小克银汉霉核糖体DNAPCR扩增产物的限制性片段长度多型性

应用一对寡苷酸引物ＩＴＳ１与ＩＴＳ４对核ＤＮＡＧ＋Ｃ百分数小于３０％的小克银汉霉属的核糖体ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）内转录间区（ＩＴＳ）进行了扩增。测试的属于１０个种和变种的２２株菌都得到了扩增产物，在同属不同种之间扩增的ＩＴＳ片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其ＤＮＡ长度 ：第一组４种１变种，小于７６４碱基对；第二组２种，７６５－８２４ｂｐ；第三组２种１变种，大于８２５ｂｐ。所研究     

小克银汉霉核糖体DNA PCR扩增产物的限制性片段长度多型性(英文)

应用一对寡核苷酸引物ITS1与ITS4对核DNAG＋C百分数小于30％的小克银汉霉（Cunninghamella）属的核糖体DNA（rDNA）内转录间区（YTS）进行了扩增。测试的属于10个种和变种的22株菌都得到了扩增产物。在同属不同种之间扩增的ITS片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其DNA长度分别为;第一组4种1变种,小于764碱基对（bp）;第二组2种,765～824bp;第三组2种1变种,大于825bp。所研究的许多种中,特别是第三组,单凭其PCR产物的长度就能区分开来。但在第一、二组就需借助限制性内切酶的分析才能予以区分。我们选用了RsaI,TaqI;Tru9I,和HinfI4种限制性内切酶,对所有扩增产物进行了限制性片段长度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克银汉霉（Celegans）、巴西玉蕊小克银汉霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各种的限制性酶切图谱,种内非常一致而种与种之间有差别。反之,在某些种其限制性酶切图谱不仅种间互不相同,在种内不同株之间也出现1～3种酶切图型的差异。在这种情况下,只能综合各种资料才能将它们区分开来。本研究肯定了PCR－RFLP在区分小克银汉霉种和变种上的意义,并发现种内个体的差异。这在我们后来所进行的序列分析研究中得到了进一步的证实。     

中国大麦叶绿体DNA和核糖体RNA基因限制性片段长度多型性

本文报道了我们对我国不同大麦区80份大麦品种叶绿体DNA和核糖体RNA基因限制性片段长度多型性的研究。结果表明:rDNA间隔序列长度存在丰富的多样性,80份材料中出现了8种长度变异炎型共组成8种表现型。长度变异类型及其表现型在地理分布上存在着明显的区域性。推测这种分布上的地区性与植物对环境的适应性有关。所用的两个叶绿体DNA克隆片段未检测到限制性片段长度多型性,说明栽培大麦叶绿体DNA变异程度低。     

DNA限制性片段长度多态性

限制性内切酶的发现和应用,给生命科学研究带来了深刻变化。通过测定DNA分子中核苷酸排列顺序,研究基因的结构与功能,从而揭示生命现象的本质,是一个具有十分重要意义的课题。其中利用DNA重组和分子探针技术在基因水平上进行限制性酶切图谱分析,确定DNA结构中具有多态性的核苷酸位点,进行基因定位和异常基因的检测,是近年来分子遗传学研究中颇受重视的一个新领域。Kan和Dozy 1978年首先在β-球蛋白基因中发现第一个DNA多态性位点以来,人们已将注意力从基因表达产物——酶和蛋白质水平的多态性研究     

小鼠DNA的限制性片段长度多态性分析

用人类肌红蛋白基因内含子中３３ｂｐ的小卫星ＤＮＡ重复序列为探针,经ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲ Ｉ正向测序引物和α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ在Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶作用下做合成标记,与６种小鼠的ＤＮＡ限制性片段杂交。结果显示,每个品系平均出现可分辨带纹在１３条以上,不同品系小鼠间的杂交带纹表现出高度的多态性。多态性带纹主要分布在６￣２３ｋｂ区段;同一近交系的不同个体间的带纹特点及分布完全一致;ＣＳ７与ＡＫＲ及二者     

中国普通野生稻核糖体RNA基因限制性片段长度多态性

对９８份普通野生稻、亚洲栽培稻及稻进行了核糖体ＲＮＡ基因间间隔区的限制性片段长度多态性分析。共发现３０种长度变异类型,组成４５种表现型。广西普通野生稻的ｒＤＮＡ间隔序列长度多样性最丰富,２４份材料中长度变异类型,     

用于扩增较大片段DNA的PCR方法

用于扩增较大片段ＤＮＡ的ＰＣＲ方法方向东,陈淳（中科院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室,上海２０００３１）诸江（上海第二医科大学上海血液学研究所,上海２０００２５）关键词ＤＮＡ扩增,ＰＣＲ自从Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合...     

中国普通野生稻核糖体RNA墓因限制性片段长度多态性

对98份普通野生稻、亚洲栽培稻及稻进行了核糖体RNA基因间间隔区的限制性片段长度多态性（RFLP）分析。共发现30种长度变异类型,组成45种表现型。广西普通野生稻的rDNA间隔序列长度多样性最丰富,24份材料中检测到25种长度变异类型,共组成22种表现型。rDNA间隔区长度变异类型的地理分布与纬度相关,高纬度来源的普通野生稻的rDNA间隔区长度较短,与粳稻的长度变异类型相似;低纬度来源的材料rDNA间隔长度趋长,与籼稻的长度变异类型相似;稻的长度变异类型与粳稻相似。提出了华南是野生稻变异中心的观点,并指出对我国野生稻资源进行保护的重要性。     

山羊品种间线粒体DNA限制性片段长度多态性研究

本试验利用ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｃｌⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨａｅⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｍａⅠ和ＸｈｏⅠ计１８种限制性内切酶,研究了来自欧洲,非洲及国内的５个山羊品种共计３３只个体的ｍｔＤＮＡ,共检测了２７处限制性态型,可归结为８种单倍型。结果表明,国内２个百品种的基本单倍型为ＢａｍＨⅠ－Ａ,ＢｃｌⅠ－Ｂ、ＣｌａⅠ－Ａ     

荧光标记DNA扩增片段长度多态性方法的改进

采用常规PCR试剂和合成的接头和引物,其中MseⅠ引物为荧光标记物FAM标记,并对扩增片段长度多态性(AFLP)程序进行了改进,优化了PCR反应和电泳条件,建立了一个新的、有效的反应体系,降低了实验费用,经比较实验结果与AFLP荧光标记试剂盒的实验效果一致.     

