三种抗生素去除大青叶蝉内共生菌的效果

内共生菌能够为寄主提供营养物质,同时在宿主昆虫的生长及生殖等方面具有特殊作用,大青叶蝉Cicadella viridis与其他昆虫一样具有内共生菌。本文设计了大青叶蝉内共生菌Sulcia muelleri和Sodalis sp.的特异性引物,检测其在大青叶蝉中的感染率;同时分别用利福平、盐酸土霉素和青霉素G钾盐3种抗生素处理大青叶蝉,用TaqMan探针法绝对定量PCR检测不同处理时间下大青叶蝉内共生菌的拷贝数。结果表明:大青叶蝉内共生菌Sulcia muelleri和Sodalis sp.的带菌率均为100%;利福平、盐酸土霉素和青霉素G钾盐均可使内共生菌的量减少,但不能完全消除。3种抗生素均能显著减少大青叶蝉雌虫和雄虫中内共生菌Sulcia muelleri 16S rRNA基因拷贝数。盐酸土霉素和利福平均能显著降低大青叶蝉若虫和雄虫中内共生菌Sodalis sp. 16S rRNA基因拷贝数,但对雌虫影响不显著。     

大青叶蝉内共生菌的检测及其16S rRNA基因序列分析

用细菌通用引物27F-1513R对大青叶蝉内共生菌的16S r RNA基因进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,克隆、测序、序列比对与分析,用贝叶斯法和极大似然法构建系统发育树。结果表明:从大青叶蝉体内鉴定出Sulcia muelleri和Sodalis sp.2种内共生菌,Sulcia muelleri隶属于拟杆菌门Bacteroidetes黄杆菌纲Flavobacteria黄杆菌目Flavobacteriales黄杆菌科Flavobacteriaceae,该内共生菌获得13个新单倍型,14个变异位点,其序列间的一致率为和遗传距离分别为99.40%-99.80%和0.001-0.004;系统发育树显示,Sulcia muelleri与大叶蝉亚科中检测到的Sulcia muelleri聚在一起,其变异程度低,所有单倍型为同一个种。Sodalis sp.属于变形杆菌门Proteobacteria伽马变形菌纲Gammaproteobacteria肠杆菌目Enterobacteriale肠杆菌科Enterobacteriaceae,本研究获得5个新单倍型,20个变异位点,其序列间的一致率为96.10%-99.70%,遗传距离范围为0.012-0.040;系统发育树显示,Sodalis sp.与采采蝇检测到的Sodalis glossinidius聚在一起,其变异程度相对较大,属于同一个属。