表达轮状病毒SA11株Vp4的抗原表位诱导病毒中和抗体生成

以昆虫病毒Flockhousevirus（FHV）外壳蛋白为载体的外源抗原表位表达系统（FHV-RNA2载体系统）．在重组杆状病毒和重组pET系统中构建和表达了SA11Vp4胰酶切割位点两侧和重叠切割位点3个抗原表位氨基酸序列（抗原表位A,aa223~242;抗原表位B,aa243～262;抗原表位C,aa234～251）,并对其免疫原性进行了研究。结果表明：这3个抗原表位能诱导动物产生抗同源氨基酸序列的抗体和抗同源病毒（SA11）感染性的血清中和抗体。研究结果提示：RVVp4胰酶切割位点区氨基酸序列除了具有胰酶切割增强病毒感染力外,还具有诱导动物机体产生血清中和抗体的能力,是RV重组抗原表位亚单位疫苗研究中重要的抗原表位氨基酸序列。     

重组胰酶在口服轮状病毒活疫苗制备中的初步应用

目的探究重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的可行性。方法确立3种重组胰酶的最佳工作浓度;观察3种重组胰酶和猪源胰酶消化MA104细胞并连续传10代(P1~P10),根据消化时间、消化后细胞总数、细胞活率、细胞生长状况、细胞形态变化等方面进行考量比较;观察轮状病毒LH9株经4种胰酶活化,分别接种对应胰酶传代的MA104细胞上培养,通过病毒滴度(lg CCID_(50)/mL)及RNA-PAGE检测,分析重组胰酶替代猪源胰酶在轮状病毒疫苗制备中的应用。结果连续P1~P10代后3种重组胰酶和猪源胰酶在细胞总数、细胞活率及细胞生长状况,差异均无统计学意义(P0.05),显微镜观察细胞形态无明显改变。轮状病毒LH9株经不同胰酶活化,接种MA104细胞P1~P10代培养后,病毒滴度差异均无统计学意义(P0.05),且RNA-PAGE电泳图谱未见差异。结论初步应用试验表明3种重组胰酶均可替代猪源胰酶用于轮状病毒疫苗的制备。     

A组轮状病毒多个结构蛋白抗原表位的串联表达及其免疫原性的检测

从北京腹泻婴儿粪便提取的轮状病毒(rotavirus,RV)(T114株)的RNA中,克隆到轮状病毒结构蛋白基因vp4,vp6和vp7的全长cDNA,对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测,选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽,通过人工合成DNA的方式将这些抗原表位肽基因串联融合成一个阅读框RME(rotavirus multipleepitopes,RME)并构建原核表达载体.大肠杆菌表达的RME在ELISA反应中可被RV多克隆抗体识别,纯化的RME蛋白注射免疫小鼠可诱导特异性免疫应答,产生高滴度的同源氨基酸序列特异抗体和人RV抗体,其中针对RME的IgG抗体滴度达到l∶40 000,针对单个抗原表位EV7、EV6和EV4的IgG抗体滴度达l∶10 000～l∶20 000,针对RV Wa株的IgG抗体滴度较低为l∶2 500,但能特异地中和该病毒对MAC145细胞的侵染.上述结果为新型RV基因工程疫苗的研发提供了论据和基础.     

T细胞表位对新型冠状病毒疫苗诱导抗体反应的影响

目的 通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)S1蛋白与通用型辅助性T淋巴细胞表位(pan HLA DR-binding epitope, PADRE)融合的DNA疫苗,探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法 以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒(pJW4303-S1)、表达S1和PADRE融合蛋白的重组质粒(pJW4303-S1-PADRE)。以人源密码子优化的SARS-CoV-2刺突蛋白基因为模板设计引物,PCR扩增获得基因片段,并将其克隆入真核表达载体pJW4303。对pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE进行PCR扩增和酶切,产物通过琼脂糖凝胶电泳验证,并将重组质粒进行测序。构建正确的质粒转染293T细胞,Western blot验证蛋白体外表达情况。以C57BL/6小鼠为实验动物并分组,采用不同的免疫接种策略进行动物免疫,每次免疫间隔2周,免疫前采血,第6次免疫2周后处死小鼠并采血。通过ELISA检测...     

轮状病毒VP4抗原表位在VP6载体蛋白同一位点表达比较研究

目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原表达质粒,表达携带不同抗原表位的重组嵌合蛋白,用Western blot和中和试验分析重组嵌合蛋白的抗原反应性和免疫原性。结果:成功构建了两个嵌合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达;表达的嵌合蛋白可与相应抗体特异性反应;可诱导豚鼠产生特异性血清抗体;抗嵌合蛋白血清抗体可特异性识别载体蛋白VP6F,Wa株病毒的VP6和VP4蛋白,可中和Wa株病毒在MA104细胞上的感染性;结果表明,所构建和表达的两个以VP6为载体的VP4抗原表位嵌合蛋白具有较高抗原反应性和免疫原性;嵌合蛋白携带的VP4抗原表位具有增强载体蛋白免疫原性作用;为研制新型RV重组蛋白疫苗的奠定了较好的基础。     

广泛交叉反应的抗体控制人B细胞反应以抵抗2009甲型H1N1流行性感冒病毒感染

2009甲型H1N1流行性感冒(简称流感)的大流行表明,流感重配株对全球健康造成威胁。该研究详细分析了原浆细胞及人感染H1N1流感病毒诱导的单克隆抗体反应。与每年流感病毒预防接种诱导的抗体     

重组人巨细胞病毒(HCMV)优势表位嵌合抗原的构建表达以及捕获法检测IgM抗体

勘误：重组人巨细胞病毒(HCMV)优势表位嵌合抗原的构建表达以及捕获法检测 IgM 抗体     

Multiple sites of the cleavage of 17- and 19-mer encephalytogenic oligopeptides corresponding to human myelin basic protein (MBP) by specific anti-MBP antibodies from patients with systemic lupus erythematosus

In contrast to canonical proteases, myelin basic protein (MBP)-Sepharose-purified IgG from multiple sclerosis (MS) and systemic lupus erythematosus (SLE) patients efficiently hydrolyze only MBP, but not many other tested proteins. It was shown that anti-MBP SLE IgGs cleave nonspecific tri- and tetrapeptides with an extremely low efficiency and cannot efficiently hydrolyse longer oligopeptides corresponding to antigenic determinants (AGDs) of HIV-1 integrase. To identify all sites of IgG-mediated proteolysis corresponding to two AGDs of MBP, we have used a combination of reverse-phase chromatography (RPhC), MALDI spectrometry, and TLC to analyze the cleavage products of two (17- and 19-mer) encephalytogenic oligopeptides corresponding to these AGDs. Both oligopeptides contained several clustered major and minor sites of cleavage. The active sites of anti-MBP abzymes are localized on their light chains, while the heavy chains are responsible for the affinity of protein substrates. Interactions of intact globular proteins with both light and heavy chains of abzymes provide high specificity of MBP hydrolysis. The affinity of anti-MBP abzymes for intact MBP was ～10(3)-fold higher than for the oligopeptides. The data suggest that both oligopeptides interact mainly with the light chain of different monoclonal abzymes of total pool of IgGs, which possesses lower affinity for substrates, and therefore, depending on the oligopeptide sequences, their hydrolysis may be less specific.