水环境细菌16S rNDA限制性片段长度多型性及群落结构分析

用细菌16S核菌体RNA基因（rDNA）限制性片段长度多型性描述了水环境细菌群落结构。从环境水样中直接分离DNA,以细菌特异的引物扩增16S rDNA。构建质粒文库,随机分离重组质粒,用限制性内切酶消化获得16S rDNA基因型,用基因型的种类及频率描述特定水体生境的细菌群落结构,该方法在分析水体隐含遗传多样性、揭示污染的生物学效应和评价水环境质量等方面具有重要的应用价值。     

影响籼稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青（籼稻）和京系１７（粳稻）的ＲＦＬＰ进行了系统分析。结果表明，某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关（ｒ＝０．９６２＊＊）。由此推论，籼粳稻大部分ＲＦＬＰ可能来自大范围ＤＮＡ的结构变化而不是碱基取代。ｃＤＮＡ克隆虽然具有高度的保守性，但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内，探针长度和检测到多态性无相关性。由探针检测到的多态性位     

黑叶猴和灰叶猴的线粒体DNA限制性片段长度多态研究

本文以15种限制性内切酶分析黑叶猴和灰叶猴种内及种间mtDNA多态。从各个样品中分别检出了41—50个酶切位点。综合15种限制内酶的酶切类型,在2只黑叶猴和2只灰叶猴中分别检出了两种限制性类型,并与其4个地理来源相对应。结合恒河猴和红面猴的资料,构建了4种猴科动物的分子系统树。结果表明,黑叶猴和灰叶猴种内的分歧分别始于30和35万年以前,两种叶猴的分离始于190万年以前,猴亚科和疣猴亚科的分离应早于1100万年。叶猴属在中国的扩散不是很晚才发生的。     

人参细胞器核糖体小亚单位DNA的PCR扩增与序列测定

采用CTAB法提取了人参(Panax ginseng)根基因组DNA,根据植物叶绿体16S rDNA和线粒体18SrDNA与细菌16S rDNA序列具有高度同源性,用扩增细菌16S rDNA的一对通用引物(8f,1492r)扩增了人参细胞器核糖体小亚单位DNA.对扩增产物进行了克隆与测序,经多序列比对,扩增片段分别与已知植物叶绿体16S rDNA和线粒体18S rDNA具高度同源性,表明该对引物可以用来扩增绝大多数植物细胞器核糖体小亚单位DNA,可以作为鉴定植物叶绿体16S rDNA和线粒体18S rDNA的一种基本实验技术.     

影响籼粳稻DNA限制性片段长度多态性检测的因素分析

对窄叶青(籼稻)和京系17(梗稻)的RFLP进行了系统分析。结果表明,某种酶多态性检测能力与同时检测到此多态性的其余酶的数目之间存在极显著的正相关(r=0.962**)。由此推论,籼粳稻大部分RFLP可能来自大范围DNA的结构变化而不是碱基取代。cDNA克隆虽然具有高度的保守性,但却具有比基因组克隆更高的多态性检测能力。在实验使用的探针范围内,探针长度和检测到的多态性无相关性。由探针检测到的多态性位点均匀地散布在水稻的12对染色体上,这可能是这两个品种所属的亚种之间的遗传距离较大的原因。     

利用PCR方法鉴定hiTAIL-PCR扩增产物中的质粒骨架片段

T-DNA突变体是研究基因功能的重要资源。高效热不对称交错PCR (hiTAIL-PCR)是克隆突变体中T-DNA插入位点侧翼序列的常用方法。然而我们发现, 利用hiTAIL-PCR克隆到的一些侧翼序列并不对应于宿主的染色体DNA序列, 而是质粒的骨架DNA片段。通过设置1组RB-S4/AC1或者LB-A4/AC1对照反应, 用PCR方法鉴定了hiTAIL-PCR扩增产物中位于T-DNA侧翼的质粒骨架片段。在后续分析中, 通过排除这些片段, 提高了利用hiTAIL-PCR获得宿主染色体DNA片段的效率。同时, 通过调整反应程序, 使得整个PCR的反应时间也大为缩短。在拟南芥(Arabidopsis thaliana) T-DNA突变体drf1侧翼序列的克隆实例中, 对照反应的引入将hiTAIL-PCR中需鉴定的22条扩增产物降至4条, 效率提高了81.8%。     

氮饥饿补糖分批培养小克银汉霉产γ-亚麻酸的研究

对小克银汉霉C2(Cunninghamella sp．C2)发酵生产γ-亚麻酸工艺进行研究,发现氮饥饿补糖能有效地积累γ-亚麻酸,在第5、6、7d每天补糖15g／L,培养10d后生物量、油脂和γ-亚麻酸的产量分别达到47．4g／L、19.74g／L和1．86g／L,为分批培养的2．85、2．08和2．07倍。