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杂交瘤技术使得单克隆抗体大量制备成为可能,采用该技术制备单抗的关键步骤是杂交瘤细胞的培养,常规方法是用细胞培养瓶水平方式培养,这需要经常细心照料细胞使之处于健康状况,此外,如要获得大量的单抗,还需要通过进一步重新接种来扩大细胞数量。本文报道了一种高效而又简便易行的在标准细胞培养瓶中制备单克隆抗体的方法。该方法的关键在于将杂交瘤细胞和其适合的培养液放在水平的细胞培养瓶中培养,直到90%的细胞达到融合,然后补加培养液至培养瓶的颈部,将瓶子竖直地放置在培养箱中培养3~4周,直到90%~95%的细胞死亡… 相似文献
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通过DNA体外重组技术,以pET-3b为表达载体,构建了重组表达质粒pET-6R(B)和PET-6R(B)4,分别编码28kD的hIL-6R配基结合区片段及其53kD的二联体蛋白,并为酶切分析和DNA序列分析所证实。SDS-PAGE分析表明,含有重组表达质粒的菌株可分别表达出28kD的蛋白rIL6R-28和53kD的rIL6R-53。重组蛋白分别占菌体总蛋白的45%和29%左右。重组蛋白主要以包涵体形式存在,Western印迹表明重组蛋白具有IL-6R的抗原性。 相似文献
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21世纪是生物的世纪。生物科学发展的许多重大突破,产生的许多新观念、新成果和新技术是人类文明进步的重要标志。但新的科学技术成果在社会生活中推广运用,常常引起新的道德和伦理等问题,甚至别有用心的人以此作为他们的技术平台。所以生物技术的发展必须考虑对社会、人类和生态的影响,遵守法律和相关的规章制度,使它真正服务于人民,造福于人类。 相似文献
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人白细胞介素18(IL-18)是新近发现的细胞因子之一.研究表明它参与T1辅助细胞介导的细胞免疫.利用RT-PCR技术从人外周血细胞扩增得到了IL-18的cDNA并测定其核酸序列.利用基因重组技术构建IL-18的表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达.这为以后进一步研究IL-18的功能奠定了基础. 相似文献
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重组人源脑红蛋白的高效表达、纯化及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
脑红蛋白(Neuroglobin,NGB)是新发现的主要表达于脊椎动物神经元及视网膜中的第三类携氧珠蛋白。已有诸多报道认为脑红蛋白在缺氧缺血性脑损伤的神经保护过程中,作为活性氧簇(ROS)的清除剂或缺氧信号的感受器起重要作用,但其神经保护作用的具体机制不明。显然,实现该蛋白的制备对于研究其功能具有重要作用。基于此,通过RT-PCR从人胎脑中扩增出脑红蛋白cDNA并克隆到原核表达载体pBV220,通过测序鉴定正确后转化至大肠杆菌HB101中诱导表达,表达产物超声破碎后经凝胶过滤柱Sephacryl S-200和阴离子交换柱Q Sepharose FF纯化,最后通过Sephadex G-25脱盐。经15% SDS-PAGE和Western blot检测及质谱和蛋白序列分析鉴定制备的蛋白样品为脑红蛋白。本文采用两步法实现了脑红蛋白高效特异性纯化,为后期基于脑红蛋白神经保护作用的功能及机制研究奠定了重要基础。 相似文献
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肥胖基因的分离及其在大肠杆菌中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
利用PCR技术自外周血白细胞染色体DNA中扩增获取了肥胖基因(ob基因)的外显子2和3序列.经过拼接,获得了全长的ob基因编码序列. 测序结果表明,获得的序列与文献报道完全一致.利用PCR技术扩增出成熟蛋白的编码序列,克隆至表达载体pBV220中获得了表达菌株,并对表达产物进行了初步纯化,为进一步研究ob基因产物的功能与应用奠定了基础. 相似文献
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人白细胞介素22基因的分离及其在大肠杆菌中的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
