乳酸杆菌脂磷壁酸抑制脂多糖诱导的大鼠肝脏Kupffer 细胞TLR4 通路 的激活

目的：探讨保加利亚乳酸杆菌脂磷壁酸（Lipoteichoic Acid of ,LBG-LTA）对大鼠肝脏Kupffer细胞 Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）信号通路的作用。方法：雄性健康Wistar大鼠10 只（2 月龄,体重250～300 g）处死后,分 离培养肝脏Kupffer 细胞;培养LBG,并提取制备LBG-LTA;Kupffer 细胞,在有或无LBG-LTA（0.1、1、10 ug/mL）预处理的情况 下,给予脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,1 EU/mL）刺激后,Western blot 检测各孔Kupffer细胞的TLR4、TANK 结合激酶1（TANK binding kinase-1,TBK1）及核中的核因子B（nuclear factor-kB,NF-kB）水平,酶联免疫吸附法检测各孔培养上清中的肿瘤坏死因子 alpha（tumor necrosis factor-alpha,TNF-alpha）和白介素1beta（interleukin-1beta,IL-1beta）。结果：分离的Kupffer 细胞经不同浓度LBG-LTA 预处理 后,其在LPS刺激下所表达的TLR4、TBK1、核中NF- kB的水平及生成的TNF-alpha和IL-1茁明显低于无LBG-LTA预处理情况下的 LPS 孔（P<0.05）,且LBG-LTA 的作用呈浓度依赖性。结论：LBG-LTA以浓度依赖的方式抑制了LPS 诱导下大鼠Kupffer细胞 TLR4 通路的激活。     

乳酸杆菌脂磷壁酸通过下调脂筏中Lck 激酶水平抑制大鼠肝脏Kupffer 细胞TLR4 通路

目的:探讨保加利亚乳酸杆菌脂磷壁酸(Lipoteichoic Acid of Lactobacillus bulgaricus,LBG-LTA)是否能下调细胞膜脂筏中的淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck),进而抑制大鼠肝脏Kupffer细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路。方法:分离培养10只雄性Wistar大鼠的Kupffer细胞;培养LBG并制备LBG-LTA;有或无LBG-LTA、脂筏裂解剂甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrine,MβCD)、Lck抑制剂PP2分别预处理情况下,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激Kupffer细胞,提取各组细胞的膜-浆蛋白及核蛋白,蔗糖密度梯度离心法提取膜-浆蛋白中的脂筏及非脂筏组分,Western blot检测脂筏及非脂筏组分中TLR4、TANK结合激酶1(TANK binding kinase-1,TBK1)、Lck及核蛋白中的核因子B(nuclear factor-κB,NF-κB),酶联免疫吸附法检测培养上清中的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)。结果:LPS上调的TLR4、Lck主要在脂筏内(与对照孔脂筏相应数值之比为0.95 0.23 vs 0.0120.0023,1.05 0.26 vs 0.022 0.0052,P均0.05),TBK1主要在非脂筏组分中(与对照孔非脂筏组分数值之比1.02 0.21 vs 0.0480.011,P0.05),核蛋白中的NF-B及培养上清中的TNF-α和IL-1β亦明显升高(与对照孔相应数值之比为0.78 0.16 vs 0.0760.014,189.2 27.1 vs 5.62 0.82,131.6 18.8 vs 7.24 1.14,P均0.05)。与MαCD或PP2一样,LBG-LTA也明显抑制LPS的作用(LTA+LPS孔脂筏中TLR4、Lck与LPS孔相应数值之比为0.15 0.036 vs 0.95 0.23,0.17 0.052 vs 1.05 0.26,非脂筏组分中TBK1与LPS孔的比较为0.25 0.062 vs 1.02 0.21,NF-B、TNF-α及IL-1β与LPS孔相应数值之比为0.17 0.035 vs 0.78 0.16,32.2 4.37 vs189.2 27.1,23.4 3.29 vs 131.6 18.8,P均0.05)。结论:LBG-LTA下调大鼠Kupffer细胞膜脂筏中的Lck,进而抑制其TLR4通路。     

乳酸杆菌培养上清抑制慢性酒精大鼠小肠上皮TLR4-TBK1通路

目的:探讨保加利亚乳酸杆菌培养上清(supernatant recovered from lactobacillus bulgaricus culture MRS broth,LBG-S)对慢性酒精摄入大鼠小肠上皮细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-TANK结合激酶-1(TANK binding kinase-1,TBK1)信号通路的作用。方法:雄性健康Wistar大鼠30只(2月龄,体重250~300 g)分为三组:2月龄对照组(即基线对照组),顺应1周后即处死;9月龄对照组,自由取食标准鼠粮及饮用双蒸水7月;慢性酒精组,9月龄,饮用含25%乙醇的双蒸水连续6月。处死大鼠后,分离培养并计数各组大鼠小肠黏膜中的大肠杆菌和乳酸杆菌;分离并培养各组大鼠的小肠上皮细胞,在有或无LBG-S(10μg/m L)预处理的情况下,给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,10 EU/m L)刺激后,Western blot检测各组大鼠小肠分离上皮细胞中的TLR4及TBK1水平,酶联免疫吸附法检测各组分离小肠上皮细胞培养上清中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)。结果:慢性饮酒后,大鼠肠腔内乳酸杆菌数量明显低于相应对照组(P0.05);大肠杆菌数量无明显增加。LPS能明显升高各组分离大鼠小肠上皮细胞TLR4、TBK1以及生成TNF-α和IFN-γ的水平(P0.05),且慢性酒精组升高幅度明显大于2月龄及9月龄对照组(P0.05)。LBG-S的预处理能明显抑制LPS对各组分离大鼠小肠上皮细胞TLR4、TBK1以及生成TNF-α和IFN-γ水平的上调作用(P0.05)。结论:慢性酒精摄入导致大鼠小肠上皮TLR4-TBK1通路对LPS的高敏感性,LBG-S能明显抑制这一高敏感性。