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【目的】通过缺失井冈霉素高产菌株TL01中4个典型的色素合成基因簇来考察其对井冈霉素产量、菌体生长和发酵液颜色的影响。【方法】通过同源重组双交换对4个色素合成基因簇进行逐个同框缺失,HPLC检测突变株井冈霉素产量的变化,q RT-PCR检测突变株中井冈霉素合成基因转录变化,通过称量菌丝体干重来绘制其生长曲线。【结果】和出发菌株TL01相比,多巴类黑色素基因簇缺失株PY06中井冈霉素的发酵产量由原来的20.6 g/L上升至23.1 g/L,提高了12%;III型聚酮合酶编码的黑色素基因簇缺失株PY07产量无明显变化;II型聚酮合酶编码的孢子色素基因簇缺失和褐黄素基因簇缺失分别导致井冈霉素产量下降11.7%和17.2%。所有缺失突变株中井冈霉素基因簇转录水平和发酵液颜色均没有明显变化。【结论】不同色素基因的缺失对井冈霉素产量和菌株生物量积累具有不同的影响。多巴类黑色素与井冈霉素的生物合成过程竞争共同前体,将其中断后使前体流向井冈霉素生物合成,达到了进一步提高产量的目的。 相似文献
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《生物技术通报》2017,(11)
烟草病毒可侵染危害烟草、番茄、辣椒和土豆等多种作物导致病毒病发生,是生产上难以防治的病害。为了探索蛋白激发子Pea T1与井冈霉素混合使用对烟草病毒病防治的最佳混配比例,本研究选用3-7片真叶的本生烟(Nicotiana benthamiana cv.Huangmiaoyu),分别喷施清水、井冈霉素、蛋白激发子Pea T1及蛋白激发子Pea T1-井冈霉素复合制剂,采用摩擦接种的方式接种TMV-GFP病毒,在紫外光下观察病毒的侵染情况。结果表明,喷施了井冈霉素和蛋白激发子复合制剂的本生烟对TMV的抗性较单剂具有增效作用,其中蛋白激发子Pea T1-井冈霉素按3:4混配的性价比最高,共毒系数达到157.64,相对防效为73.39%。这说明井冈霉素和蛋白激发子Pea T1都能使烟草产生对TMV的系统获得抗性,而其复合制剂更有着叠加效应。 相似文献
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钛离子注入井冈霉素生产菌株的诱变效应 总被引:3,自引:0,他引:3
探讨了利用金属Ti 离子注入井冈霉素生产菌的生物学效应,比较了不同的注入能量与注入剂量对菌株突变效果的影响.在注入能量为15 keV,剂量为1.5×1015 个/cm2离子的诱变条件下,筛选到一株井冈霉素高产菌株C3-6,其发酵生产井冈霉素A组分的效价为19 684 μg/mL,比出发菌株提高41.3%.经多次传代实验表明该菌株的遗传稳定性较好. 相似文献
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《中国生物工程杂志》2006,26(5):121
近日,中国科学院院士、上海交通大学邓子新教授领衔的教育部微生物代谢重点实验室与美国华盛顿大学、俄勒冈州立大学密切合作,成功克隆了具有重要农业应用和经济价值的抗生素农药的生物合成基因簇、从27个基因中定位了合成井冈霉素所需的8个基因,在异源宿主中实现了井冈霉素及其前体有效氧胺的工程化组装和表达,提出了井冈霉素生物合成机理的新模型,也为主要农作物水稻的转基因抗真菌育种提供了全新的候选基因。相关研究成果己在《细胞》系列期刊之一的《化学生物学》2006年4月期上发表。这是该实验室继首例报道聚醚类南昌霉素、多烯类杀念菌素代谢途径和代谢工程研究成果以来,连续第三次在《化学生物学》杂志报道该领域研究的系统性重要成果。 相似文献
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薄层色谱法分离鉴别复方克霉唑乳膏中的硫酸庆大霉素 总被引:2,自引:0,他引:2
用薄层色谱法分离鉴别复方克霉素乳膏中的硫酸庆大霉素。方法:薄层色谱法。结果:复方克霉唑乳膏中的硫酸庆大霉素分离为三个组份,其Rf值分别为0.43、0.46、0.50。结论:硫酸庆大霉素中三个组份用薄层色谱法可以完全分离。 相似文献
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链霉菌原生质体种间融合重组的研究Ⅱ.RVA18——链霉菌原生质体种间融合重组子的一个新代谢产物 总被引:3,自引:0,他引:3
RvAl8是链霉菌原生质体种间融合(亲株为庆丰链霉菌和吸水链霉菌井冈变种)得到的一株原养型重组子所产生的一个新的代谢产物,它存在于细胞内,是一个酸性非水溶性的化合物,能溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和环已烷等,微溶于氯仿。它对革蓝氏阳性细菌和一些植物病原真菌有较强的制菌作用,能引起纹枯病菌的异常分枝。用柱层析和液相色谱相结合的方法提纯后的纯品经紫外、红外、高效液相、核磁共振、质谱等分析证明它是一个理化和生物性质均不同于=亲株产物一一井冈霉素和庆丰霉素的新代谢产物。并将RvAlB的理化、生物性质和二亲株产物井冈霉素及庆丰霉素作了比较。 相似文献
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黑曲霉A3(AspergillusnigerA3)的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ。经7%凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份。经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ的等电点分别为6.8、5.5和6.1。SDS-PAGE测得亚基分子量(Da)分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,3000。三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃i;xⅡ,50℃;xⅢ,50℃。最适反应pHxⅠ,3.5;xⅢ,4.5;xⅢ,5.0。保温一个小时后,酶的半失活温度分别为xⅠ,55.6℃;xⅡ,54.8℃;xⅢ,46.6℃。金属离子Ag+、Hg2+、Ni2+和脲对不同的酶组份具有一定的影响。 相似文献