白细胞介素 2 2 (IL 2 2 )是 2 0 0 0年发现的一种新的人类细胞因子 ,它在多种组织中均有表达 ,包括胰腺、脑 ,肝、小肠、直肠和肾等 .在功能方面 ,IL 2 2上调肝细胞急性期产物 ,参与炎症反应[1~ 3] ;诱导胰腺相关蛋白PAP1 Reg2和OPN的高表达 ,表明IL 2 2参与胰腺免疫功能反应[4 ] ;它对ConA刺激下Th1细胞IFN γ的产生没有明显的抑制作用 ,却大大抑制了Th2细胞IL 4的分泌 ,这对于哮喘有潜在的治疗作用[1] .我们利用反转录PCR获得了编码hIL 2 2成熟蛋白的cDNA ,并构建了高表达载体pBVhIL 2 2 ,… 相似文献
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淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)能广泛杀伤自身肿瘤、同种异体肿瘤。LAK细胞用于恶性肿瘤的过继免疫治疗是近年十分活跃的研究领域。IL—6是一种多功能细胞因子,在机体免疫系统、防御功能及造血调节中有重要作用。已有文献报道,IL—6可诱导IL—2受体表达,提高PHA刺激的细胞毒T细胞(CTL) 的杀瘤活性。本实验观察了IL—6和IL—2合用对人LAK细胞诱导及其杀瘤活性的影响。(1)在诱导LAK细胞克隆的含 相似文献
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目的 探讨肝受体类似物-1( liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)基因序列差异与小鼠排卵数性状间关系.方法 根据GenBank中NM_001159769序列设计了5对引物扩增Lrh-1基因CDS区,用单链构象多态性(Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析小鼠Lrh-1基因序列差异,分析Lrh-1基因与小鼠排卵数间关系.结果 ①在5对引物中只有引物P2和P5扩增产物存在多态性,引物P2扩增产物存在两种基因型AA和AB型,其中AB型发生(C674A)突变,这种突变导致编码的140位氨基酸由谷氨酰胺变为赖氨酸.②引物P5扩增产物存在三种多态类型SSCP-1、SSCP-2和SSCP-3,SSCP-1和SSCP-3型核酸序列比SSCP-2型少25个碱基,SSCP-3型除缺失区段外,其他区域碱基序列与SSCP-2型有5处碱基突变,而与SSCP-1型核酸序列有34处碱基差异,经BLAST分析,SSCP-2型与NM_001159769序列相似,SSCP-1型与NM_001159769序列相差较多,而与NG_012313.1序列相似,通过氨基酸序列比对分析,SSCP-3型1652处的A→G的突变导致氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸,1678位G→C的突变使原密码子TAC(酪氨酸Y)变为TAG(终止子).③引物P2 AA型(27.27±8.52)与AB型小鼠的平均排卵数(25.92±11.73)间差异无显著性(P>0.05);引物P5 SSCP-2型平均排卵数(35.00±14.58)显著高于SSCP-3型平均排卵数(19.50±7.94) (P <0.05),SSCP-1型(26.2±8.18)与SSCP-2型、SSCP-3型平均排卵数间差异无显著性(P>0.05).结论 明确了Lrh-1基因序列差异与小鼠排卵数性状间关系,为深入研究Lrh-1基因对动物生殖调控机理提供依据. 相似文献
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目的应用鼠胚质控中的小鼠胚胎体外培养模型,探讨两种胚胎培养方式(四孔皿与微滴法)在单胚观察时间上的差异以及对2-细胞鼠胚体外发育潜能的影响。方法取6-8周龄的昆明白雌性小鼠。采用HMG10IU促排卵,48 h后注射HCG 10IU促卵泡成熟,取形态正常的2-细胞鼠胚。每5-10个胚胎培养在含500μL培养基的四孔皿中(A组),或单个胚胎接种在含50μL的培养微滴中(B组)。培养后,每隔24 h在倒置显微镜下观察一次,计算单胚观察时间,并检测24 h时的≥4细胞胚形成率、48 h的融合胚形成率7、2 h的囊胚与扩张囊胚形成率、96 h囊胚孵化率。结果两种培养方式于同一试验条件下分别试验5次,A组培养83个胚胎,B组培养69个2-细胞鼠胚。在每一个观察点上,微滴培养的单胚观察时间远超过四孔皿培养(P〈0.001)。但两组各时间点的胚胎发育率相似,无显著差异(P〉0.05)。结论尽管微滴单胚培养方式的胚胎暴露培养箱外时间长,但与四孔皿多胚培养方式比较,两者间2-细胞鼠胚的体外发育潜能相似。 相似文献