单克隆抗体对肾综合征出血热病毒50k蛋白的分析

用18株抗肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,以下简称HFRS)病毒McAb,以Western-blot技术分析了纯化的该病毒50k蛋白。结果有7株McAb可与该蛋白反应。这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)亦各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50k蛋白的特性及结构均较复杂,尚须进一步研究。     

从构建的噬菌体抗体库中筛选抗甲肝人单抗

用固相化甲肝抗原,对所构建的噬菌体抗体库进行了3轮淘筛。第3轮淘筛后洗脱下来的噬菌体,较第l轮增加了近100倍。含有抗体重链基因和轻链基因的重组克隆．也由淘筛前的25％增至100％。说明甲肝抗原对抗体库的淘筛,富集了表面呈现甲肝人单抗的噬菌体。经夹心ELISA法筛选到抗甲肝病毒噬菌体抗体,并以竞争抑制实验进一步证实了这些抗体的特异性。     

肾综合征出血热病毒血凝素的研究 Ⅱ.血凝和血凝抑制试验影响因素的探讨

本文探讨了肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝和血凝抑制(简称血抑)试验的主要影响因素,观察到HFRSV血凝素的制备要求较高,4℃保存的效果较好,血凝素对热似有一定的稳定性,血凝作用的条件较为严格,最佳pH在5.7—6.1,鹅血球较为敏感,氯仿法去除血清中非特异性抑制物有效而简便。通过试验条件的模索和方法的改进,使之适用于基层。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究

本文应用JEV-McAb对感染JEV的小白鼠及幼山羊进行实验性治疗,并对乙脑免疫机理作一初步探讨。结果表明,JEV-McAb对经不同途径感染各种JEV毒株的小白鼠都有较好的保护作用,其效果明显优于PeAb。小鼠感染后120小时,大部分已发病,个别已濒死,这时给予混合MeAb或其F(ab′)2,仍可保护约半数存活。McAb对感染JEV的幼羊也有较好的保护作用。羊脑内注入JEV48小时后,出现发热不安等症状,这时由腹腔和椎管两种途径同时给予混合McAb,保护率达100％。存活实验动物脑组织内未分离出病毒;而死亡功物病毒分离阳性,脑组织经双PAP及HE染色证实JEV抗原阳性并伴有脑炎的病理改变。中和活性是JEV-McAb的主要保护方式,中和放价高的MeAb保护率也高。     

肾综合征出血热病毒50K结构蛋白的纯化和鉴定

以HFRS病毒感染的乳小白鼠脑为原材料,用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法制备粗病毒抗原。将此粗制抗原通过抗HFRS病毒MeAb与Separose4B偶联制成的免疫吸附柱,并用3MKCNS洗脱,获得了SDS-PAGE均一纯的特异性病毒结构蛋白,分子量为50,000道尔顿,具有较高的抗原滴度和良好的免疫原性。初步认为该蛋白可能是HFRS病毒的一种囊脱蛋白。     

乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究

本研究根据已知的乙脑病毒(JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT-PCR 技术,一次扩增出了JEV的全长cDNA,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游.阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功.其次,合成一条含有 RNA聚合酶启动子序列的5′引物,利用长模板RT-PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录.转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变.收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法.本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT-PCR快速制备JEV感染性RNA的方法,将为JEV 分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础.     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测流行性出血热病毒抗原

建立了检测流行性出血热(EHF)病毒抗原的双单克隆抗体(McAb)ELISA同接夹心法,用本法和间接荧光抗体技术(IFAT)相比较,IFAT检出感染细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而ELISA检测感染上清中病毒抗原的高峰在第14天,两方法检测179份人工感染EHF病毒的乳鼠脑和肺组织标本,阳性检出率分别为72.1％和68.2％,实验结果表明,本法特异,敏感,简便,不仅可用于EHF病原学研究,也适用于流行病学调查检测大量鼠肺标本。     

单克隆抗体在酶联免疫吸附试验检测单纯疱疹病毒抗原中的实用性

本文采用ELISA双夹心法,通过对70份临床送检标本HSV抗原的检测,评价了单克隆抗体(McAb)在快速检测HSV抗原中的实用性。McAb ELISA法的敏感性为20～30TCID50/0.1ml,临床送检标本病毒抗原的检出与病毒分离结果的一致率为85％。两种McAb混合使用,可以提高方法的敏感性。     

快速IgM抗体捕捉ELISA的建立及其在乙脑早期诊断中的初步应用

用辣根过氧化物酶标记的抗日本脑炎病毒(JEV)种特异性单克隆抗体为结合物,建立了一种快速IgM抗体捕捉酶联免疫测定法(RMAC-ELISA),并初步用于乙脑的快速诊断,取得了良好的效果。该法通过用鞣酸预处理微板,提高反应温度,在稀释液中加入PEG并提高NaCl浓度,用鸡蛋清代替牛血清白蛋白或鸡血清,用自来水代替PBS作为洗液,用快速漱洗3次代替3×5分钟洗涤,用TMBS代替OPD底物,用酶标单克隆抗体代替多克隆结合物等措施,加快了反应速度,缩短了反应时间,简化了操作步骤,提高了敏感性,保证了特异性。从微板预处理至出结果,仅需1小时。由于该法具有简便、快速、特异、敏感等特性,不仅可以用于乙脑的早期诊断及实验室研究,还有可能推广到其它的免疫学检测方法中去。     

用杆状病毒表达系统构建携带JEV E蛋白的逆转录病毒样颗粒

日本脑炎病毒(JEV)为黄病毒属成员,可引起日本脑炎,也称流行性乙型脑炎。该病在我国和亚洲的一些国家和地区仍有流行,具有发病急,病程凶险,病死率高和后遗症严重等特点。目前对该病尚无可靠的特异性治疗方法,临床以支持和对症疗法为主,采用疫苗预防接种仍是控制该病流行的唯一有效的途径。当前使用的疫苗为由感染的鼠脑或培养细胞制备的灭活疫苗。该疫苗为控制日本脑炎的流行起了很