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黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究 总被引:2,自引:0,他引:2
黑曲霉A3(AspergillusnigerA3)的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ.经7%凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份.经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ的等电点分别为6.8、5.5和6.1.SDS-PAGE测得亚基分子量(Da)分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,31000.三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃;xⅡ,50℃;xⅢ,50℃.最适反应pHxⅠ,3.5;xⅡ,4.5;xⅢ,5.0.保温一个小时后,酶的半失活温度分别为xⅠ,55.6℃;xⅡ,54.8℃;xⅢ,46.6℃.金属离子Ag+、Hg2+、Ni2+和脲对不同的酶组份具有一定的影响. 相似文献
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黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究 总被引:8,自引:0,他引:8
黑曲霉A3(Aspergillus niger A3)的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ。经7%凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份。经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ。的等电点分别为6.8、5.5和6.1。SDS-PAGE测得亚基分子量(Da)分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,31000。三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃;xⅡ 相似文献
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以庆丰链霉菌(SMr,42℃不能生长,产庆丰霉索,可抑制细菌生长)与吸水链霉菌井冈变种(sM5,42℃生长良好,产井冈霉素,不抑制细菌生长)为亲株,在42%PEGl000诱导下进行原生质体融合,在含SM 100μg/ml,42℃培养的再生平板上直接选择耐温型融合子,融台率为1O-5—1O-4左右,经分离传代后可得到稳定的耐温型的单倍体重组子,即可在42℃生长,并且有链霉素抗性和抑制细菌生长的活性。初步测定了四个重组子产生的抗菌物质的性质,都与亲株产生的庆丰霉素、井冈霉素不同,其中F1-38,F1-16和IFM3-32三个重组子的抗生素在波长274mm处有一个紫外吸收小峰,而重组子F6-6有二个活性部分,其一在紫外线下呈荧光,另一则具有酸碱指示剂特性。 相似文献
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双生病毒(Geminivirus)是一种具有孪生颗粒形态的单链环状DNA植物病毒[1].根 据基因组结构特征及传播介体,双生病毒可分为三个亚组[1]:亚组Ⅰ双生病毒全 部为叶蝉传播的单组份基因组病毒,基因组大小在2.6~2.8kb之间,其代表病毒是玉米条纹病毒(MSV);亚组Ⅱ双生病毒是单组份基因组病毒,基因组大小在2.7~3.0kb之间;亚组Ⅲ双生病毒全部为粉虱(Bemisiatabaci)传播,基因组大小为2.5~2.8kb,除番茄曲叶病毒TLCV -AUS [2]等几个病毒为单组份基因组外,大多数亚组Ⅲ双生病病毒均为双组份基因组,稍大的组份叫DNA A,一般编码四个基因,稍小的组份叫DNA B,编码二个基因.烟草曲叶病 毒(TbLCV)和番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)都属于双生病毒亚组Ⅲ[3,4]. 相似文献
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【目的】测试大片段删减低转录区域对菌体生长和井冈霉素产量的影响。【方法】通过转录组分析,选择染色体上连续的基因低转录区域进行大片段缺失,通过Cre-loxP位点特异性重组得到1.2 Mb片段缺失突变株LCY-4。HPLC检测缺失株井冈霉素产量的变化,并测定干重绘制生长曲线。【结果】通过转录组分析,我们在井冈霉素高产菌株TL01染色体左侧末端发现了1.9 Mb的连续基因低转录区,使用Cre-loxP系统对其中的1.2 Mb区域进行大片段缺失,成功得到了1.2 Mb缺失突变株LCY-4。和出发菌株TL01相比,缺失突变株LCY-4中井冈霉素发酵产量基本保持不变,生物量有显著提高,最高增幅达到44%。【结论】1.2 Mb区域的成功缺失,意味着基于转录组分析寻找连续的基因低转录区域并加以缺失的策略的可行性。1.2 Mb片段缺失对菌体生物量积累具有明显促进作用,为后续将其开发成氨基环醇类药物异源表达的通用高产宿主奠定了基础。 相似文献