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为探讨沙棘hrh-miR319e与转录因子AP4间的靶向关系,并分析其在种子发育过程中的表达,以不同发育期的种子为材料,运用RNAhybrid软件预测hrh-miR319e成熟体序列与其候选靶基因AP4的3′-UTR区的结合位点,构建pcDNA3.1+pmirGLO-AP4和pcDNA3.1-hrh-mir319e+pmirGLO-AP4载体,用双荧光素酶报告基因检测方法验证hrh-miR319e与候选靶基因AP4间的靶向关系,并采用qRT-PCR方法分析hrh-miR319e与AP4基因在沙棘不同发育期种子中的表达变化。结果显示:(1)生物信息学预测AP4-3′-UTR区与hrh-miR319e成熟体序列完全互补。(2)荧光检测显示pcDNA3.1-hrh-mir319e+pmirGLO-AP4质粒显著抑制荧光素酶活性(P<0.001)。(3)不同发育期种子中hrh-miR319e的表达量总体呈现出先明显上升后明显降低的变化趋势,而AP4基因的表达量则呈现出先降低后上升的趋势;当hrh-miR319e的表达量在花后80 d达到最高水平时,‘新俄3号’种子中为3.146、‘绥棘1... 相似文献
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转录因子WRI1(WRINKLED 1)在油脂合成过程中发挥重要调控作用,其转录和翻译水平调控机理以及下游的靶基因现已基本明确,但尚未见其转录后调控的报道。为探讨沙棘(Hippophae rhamnoides) hrh-miRn458与转录因子WRI1之间的靶向关系,并阐明其在果肉和种子发育过程中的表达模式,通过生物信息学方法预测hrh-miRn458成熟体序列及其与候选靶基因WRI1的结合位点,采用双荧光素酶报告基因检测和RNApulldown技术相结合的方法验证hrh-miRn458与WRI1基因之间的靶向关系,并应用qRT-PCR方法分析hrh-miRn458与WRI1在沙棘不同发育期果肉和种子油脂合成过程中的表达变化。结果表明,生物信息学预测WRI1基因的CDS区第309–327位与hrh-miRn458成熟体序列的15个碱基互补;荧光检测显示pmirGLO-WRI1-WT+hrh-miRn458 mimics显著抑制荧光素酶活性(P<0.001); RNA pull down实验证实hrh-miRn458与WRI1存在互作关系;不同发育期果肉和种子中hrh-miRn45... 相似文献
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