加一终止密码子后,置于神经系统特异性的pCAMKⅡ启动子之后,构建成L1ECD转基因DNA。为验证构建物的正确性,将其与真核细胞表达载体pCEP4连接并转染C6细胞,实现了L1ECD在C6细胞中的表达,并观察了L1ECD对体外培养的C6细胞和原代培养的神经元的效应。采用显微注射的方法将L1ECD转基因DNA导入小鼠受精卵,产出的仔鼠经尾组织基因组DNA Southern杂交分析和组织RNA Northern杂交分析,证明L1ECD转基因DNA已整合在转基因小鼠基因组内,并呈脑特异性表达。 相似文献
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ADAM家族是近年来发现的一类锚定于细胞膜的细胞表面蛋白家族,该家族成员具有4个较为保守的潜在功能域,在细胞间粘连和融合等活动中有重要作用。迄今为止已有25个成员被发现,它们在精卵结合、肌细胞融合、膜蛋白分子的加工等生理过程中发挥重要功能。 相似文献
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鉴别差异表达基因的新方法—抑制消减染交法(SSH) 总被引:3,自引:0,他引:3
抑制消减杂交法是最近报道的能有效鉴别两个不同细胞群差异表达基因的新方法。该方法是以抑制PCR和消减杂交法为基础,在一轮反应中实现mRNA的均等化和消减步骤。本文对SSH法的原理,优缺点作了介绍,并与其它检测差异表达基因的方法,如mRNA差别显示江,代表性序列差异分析比较,认为SSH方法具有高效快速,高敏感性和假阳性低等优点。 相似文献
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