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甘蔗茎杆特异表达基因启动子的克隆及初步分析 总被引:1,自引:0,他引:1
甘蔗茎秆是利用转基因方法生产重组药用蛋白或有价值的化合物的理想器官,构建能在甘蔗茎秆中高水平表达异源蛋白质的表达载体是非常有意义的。而一个高效表达的载体,启动子则是其最重要元件之一,因此,茎秆特异性启动子的获得是甘蔗作为生物反应器的前提。利用染色体步移法克隆到甘蔗己糖转运蛋白基因PST2a 5′端上游的一段长1968bp的序列( Ppst2a ),经序列测定及软件分析表明,该序列具有典型的启动子结构。此序列置换植物表达载体pCAMBIA1301上的CaMV 35S启动子,构建植物表达载体,命名为pCAMBIA1900,该启动子下游为gus基因。利用基因枪法转化甘蔗的茎和叶,对gus基因的瞬时表达进行测定,结果表明所获得的己糖转运蛋白基因启动子只在甘蔗茎中驱动gus基因瞬时表达,该启动子具有茎秆特异性。 相似文献
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巨龙竹的组织培养和快速繁殖 总被引:4,自引:0,他引:4
1植物名称巨龙竹(Dendrocalamuss sinicus),又名歪脚龙竹. 2材料类别种子和幼枝. 3培养条件基本培养基为MS.(1)芽诱导培养基:MS 6-BA 2.0 mg·L-1(单位下同) NAA0.2 PVP 250;(2)丛生芽增殖培养基:MS 6-BA2.04-KT 0.5 椰子水100mL·L-1;(3)生根培养基:1/2MS NAA 1 IBA 1.以上培养基均添加3%蔗糖、7 g·L-1卡拉胶,pH 5.8.培养温度为25℃,生根期间,光照度为1 000 lx,光照时间12 h·d-1. 相似文献
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T-DNA转移研究进展 总被引:5,自引:0,他引:5
植物遗传转化技术近年在农作物性状改良、植物生物反应器利用以及基因功能鉴定等方面得到了广泛的应用.T-DNA转移是植物细胞农杆菌介导遗传转化整合和表达外源基因的基础.农杆菌Ti质粒vir基因编码蛋白、农杆菌一些染色体基因编码蛋白及植物细胞一些基因编码蛋白或因子均参与T-DNA转移.转移过程包括农杆菌对植物细胞的识别、附着,细菌对植物信号物质的感受,细菌vir基因的诱导表达,T复合体的形成,跨膜运输,进核运输和整合等一序列过程.植物细胞因子与农杆菌T-DNA转移相关蛋白的相互作用最近被认为在T-DNA转移过程中起重要作用. 相似文献
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对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。 相似文献
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1植物名称见血封喉[Antiaris toxicaria(Pers.) Lesch.],又名箭毒木、加独。2材料类型枝条。3培养条件以MS为基本培养基。(1)芽诱导培养基:MS 6-BA 2.5 mg·L~(-1)(单位下同) NAA 0.5 3%蔗糖;(2)增殖培养基:MS 6-BA 3.0 KT 1.0 NAA 0.5 3%蔗糖;(3)生根培养基:I/2MS NAA 1.0 0.2 g·L~(-1)活性炭 3%蔗糖。以上培养基均加入8 mg·L~(-1)卡拉胶,pH 5.8~6.2。培养温度25~28 相似文献
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康乃馨ACC氧化酶cDNA的克隆及其反义植物表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以康乃馨(Dianthus caryophyllus L.)花瓣为材料,用改进的异硫氰酸胍一步法提取总RNA,根据已报道的康乃馨ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase,CO)基因的序列设计产合成一对引物,通过RT-PCR方法获得一约1.2kb特异片段,把该片段连接pGEM^(R)-Teasy vector上进行测序,其全长共1156bp,编码区915bp。共编码304个氨基酸残基,序列分析结果表明该序列与GenBankL35152中的康乃馨ACC氧化酶基因的cDNA序列完全相符,推断该基因在康乃馨种内可能是完全或高度保守的,随 后将此片段反向插入植物表达载体pBI121的35S启动子和NOS终止子之间,构建了一反义植物表达载体pBO;又把花特异表达启动子PchsA插入pBI121的HindⅢ Xbal位点构建中间载体pGHB,再把康乃馨ACC氧化酶基因反向插入中间载体pCHB的XbaI Satl位点构建成另一反义植物表达载体pCBO。 相似文献