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Argonaute亚族蛋白对人类肿瘤细胞周期的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
Argonaute(Ago)家族蛋白与小的非编码RNAs(siRNAs, miRNAs, piRNAs)生物发生和细胞功能密切相关.它可以结合小RNAs,调控蛋白质的合成或影响mRNA的稳定性,即RNA干扰(RNAi),并且参与Piwi相关RNAs(piRNAs)的生成.人类Argonaute蛋白家族包括8个成员,对其中的4个(Ago1~Ago4)mRNAs进行了实时定量PCR(qRT-PCR)检测,其在许多细胞中共表达,与细胞生长紧密相关.针对人乳腺癌MCF7和子宫颈癌HeLa细胞系,通过下调Ago亚族蛋白表达量,研究其在细胞周期中的调控作用.MTT实验证明,Ago蛋白表达缺失导致细胞增殖活性显著下降(P < 0.01),生长受阻.进一步研究揭示,细胞周期在G0/G1期发生停滞,其中Ago1(P < 0.01)和Ago4(P < 0.05)的作用尤为明显,但并不引发凋亡.虽然具体调控机制尚不清晰,但在人类肿瘤细胞中Argonaute蛋白可直接或间接地参与细胞周期进程的调控. 相似文献
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凡纳滨对虾ANT2 基因的克隆及低温表达谱分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为研究凡纳滨对虾适应低温的分子机理, 实验对从低温处理凡纳滨对虾抑制性消减文库中筛选出的一个360 bp EST 序列进行了研究。首先, 同源比对显示该EST 片段与其他物种的ANT2 基因高度同源, 命名为凡纳滨对虾ANT2 基因(LVANT2); 其次, 通过构建凡纳滨对虾肝胰腺全长cDNA 文库, PCR 扩增获得LVANT2 基因的全长cDNA1540 bp, 其中包括1011 bp 的完整开放阅读框, 编码336 个氨基酸残基。然后, 对基因进行了不同组织和低温处理的表达谱分析: (1)组织表达谱的结果显示, 该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量最高; (2)在不同低温处理下的表达结果显示, 该基因在15℃处理下基因表达量发生显著变化, 13℃开始呈下调表达, 11℃时表达量又升高; 13℃低温处理不同时间发现该基因在12h 内表达量发生显著变化,48h 后表达量最高。LVANT2 基因的低温诱导表达模式说明其可能在凡纳滨对虾低温适应中发挥作用
相似文献
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本文介绍用改进的组织电泳及快速酶活性显色法对鸡胚脊髓及小鼠脏器组织切片中可溶性和膜结合性同工酶的分析研究。结果表明:本方法能成功地将鸡胚脊髓中的LDH同工酶分成15条亚带,胆碱酯酶分成10余条亚带,琥珀酸脱氢酶分成8条亚带,并将小鼠脏器组织中的LDH同工酶分成34条亚带,非特异性酯酶分成50余条亚带。为对不同物种同工酶的亚基组成、组合类型与酶谱变化的分析、动物组织种属的鉴定与临床标本的鉴别诊断提供了依据和实验手段。 相似文献
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中国南瓜曲叶病毒DNA A的克隆及其全序列 总被引:1,自引:0,他引:1
对引起我国南瓜曲叶病的病毒分离物DNA的克隆和序列分析表明,中国南瓜曲叶病毒DNA A由2741个核苷酸组成,共编码6个开放阅读框(ORF),其中病毒链有2个ORF:AV1(256aa)和AV2(140aa),AV1为外壳蛋白基因;病毒链的互补链有4个ORF,AC1(243aa)编码复制酶基因,AC2(134aa)编码反式激活蛋白,AC3(136aa)和AC4(172aa),该病毒属于旧世界Begomoviruses,是一个粉虱传播的联体病毒。 相似文献
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康氏木霉B—7和黑曲霉X—15原生质体的形成和再生 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了康氏木霉B-7和黑曲霉X-152株纤维素酶高产菌株的原生质体制备与再生。结果表明,采用纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合酶液,可成功地制备2株真菌的原生质体。其中,B-7以这3种酶的配比6:5:2为最佳,X-15以8:4:2为最佳。原生质体形成的缓冲液系统均以0.2mol/L,pH6.0磷酸盐缓冲液为宜,渗透压稳定剂则分别以0.6mol/LNaCl和0.6mol/L蔗糖为宜。以菌龄18h(B-7)和16h(X-15)2株真菌的菌丝体,在37℃下酶解90min可获得最适量的原生质体,产量分别达9×106个/ml和1.9×107个/ml,且其再生率也较高,均达95%左右。 相似文献
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小RNA药物应用于临床的主要技术瓶颈在于如何高效、低毒地将小RNA分子传递到它发挥功能的场所.基于细胞穿透肽在小RNA透皮给药的临床应用中所取得的进展,本文系统评述了近年来细胞穿透肽在小RNA的体内、体外传递方面的研究动态,分析了细胞穿透肽的结构改造对肽/小RNA复合物转染进入细胞发挥功能的影响,展望了细胞穿透肽作为小RNA的体内药物传递载体的发展方向. 相似文献
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改进的薄层组织电泳技术对发育过程中鸡胚腰段脊髓蛋白质变化的分析 总被引:1,自引:1,他引:1
本文介绍一种改进的结合组织化学和生物化学的电泳方法,用此方法对神经组织中微量蛋白质进行定性、定量和定位的分析。结果表明在不同发育阶段中,鸡胚腰段脊髓中绝大多数蛋白区带表现为色度上的深浅变化,少数区带随发育而丢失或新生,脊髓背腹区域的蛋白区带非常相似,而酸性糖蛋白却表现为腹部多于背部。此外,还分析了鸡胚和鸡(刍鸟)的7种组织中蛋白质区带的差异。 相似文献
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通过非贴壁微球体无血清培养法,体外构建并鉴定了T-淋巴细胞瘤干细胞。采用细胞球悬浮培养方法富集T-淋巴细胞肿瘤干细胞,利用抑制分化作用的抑制剂CHIR99021和PD173074(2i)进行肿瘤干细胞的筛选,采用RT-PCR法检测Sox2、Oct4、Nanog、Klf4、Bmi1、C-Myc干细胞特征基因的表达,进一步采用Western blot验证Oct4蛋白水平表达,流式细胞术分析CD34、CD44抗体表达情况,用PI检测细胞周期,用CFSE观察细胞增殖能力,并将富集的T-淋巴细胞肿瘤干细胞进行裸鼠异体移植实验。在细胞球悬浮培养法基础上,利用具有抑制分化作用的抑制剂CHIR99021和PD173074,成功富集出Hut-102干细胞球。经RT-PCR鉴定,Hut-102干细胞球的其干细胞特征基因Sox2、Oct4、Nanog、Klf4、Bmi1、C-Myc表达均显著性高于Hut-102细胞并且高表达Oct4蛋白;经流式细胞术分析CD34、CD44抗体表达,有74.20%的Hut-102干细胞球表现为CD34+,有90.82%的Hut-102干细胞球表现为CD44+,证明抑制分化药物应用于细胞球悬浮培养方法中,能够有效富集出具有CD34+CD44+表型特征的Hut-102干细胞球;用PI检测细胞周期,富集的Hut-102干细胞球中处于G1/G0期的细胞为64%,处于S期的细胞为30.56%,表明该细胞暂不增殖或处于休止状态;用CFSE检测到富集的Hut-102干细胞球分化增殖能力显著高于Hut-102细胞。在NON/SCID裸鼠中,分别移植Hut-102细胞球和Hut-102细胞,结果显示,前者检测到67.74%±5.32%的淋巴细胞表达Hut-102细胞特异性标记物(CD3),而后者的裸鼠中未检测到,说明Hut102细胞球在NON/SCID裸鼠体内表现了T-淋巴细胞肿瘤干细胞特点和移植能力。首次在传统的非黏连微球体无血清培养法中加入两种抑制剂(CHIR99021和PD173074),富集出大量的微球体,通过干细胞特征鉴定及裸鼠移植实验,证明Hut-102细胞球具有T-淋巴细胞肿瘤干细胞特性。 相似文献
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siRNA诱导的DNA甲基化与肿瘤的发生 总被引:4,自引:0,他引:4
siRNA诱导的基因沉默最早只被认为是发生在细胞质内的转录后水平的调控过程,随着siRNA指导DNA甲基化现象的发现,已证实siRNA可以通过指导基因组表观修饰引起转录水平基因沉默.DNA甲基化曾被预言是致癌作用的一种表观遗传学机制,肿瘤发生过程中抑瘤基因异常沉默涉及到基因启动子区域DNA的甲基化.分析了这两个过程中内在的关系,探索siRNA对肿瘤细胞中基因异常表达的影响和作用.这将有助于肿瘤生物学和表观遗传学的研究,也会为研发防治肿瘤的新方法和新途径提供新的思路. 相似文献
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肿瘤转移是造成癌症难以根治的重要原因之一.近年来越来越多的研究发现,miRNA在肿瘤转移过程中发挥了直接或间接的作用.本研究的目标是找到一种特异性的肿瘤转移相关miRNA,能够作为抑制肿瘤转移的潜在靶标.miR-132是一类与炎症、血管生长、中枢神经系统相关的miRNA,至今还没有研究证明其与肿瘤转移相关.为了验证miR-132与肿瘤迁移的相关性,本研究将miR-132转染入高迁移乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中,检测细胞迁移率的变化.实验发现miR-132能够抑制MDA-MB-231细胞的迁移.为了进一步揭示miR-132抑制细胞迁移的可能机制,本研究通过生物信息学手段寻找并鉴定了3种可能与肿瘤转移相关的miR-132的靶基因,它们分别是CHIP(STUB1)、G3BP1、G3BP2.分别比对MCF7与MDA-MB-231细胞,及转染miR-132和对照组MDA-MB-231细胞中以上3种基因的表达差异,我们发现G3BP1、G3BP2可能参与miR-132对肿瘤转移的调控.本研究首次报道miR-132与肿瘤转移的关系,并揭示了miR-132调节肿瘤转移的可能机制,说明了miR-132具有作为特异性抑制肿瘤转移靶标的潜力,为抑制肿瘤转移提供一个新的靶点. 相似文献